Runx2和Ezrin基因在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义 被引量：11

1

作者 闵大六 沈赞 +3 位作者 林峰 徐晓丽 黄文涛 姚阳 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期685-689,共5页

背景与目的:Runx2在骨母细胞分化和骨形成中发挥重要作用,其在骨肉瘤中的作用尚不清楚,Ezrin是细胞骨架连接膜蛋白,与多种恶性肿瘤如乳腺癌、结直肠癌等转移相关。本研究旨在探讨骨肉瘤组织中Runx2与Ezrin基因的表达和相关性及其与临床... 背景与目的:Runx2在骨母细胞分化和骨形成中发挥重要作用,其在骨肉瘤中的作用尚不清楚,Ezrin是细胞骨架连接膜蛋白,与多种恶性肿瘤如乳腺癌、结直肠癌等转移相关。本研究旨在探讨骨肉瘤组织中Runx2与Ezrin基因的表达和相关性及其与临床生物学行为之间的关系。方法:应用免疫组化方法检测82例骨肉瘤活检样本石蜡组织中Runx2与Ezrin基因的蛋白表达,并分析其与骨肉瘤患者临床参数及生存之间的关系。结果:Runx2和Ezrin表达阳性率分别为65.9%和59.8%;Runx2和Ezrin的阳性表达与年龄、性别、部位、组织类型、ALP水平无关(P>0.05),而与肺转移相关,有肺转移者Runx2和Ezrin蛋白阳性表达率分别为100.0%和96.3%,显著高于无肺转移者(分别为49.1%和41.8%)(P<0.01);Runx2与Ezrin的表达呈显著正相关(P<0.01);Runx2阳性表达者和Runx2阴性表达者3年生存率分别为13.7%和64.3%,Ezrin阳性表达者和Ezrin阴性表达者3年生存率分别为12.5%和67.7%,Runx2和Ezrin阳性表达者预后较阴性表达者差(P<0.01)。结论:Runx2和Ezrin的表达与骨肉瘤肺转移相关;Runx2和Ezrin阳性表达水平可以作为判断骨肉瘤预后的指标。 展开更多

关键词 骨肉瘤 Runx2基因 ezrin基因 肺转移 生存

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ezrin基因在几种癌细胞中的表达及其5′侧翼区序列转录活性的鉴定 被引量：6

2

作者 高书颖 许丽艳 +3 位作者 孟令英 崔磊 周飞 李恩民 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期1-4,共4页

目的检测ezrin基因在几种癌细胞中的表达及其5′侧翼区序列的转录活力,探讨ezrin基因在癌细胞的表达调控机制。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测ezrin基因在食管癌细胞EC109、EC171、EC8712、SHEEC,胃癌细胞N87... 目的检测ezrin基因在几种癌细胞中的表达及其5′侧翼区序列的转录活力,探讨ezrin基因在癌细胞的表达调控机制。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测ezrin基因在食管癌细胞EC109、EC171、EC8712、SHEEC,胃癌细胞N87、BGC823,肺癌细胞A549、95D,肝癌细胞HepG2,白血病细胞K562和宫颈癌细胞HeLa中的mRNA和蛋白表达水平;采用PCR法构建以ezrin基因翻译起始位点上游-1444/+134序列为启动子的真核细胞表达质粒pGLB-hE(-1444/+134);采用双荧光素酶报告基因分析系统检测-1444/+134序列在EC109、Hela、A549和BGC823细胞中的转录活力。结果ezrin基因在食管癌等几种癌细胞中均有高表达,其5′侧翼区-1444/+134序列具有较强的转录活力。结论ezrin基因5′侧翼区序列的转录活性可能对ezrin基因的几种癌细胞中的高表达起重要作用。 展开更多

关键词 ezrin基因 逆转录聚合酶链反应 WESTERN BLOT检测 双荧光素酶报告基因分析

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肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的顺式作用元件及转录因子的鉴定 被引量：5

3

作者 高书颖 李恩民 +4 位作者 孟令英 崔磊 袁华敏 杜则澎 许丽艳 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第3期288-296,共9页

研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶... 研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶报告基因分析系统检测ezrin基因5′侧翼嵌套缺失序列和位点突变序列的转录活性,鉴定肺癌细胞中ezrin基因的基本启动子区以及关键的顺式作用元件Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58).其次,利用凝胶电泳迁移率变动分析证明,肺癌细胞核蛋白提取物能够与ezrin基因含有关键顺式作用元件的DNA序列结合,形成DNA-核蛋白复合物,而且Sp1结合位点和AP-1结合位点与重组蛋白rhSp1和rhAP-1的结合具有位点特异性.最后,利用瞬时转染实验证实,转录因子Sp1和AP-1(由c-Jun和c-Fos组成的异源二聚体)分别通过Sp1结合位点和AP-1结合位点,增强ezrin基因基本转录活性,而且,过表达转录因子Sp1、c-Jun或c-Fos上调了Ezrin蛋白表达.研究确定,肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的关键顺式作用元件是Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58),与之作用的转录因子Sp1和AP-1对于ezrin基因的转录激活作用至关重要. 展开更多

关键词 ezrin基因 转录调控元件 转录因子 双荧光素酶报告基因分析系统 凝胶电泳迁移率变动分析

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ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达及其意义 被引量：4

4

作者 陶可涛 周家华 郑杰 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2009年第4期307-311,共5页

目的:研究ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达情况及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法:应用RT-PCR与Western blotting检测ezrin和merlin基因在胰腺导管上皮细胞及胰腺癌细胞中的mRNA和蛋白表达水平;利用脂质体分别将ezrin和mer... 目的:研究ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达情况及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法:应用RT-PCR与Western blotting检测ezrin和merlin基因在胰腺导管上皮细胞及胰腺癌细胞中的mRNA和蛋白表达水平;利用脂质体分别将ezrin和merlin基因转染入SW1990细胞株中,应用MTT实验、流式细胞术、迁移实验和细胞黏附实验观察转染基因对细胞增殖、迁移和黏附能力,细胞周期及凋亡的影响。结果:ezrin和merlin基因在8株细胞中均有不同程度的表达,其表达水平与胰腺癌细胞的分化程度无关。与对照组相比,转染ezrin和merlin基因的SW1990细胞增殖速度缓慢(P<0.01);细胞周期表现为G1期细胞增多,S期细胞减少(均P<0.05);细胞与基质的黏附能力明显下降(P<0.01);且转染merlin的SW1990细胞其迁移能力亦有明显降低(P<0.05),而转染ezrin的SW1990细胞其迁移能力无明显统计学意义的改变(P>0.05)。结论:ezrin和merlin蛋白在胰腺癌细胞增殖、进展过程中可能发挥着负性调节作用。 展开更多

关键词 胰腺癌 ezrin基因 merlin基因 增殖 迁移

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HeLa细胞中ezrin基因主要转录调控区的定位分析 被引量：3

5

作者 高书颖 许丽艳 +4 位作者 崔磊 周飞 郭张燕 蔡唯佳 李恩民 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期101-103,共3页

目的:鉴定ezrin基因在HeLa细胞中的主要转录调控区,初步研究ezrin基因的转录调控机制。方法:采用嵌套缺失技术构建一系列以ezrin基因翻译起始位点上游不同长度DNA序列作为报告基因启动子的重组pGLB质粒,利用双荧光素酶报告基因分析系统... 目的:鉴定ezrin基因在HeLa细胞中的主要转录调控区,初步研究ezrin基因的转录调控机制。方法:采用嵌套缺失技术构建一系列以ezrin基因翻译起始位点上游不同长度DNA序列作为报告基因启动子的重组pGLB质粒,利用双荧光素酶报告基因分析系统检测启动子的转录活力,并利用在线分析程序预测ezrin基因主要转录调控区的潜在转录因子结合位点。结果:获得一系列含不同长度ezrin基因5′侧翼区序列的重组pGLB质粒;当ezrin基因5′侧翼区序列从-1324截短到-890时,转录活力降低约80%,从-146截短到-32时,转录活力几乎完全丧失;在-1324/-890和-146/-32区,存在大量的Sp1转录因子结合位点。结论:在HeLa细胞中,ezrin基因的-1324/-890和-146/-32区是主要的转录调控区。Sp1可能是调控基因转录的重要转录因子。 展开更多

关键词 肿瘤 实验性 调节元件 转录 转录因子 荧光素酶类 萤火虫 基因 ezrin 细胞 HeLa

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转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用 被引量：3

6

作者 高书颖 李恩民 +2 位作者 杜则澎 陆晓峰 许丽艳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期695-698,共4页

目的:明确转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用。方法:将转录因子表达载体CMV-Sp1和CMV-Sp3分别转染食管癌EC109细胞,采用定量RT-PCR和Western blot技术检测过表达转录因子Sp1和Sp3对ezrinmR-NA和蛋白表达的影响;将ez... 目的:明确转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用。方法:将转录因子表达载体CMV-Sp1和CMV-Sp3分别转染食管癌EC109细胞,采用定量RT-PCR和Western blot技术检测过表达转录因子Sp1和Sp3对ezrinmR-NA和蛋白表达的影响;将ezrin基因启动子驱动的报告基因表达载体与内参照质粒pRL-TK和转录因子表达载体共转染EC109细胞,采用双荧光素酶报告基因分析系统检测转录因子Sp1和Sp3对ezrin基因启动子的激活作用以及这种激活作用是否依赖于ezrin基因的Sp1结合位点-75/-69。结果:过表达转录因子Sp1和Sp3显著提高EC109细胞ezrinmRNA和蛋白表达水平以及启动子活性。Sp1和Sp3增强ezrin基因启动子活性的作用位点不同,只有Sp1通过-75/-69位点调控ezrin基因启动子活性。结论:转录因子Sp1和Sp3可调控EC109细胞ezrin基因的表达。 展开更多

关键词 ezrin基因 食管癌细胞 转录因子 双荧光素酶报告基因分析系统

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Ezrin增强子敲除可抑制人食管癌Eca-109细胞的增殖和迁移 被引量：3

7

作者 雷悦 野庆松 +4 位作者 卫金岐 李文娜 莫镇涛 张青峰 高书颖 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期29-35,共7页

目的:探讨ezrin增强子敲除对食管癌Eca-109细胞ezrin基因表达、细胞增殖和迁移的影响。方法:将靶向ezrin增强子上、下游的CRISPR/Cas9重组质粒共转染食管癌Eca-109细胞,经嘌呤霉素筛选,获得敲除ezrin增强子的细胞株Eca-C2。用qPCR和West... 目的:探讨ezrin增强子敲除对食管癌Eca-109细胞ezrin基因表达、细胞增殖和迁移的影响。方法:将靶向ezrin增强子上、下游的CRISPR/Cas9重组质粒共转染食管癌Eca-109细胞,经嘌呤霉素筛选,获得敲除ezrin增强子的细胞株Eca-C2。用qPCR和Western blotting分别检测敲除ezrin增强子的Eca-C2细胞中ezrin mRNA和蛋白的表达,用蛋白芯片技术检测MAPK通路相关蛋白的表达,用WST-1法和细胞划痕愈合实验分别检测ezrin增强子敲除对Eca-C2细胞增殖和迁移能力的影响。结果:成功构建稳定敲除ezrin增强子的食管癌细胞株Eca-C2;与对照细胞相比,ezrin增强子敲除细胞ezrin mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(均P<0.05)。Eca-C2细胞中17种被检测的MAPK通路相关蛋白中有9种(AKT、CREB、GSK3b、MKK6、m TOR、P38、P53、P70S6K和RSK1)表达下调,ezrin增强子敲除后细胞的增殖和迁移能力受到明显抑制(均P<0.05)。结论:在人食管癌Eca-109细胞中,敲除ezrin增强子可明显抑制细胞的增殖和迁移。 展开更多

关键词 ezrin增强子 基因敲除 食管癌 ECA-109细胞 增殖 迁移

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Ezrin基因敲低及过表达对脑胶质瘤细胞U87迁移的影响 被引量：3

8

作者 刘乃杰 秦治刚 +4 位作者 孙利波 金星一 叶保国 张金男 朱庆三 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第1期56-59,63,共5页

目的分析Ezrin基因敲低及过表达对脑胶质瘤细胞U87迁移的影响,以探讨脑胶质瘤浸润性生长的机理。方法从U87细胞中扩增Ezrin基因CDS区片段,克隆至表达载体pEGFP-C1中,构建Ezrin基因表达质粒pEGFP-C1/Ezrin。将pEGFP-C1/Ezrin、Ezrin基因s... 目的分析Ezrin基因敲低及过表达对脑胶质瘤细胞U87迁移的影响,以探讨脑胶质瘤浸润性生长的机理。方法从U87细胞中扩增Ezrin基因CDS区片段,克隆至表达载体pEGFP-C1中,构建Ezrin基因表达质粒pEGFP-C1/Ezrin。将pEGFP-C1/Ezrin、Ezrin基因shRNA质粒shRNA-Ezrin-2和pEGFP-C1以脂质体LipofectimineTM2000介导分别转染U87细胞,Western blot分析转染细胞中Ezrin蛋白的表达;划痕试验检测转染细胞的迁移情况。结果克隆的Ezrin基因与GenBank中登录的Homo sapiens ezrin(EZR),transcript variant 1,mRNA序列同源性达99%;该基因编码的氨基酸序列与ezrin[Homo sapiens](Sequence ID:ref|NP_003370.2|,Length:586)的一致性为99%,在第S66P、K258R、P265L和K577R位发生变异,读码框正确。pEGFP-C1/Ezrin转染的U87细胞中Ezrin蛋白的相对表达量(1.17)高于shRNA-Ezrin-2转染组(0.47)和pEGFP-C1转染组(0.82)。划痕试验显示,shRNA-Ezrin-2转染组有少量细胞迁移至划痕处,pEGFP-C1/Ezrin转染组细胞几乎占满划痕处。结论 Ezrin基因敲低可阻止U87细胞迁移,其过表达可促进细胞迁移,表明U87细胞浸润性生长与Ezrin基因的表达有关。 展开更多

关键词 ezrin基因 脑胶质瘤细胞株 细胞迁移

原文传递

胰腺癌细胞ezrin基因转录调控区及其gRNA靶位点鉴定 被引量：2

9

作者 代基强 野庆松 +2 位作者 白圣凯 张青峰 高书颖 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2020年第2期133-138,共6页

目的ezrin基因在胰腺癌中过表达,其上游序列对于基因表达具有重要作用。文章拟敲除胰腺癌细胞ezrin基因转录调控区,鉴定其基因编辑gRNA靶位点。方法将携带ezrin基因上游片段的报告基因表达载体瞬时转染胰腺癌细胞Panc-1,采用双荧光素酶... 目的ezrin基因在胰腺癌中过表达,其上游序列对于基因表达具有重要作用。文章拟敲除胰腺癌细胞ezrin基因转录调控区,鉴定其基因编辑gRNA靶位点。方法将携带ezrin基因上游片段的报告基因表达载体瞬时转染胰腺癌细胞Panc-1,采用双荧光素酶报告基因检测系统,鉴定ezrin转录调控区。使用在线软件预测ezrin转录调控区上下游gRNA靶位点,构建基因编辑重组质粒pX459-sgRNA-L和pX458-sgRNA-R。将重组质粒共转染Panc-1细胞,针对gRNA靶位点进行基因组DNA的PCR扩增和亚克隆测序分析,鉴定ezrin转录调控区的靶向敲除。向转染重组质粒的Panc-1细胞中加入嘌呤霉素初步筛选,采用水溶性四氮唑盐法检测细胞增殖能力。结果荧光素酶报告基因检测结果显示,Panc-1细胞中ezrin基因-1297/-1186片段对SV40启动子和ezrin启动子具有转录增强作用。亚克隆测序结果显示,携带ezrin转录调控区gRNA靶位点序列的重组质粒共转染至Panc-1细胞,细胞基因组DNA出现片段缺失,位于gRNA-L和gRNA-R靶位点之间。细胞增殖实验结果显示,转染重组质粒的Panc-1细胞,其增殖能力显著受到抑制。胰腺癌Panc-1细胞ezrin基因-1297/-1186为转录调控区,其上游gRNA-L和下游gRNA-R序列可作为基因编辑靶点。结论实现了ezrin转录调控区的靶向敲除,Panc-1细胞增殖能力的抑制有可能与ezrin转录调控区的敲除有关。 展开更多

关键词 ezrin基因 胰腺癌 基因编辑 靶向敲除

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Ezrin及L1CAM在结肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系 被引量：2

10

作者 朱恩宇 高凯 +2 位作者 郑斯卓 石刚 张睿 《国际消化病杂志》 CAS 2018年第5期333-336,343,共5页

目的检测结肠癌组织中Ezrin及L1细胞黏附因子(L1CAM)表达,探讨其与临床病理特征的关系及两者的相关性。方法选取67例手术切除的结肠癌组织,以及对应的癌旁正常结肠组织,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)及实时定量聚合酶链反应(qRT-P... 目的检测结肠癌组织中Ezrin及L1细胞黏附因子(L1CAM)表达,探讨其与临床病理特征的关系及两者的相关性。方法选取67例手术切除的结肠癌组织,以及对应的癌旁正常结肠组织,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)及实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织中Ezrin、L1CAM蛋白及mRNA的表达,观察其与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤直径、浸润深度、分化程度、淋巴结转移及TNM分期等临床病理参数的关系,并检验Ezrin与L1CAM的相关性。结果结肠癌组织中Ezrin、L1CAM蛋白及mRNA表达高于正常结肠组织(P<0.001);结肠癌组织中Ezrin及L1CAM蛋白的阳性表达与肿瘤浸润深度、远处转移、淋巴结转移、血管浸润、TNM分期及肿瘤分化程度具有相关性(P均<0.05)。结肠癌组织中Ezrin与L1CAM蛋白的表达量呈正相关(r=0.864,95%CI:0.579 6～0.818 4,P<0.000 1)。结论 Ezrin及L1CAM在结肠癌组织中表达升高,与结肠癌侵袭及转移的恶性临床病理特征相关,且两者具有相关性。 展开更多

关键词 ezrin基因 L1CAM基因 结肠癌

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胃癌组织ezrin表达的意义

11

作者 张俊会 刘斌 +4 位作者 邢传平 高自芳 董亮 哈英娣 钱震 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第20期1905-1907,共3页

目的:研究ezrin基因与胃癌发生发展的关系.方法:采用原位杂交和免疫组化法,检测60例胃癌和15例正常及40例不典型增生胃黏膜中ezrinmRNA及蛋白的表达.结果:在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中ezrinmRNA及蛋白阳性表达率呈递减趋... 目的:研究ezrin基因与胃癌发生发展的关系.方法:采用原位杂交和免疫组化法,检测60例胃癌和15例正常及40例不典型增生胃黏膜中ezrinmRNA及蛋白的表达.结果:在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中ezrinmRNA及蛋白阳性表达率呈递减趋势.组间差异性均有统计学意义(P<0.001);ezrinmRNA和蛋白表达在不同浸润深度、肿瘤大小和有无淋巴结转移组内表达率的差异性有统计学意义(P<0.05),而在年龄、性别和脉管侵犯组内差异无统计学意义(P>0.05).EzrinmRNA和蛋白表达呈正相关(rs=0.990,P<0.01).结论:Ezrin表达降低与胃癌的发生、发展及浸润转移有密切关系. 展开更多

关键词 胃肿瘤 ezrin基因 原位杂交 免疫组织化学

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紫杉醇化疗联合ezrin-siRNA治疗转移性肝癌的实验研究 被引量：2

12

作者 高飞 黄波 +1 位作者 邹浩 张小文 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期133-136,共4页

目的 探讨治疗肝癌复发和转移的新方法.方法 采用体外和体内实验,分别以人高转移性肝癌细胞MHCC97-H和经裸鼠尾静脉注射形成的肝癌肺转移模型为研究对象.体内外实验均分四组进行,分别为正常培养的阴性对照组、单纯紫杉醇化疗组、单纯ezr... 目的 探讨治疗肝癌复发和转移的新方法.方法 采用体外和体内实验,分别以人高转移性肝癌细胞MHCC97-H和经裸鼠尾静脉注射形成的肝癌肺转移模型为研究对象.体内外实验均分四组进行,分别为正常培养的阴性对照组、单纯紫杉醇化疗组、单纯ezrin-siRNA治疗组以及紫杉醇化疗联合ezrin-siRNA治疗组.采用流式细胞仅检测各组肝癌细胞凋亡率、划痕愈合实验检测细胞生长愈合能力、Transwell实验检测细胞侵袭运动能力以及各组肝癌细胞形成肺转移灶的能力.结果 正常培养的肝癌细胞自然凋亡率为2.52％,划痕愈合能力强,穿过人工基底膜的细胞数为52.5±3.9,经裸鼠尾静脉注射后形成肺转移灶的数目为12.5 ±2.4.单纯紫杉醇作用后的细胞凋亡率为11.66％,划痕愈合能力稍差,跨膜细胞数为32.2±3.2,肺转移灶数目为8.2±1.5.单纯ezrin-siRNA处理后凋亡率为2.35％,划痕愈合能力更差,跨膜细胞数为26.6±2.4,肺转移灶数目为7.0±1.3.联合治疗组凋亡率为7.38％,划痕愈合能力最差,跨膜细胞数为19.4±1.1,肺转移灶数目为3.8±0.3.结论 紫杉醇化疗联合ezrin-siRNA治疗在体内及体外均表现出对肝癌细胞生长、运动、侵袭和转移能力有良好的抑制作用,优于单独化疗和单独基因治疗. 展开更多

关键词 肝脏肿瘤 ezrin 紫杉醇 药物治疗 RNA干扰 基因治疗

原文传递

胃癌组织芯片中Ezrin蛋白的表达及意义 被引量：2

13

作者 刘冀龙 《中国医药》 2012年第12期1535-1537,共3页

目的探讨细胞骨架蛋白Ezrin在胃癌组织芯片中的表达及临床意义。方法利用组织芯片技术和免疫组化Envision法检测Ezrin蛋白在385例胃癌（包括114例淋巴结未转移的胃癌和271例淋巴结转移的胃癌）及40例距肿瘤7cm的正常胃组织中Ezrin蛋白... 目的探讨细胞骨架蛋白Ezrin在胃癌组织芯片中的表达及临床意义。方法利用组织芯片技术和免疫组化Envision法检测Ezrin蛋白在385例胃癌（包括114例淋巴结未转移的胃癌和271例淋巴结转移的胃癌）及40例距肿瘤7cm的正常胃组织中Ezrin蛋白的表达情况。所有患者均经外科手术治疗，病理诊断明确，术前未经放、化疗。结果Ezrin蛋白在胃癌中的阳性率为64．9％（250／385），而在正常胃黏膜组织中的阳性表达率为5．0％（2／40），P〈0．05；在淋巴结未转移者中的阳性率为16．6％（64／114），在淋巴结转移者中的阳性率为48．3％（186／271），P〈0．05。Ezrin蛋白在淋巴结转移性胃癌中的高表达高于非转移性胃癌[40．0％（154／385）比14．8％（57／385），P〈0．05]；与胃癌仅侵犯至肌层者相比，胃癌侵犯至浆膜及浆膜外者Ezrin蛋白呈高表达[44．4％（171／385）比9．4％（36／385），P〈0．05]。结论胃癌组织中Ezrin蛋白的阳性表达明显高于正常胃组织，并与胃癌的浸润及转移相关。 展开更多

关键词 ezrin基因 胃癌 组织芯片 淋巴结转移

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Ezrin影响胶质瘤在裸鼠脑内的浸润性生长 被引量：1

14

作者 刘乃杰 方威 +4 位作者 赵丛海 秦治刚 金星一 孙利波 房晓萱 《中国实验诊断学》 2013年第2期232-236,共5页

目的应用RNAi沉默Ezrin基因或表达载体使其过表达以探讨Ezrin基因对脑胶质瘤生长的影响。方法根据GenBank中Ezrin的基因序列,应用Designer3.0(Genepharma)软件设计以Ezrin基因4个位点为靶的shRNADNA oligo,合成并克隆至shRNA载体pGPU6/G... 目的应用RNAi沉默Ezrin基因或表达载体使其过表达以探讨Ezrin基因对脑胶质瘤生长的影响。方法根据GenBank中Ezrin的基因序列,应用Designer3.0(Genepharma)软件设计以Ezrin基因4个位点为靶的shRNADNA oligo,合成并克隆至shRNA载体pGPU6/GFP/Neo;构建其shRNA载体。经BamHⅠ、PstⅠ酶切鉴定和测序分析,再以脂质体LipofectimineTM2000介导转染U87细胞,48h后用RT-PCR和Western blot检测Ezrin mRNA和蛋白的表达,以筛选有效shRNA载体。将转染Ezrin基因有效shRNA载体和表达载体的U87细胞接种裸鼠脑,制备脑瘤动物模型,激光共聚焦显微镜下观察U87细胞在裸鼠脑内的迁移情况。结果经限制性内切酶切和测序鉴定分析所构建的shRNA-Ezrin正确;RT-PCR和Western blot检测结果表明,shRNA-Ezrin-2可沉默Ezrin表达,使其mRNA和蛋白表达量降低,确定为有效shRNA载体。激光共聚焦显微镜下可见shRNA-Ezrin-2转染的U87细胞在裸鼠脑内迁移数少于对照组,pEGFP-C1/Ezrin转染的U87细胞的迁移数相对较多。结论成功构建Ezrin基因的shRNA载体并筛选出有效shRNA载体。Ezrin基因参与U87细胞在裸鼠脑内的浸润性生长。 展开更多

关键词 脑胶质瘤 ezrin基因 浸润 RNA干扰 SHRNA

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Ezrin蛋白在胃癌组织芯片中的表达及意义 被引量：1

15

作者 刘冀龙 《内蒙古医学院学报》 2012年第5期371-374,共4页

目的:探讨细胞骨架蛋白Ezrin在胃癌组织芯片中的表达及临床意义。方法:利用组织芯片技术和免疫组化EnVision法检测Ezrin蛋白在385例胃癌包括淋巴结未转移的胃癌(n=114)、淋巴结转移的胃癌(n=271)及40例距肿瘤7厘米的正常胃组织中的Ezri... 目的:探讨细胞骨架蛋白Ezrin在胃癌组织芯片中的表达及临床意义。方法:利用组织芯片技术和免疫组化EnVision法检测Ezrin蛋白在385例胃癌包括淋巴结未转移的胃癌(n=114)、淋巴结转移的胃癌(n=271)及40例距肿瘤7厘米的正常胃组织中的Ezrin蛋白的表达情况。所有病人均经外科手术治疗,病理诊断明确,术前未经放、化疗。结果:Ezrin蛋白在胃癌中的阳性率为64.9%(211+39/385),而在正常胃黏膜组织中的阳性表达率为5.0%(2/40);胃癌淋巴结未转移者为16.6%(57+7/114),淋巴结转移者为48.3%(154+32/271)。Ezrin蛋白在淋巴结转移性胃癌中的表达高于非转移性胃癌(P<0.05);与胃癌仅侵犯至肌层者相比,胃癌侵犯至浆膜及浆膜外者Ezrin蛋白呈高表达(P<0.05)。结论:胃癌组织中Ezrin蛋白的阳性表达显著高于正常胃组织,并与胃癌的浸润及转移相关。 展开更多

关键词 ezrin 胃癌 组织芯片 淋巴结转移

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HeLa细胞ezrin基因基本启动子区转录调控元件的鉴定

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作者 高书颖 李恩民 +3 位作者 崔磊 孟令英 杜则澎 许丽艳 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期721-725,共5页

目的鉴定HeLa细胞中调控ezrin基因基本启动子活性的顺式作用元件,探讨ezrin基因在HeLa细胞的表达调控机制。方法采用碱基定点突变实验和双荧光素酶报告基因分析系统,检测在HeLa细胞中Sp1结合位点(-75/-69,相对于转录起始位点)和AP-1结... 目的鉴定HeLa细胞中调控ezrin基因基本启动子活性的顺式作用元件,探讨ezrin基因在HeLa细胞的表达调控机制。方法采用碱基定点突变实验和双荧光素酶报告基因分析系统,检测在HeLa细胞中Sp1结合位点(-75/-69,相对于转录起始位点)和AP-1结合位点(-64/-58)对人ezrin基因基本启动子活性的影响;采用电泳迁移率变动分析法(EMSA)实验,检测ezrin基因基本启动子区序列与HeLa细胞核蛋白提取物的特异性结合活性。结果在HeLa细胞中,单独删除和置换Sp1结合位点或AP-1结合位点,ezrin基因基本启动子活性降低50%左右;同时置换Sp1结合位点和AP-1结合位点,启动子活性几乎完全丧失。ezrin基因基本启动子序列能够与HeLa细胞核蛋白提取物相结合。结论HeLa细胞中,Sp1结合位点和AP-1结合位点为ezrin基因基本启动子区的重要转录调控元件,有可能存在某种转录因子与之结合,激活ezrin基因转录。 展开更多

关键词 ezrin基因 基本启动子 电泳迁移率变动分析 定点突变 荧光素酶活性检测

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鼻咽癌细胞中ezrin基因启动子上游序列转录调控特性的研究

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作者 郭秀璞 于洁 高书颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期8-11,共4页

目的:研究鼻咽癌细胞中ezrin基因启动子上游序列的转录调控特性。方法:构建一系列携带ezrin基因-1541/-706序列的报告基因表达载体,ezrin基因-1541/-706序列以正向和反向分别连接至不含启动子的报告基因上游、ezrin启动子上游、SV40启... 目的:研究鼻咽癌细胞中ezrin基因启动子上游序列的转录调控特性。方法:构建一系列携带ezrin基因-1541/-706序列的报告基因表达载体,ezrin基因-1541/-706序列以正向和反向分别连接至不含启动子的报告基因上游、ezrin启动子上游、SV40启动子上游、ezrin启动子或SV40启动子控制的报告基因下游,将质粒转染CNE2细胞,检测荧光素酶活性。结果:CNE2细胞中,当-1541/-706序列正向位于报告基因上游时表现出启动子活性,其转录激活作用约为ezrin启动子的50%;反向连接时无启动子活性。而且,当-1541/-706序列正向位于ezrin启动子或SV40启动子上游时,显著提高荧光素酶表达;当反向位于启动子下游、正向或反向位于启动子控制的报告基因下游时,转录增强作用消失。结论:CNE2细胞中ezrin基因启动子上游序列具有转录激活和转录增强作用,这种作用具有DNA序列位置和方向依赖性。 展开更多

关键词 鼻咽癌 ezrin基因 双荧光素酶报告基因分析系统 转录调控

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siRNA干扰ERK1/2表达对食管癌细胞ezrin基因的转录调控作用

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作者 高书颖 李恩民 +2 位作者 陆晓峰 杜则澎 许丽艳 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期491-494,共4页

目的检测siRNA干扰细胞外信号调节激酶ERK1/2基因表达对ezrin基因的转录调控作用,探讨食管癌细胞ezrin基因的表达调控机制。方法采用定量RT-PCR技术,检测转染ERK1/2siRNA对食管癌EC109细胞ERK1/2和ezrin基因mRNA表达水平的影响;采用双... 目的检测siRNA干扰细胞外信号调节激酶ERK1/2基因表达对ezrin基因的转录调控作用,探讨食管癌细胞ezrin基因的表达调控机制。方法采用定量RT-PCR技术,检测转染ERK1/2siRNA对食管癌EC109细胞ERK1/2和ezrin基因mRNA表达水平的影响;采用双荧光素酶报告基因分析系统,检测siRNA干扰ERK1/2表达对EC109细胞ezrin基因启动子活性的影响。结果在食管癌EC109细胞中,转染ERK1/2siRNA,降低ERK1/2和ezrin基因的mRNA表达水平以及ezrin基因启动子活性。结论 ERK1/2对食管癌细胞ezrin基因的转录具有调控作用。 展开更多

关键词 ezrin基因 食管癌细胞 定量RT-PCR 细胞外信号调节激酶1/2 荧光素酶活性检测

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食管癌细胞ezrin基因启动子TPA反应性的研究

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作者 高书颖 李恩民 +2 位作者 杜则澎 陆晓峰 许丽艳 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2009年第5期358-361,共4页

背景与目的:研究食管癌细胞ezrin基因启动子的TPA反应性以及TPA诱导ezrin基因转录的MAPK信号转导途径。材料与方法:应用转录因子数据库分析预测ezrin基因-87/+134序列的潜在转录因子结合位点和TPA反应元件;采用双荧光素酶报告基因分析系... 背景与目的:研究食管癌细胞ezrin基因启动子的TPA反应性以及TPA诱导ezrin基因转录的MAPK信号转导途径。材料与方法:应用转录因子数据库分析预测ezrin基因-87/+134序列的潜在转录因子结合位点和TPA反应元件;采用双荧光素酶报告基因分析系统,检测ezrin基因-87/+134序列的启动子活性和TPA反应性,TPA反应元件结合蛋白Sp1和AP-1对ezrin基因的转录激活作用,以及MAPK抑制剂对TPA诱导激活的ezrin基因转录的抑制作用。结果:ezrin基因-87/+134序列存在潜在TPA反应元件,具有启动子活性;5ng/mlTPA显著增强ezrin基因启动子活性(P<0.01);Sp1和AP-1对ezrin基因具有转录激活作用;MEK1/2特异性抑制剂U0126和PD98059降低TPA诱导的ezrin基因转录激活作用。结论:食管癌细胞中,ezrin基因启动子具有TPA反应性;TPA可能通过MEK/ERK1/2磷酸化Sp1/AP-1途径调控ezrin基因转录。 展开更多

关键词 TPA反应性 ezrin基因 食管癌细胞 启动子活性 双荧光素酶报告基因分析系统

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Ezrin在人脑星形细胞瘤中的表达及意义

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作者 毛捷 袁贤瑞 +2 位作者 徐善水 江晓春 包正夫 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2010年第3期253-255,共3页

目的探讨Ezrin在人脑星形细胞瘤中的表达及意义。方法免疫组化法检测107例星形细胞瘤和10例正常脑组织中Ezrin的表达，结合临床随访资料分析其表达与预后的相关性。结果Ezrin的表达在2组之间的差异有统计学意义（P〈0．05）。星形细胞瘤... 目的探讨Ezrin在人脑星形细胞瘤中的表达及意义。方法免疫组化法检测107例星形细胞瘤和10例正常脑组织中Ezrin的表达，结合临床随访资料分析其表达与预后的相关性。结果Ezrin的表达在2组之间的差异有统计学意义（P〈0．05）。星形细胞瘤中Ezrin阳性表达率为89．7％，其表达与肿瘤恶性程度呈正相关（r=0．551，P〈0．01），临床资料分析发现Ezrin的表达与肿瘤细胞分化、瘤周水肿程度有关（P〈0．05）。Ezrin强阳性表达组和弱阳性＋阴性表达组的术后无瘤生存时间之间差异具有统计学意义（x2=29．85，P=0．000）。结论Ezrin的表达与星形细胞瘤的恶性程度相关，过表达对肿瘤发展起重要作用。 展开更多

关键词 星形细胞瘤 ezrin基因 预后

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