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转基因烟草中外源基因实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：10
1
作者 王盛 谢芝勋 +6 位作者 谢丽基 谢志勤 黄莉 罗思思 邓显文 黄娇玲 刘加波 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期745-749,共5页
【目的】建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法,为转基因植物中外源基因拷贝数的检测提供参考。【方法】采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因(GFP)的拷贝数,以... 【目的】建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法,为转基因植物中外源基因拷贝数的检测提供参考。【方法】采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因(GFP)的拷贝数,以烟草单拷贝的内源核糖核酸还原酶基因(RNR2)作为内参基因,建立相对定量的双标准曲线法检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法。【结果】构建RNR2基因、GFP基因实时荧光定量PCR的标准曲线,分别为y=-0.2858x+5.6695和y=-0.2826x+2.1048,R2分别为0.9994和0.9989,相关性较高。在检测的5株转基因烟草中GFP基因的拷贝数分别为5、8、19、28和45,非转基因烟草植株的GFP基因拷贝数为0。【结论】建立的转基因烟草中外源基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法具有简单、快速、准确等优点,可用于基因工程中对优良转化植株的筛选及外源基因表达量的快速检测和定量分析。 展开更多
关键词 转基因烟草 双标准曲线法 外源基因 拷贝数 SYBR Green I实时荧光定量PCR
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植物外源基因拷贝数及插入位点的检测方法与技术 被引量：8
2
作者 罗滨 陈永康 王莹 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期111-116,共6页
随着转基因技术的快速发展,转基因植物在世界范围内已经大量种植.近年来,转基因植物的安全性越来越受到公众关注.转基因植物安全性与有效性的关键因素是外源基因拷贝数与插入位点.本文综述了近年来植物外源基因拷贝数与插入位点的检测方法.
关键词 转基因植物 外源基因 拷贝数 插入位点
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应用实时荧光定量PCR检测外源基因拷贝数的新方法 被引量：9
3
作者 万艳 李丽玲 陈小佳 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期310-313,共4页
介绍一种采用实时荧光定量PCR法鉴定重组细胞株基因组中外源基因拷贝数的方法.首先根据研究对象建立标准品,以拟检测的外源基因设计特定的引物,得出标准曲线,然后在不同重组细胞株中对外源基因进行Real-Time PCR鉴定,根据结果与标准品... 介绍一种采用实时荧光定量PCR法鉴定重组细胞株基因组中外源基因拷贝数的方法.首先根据研究对象建立标准品,以拟检测的外源基因设计特定的引物,得出标准曲线,然后在不同重组细胞株中对外源基因进行Real-Time PCR鉴定,根据结果与标准品比对得出实际的拷贝数.结果表明:以转染sPDGFRα基因的重组CHO-K1细胞为例,采用该方法,利用标准品制备的标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系,并且具有较大的线性范围(101-105拷贝);测得各重组细胞株外源基因拷贝数不同,3次独立实验表明结果一致.与传统杂交技术鉴定转基因拷贝数相比,该方法具有高效省时、更稳定、高通量和低成本等优点. 展开更多
关键词 外源基因 拷贝数 实时定量PCR
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利用微滴式数字PCR技术分析转基因玉米抗除草剂标记基因EPSP拷贝数 被引量：7
4
作者 王犇 张春 +3 位作者 李向龙 张中保 邹华文 吴忠义 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期70-76,共7页
基于微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)平台,以转基因玉米为例,建立了转基因作物(Genetically modified crops,GM crops)外源基因拷贝数分析方法,对待测样品进行了快速鉴定,并从T_0转基因玉米株系中鉴定出多个单拷贝单株。对该... 基于微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)平台,以转基因玉米为例,建立了转基因作物(Genetically modified crops,GM crops)外源基因拷贝数分析方法,对待测样品进行了快速鉴定,并从T_0转基因玉米株系中鉴定出多个单拷贝单株。对该方法与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法在分析结果的准确性方面进行了比较,从试验数据可以看出,2种检测方法的结果比较一致,单拷贝检测结果高度一致;但是ddPCR试验操作更加简便,试验结果可重复性强,试验数据更加准确可靠。研究表明,ddPCR方法是一种更加便捷、快速和准确的外源基因拷贝数分析新方法,基于其在准确性和灵敏度方面的显著优势,将会在转基因作物的外源基因拷贝数分析中得到广泛的应用。 展开更多
关键词 微滴式数字PCR 转基因玉米 外源基因 拷贝数 绝对定量
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TaqMan荧光定量PCR法检测CHO细胞中外源基因拷贝数的方法建立 被引量：1
5
作者 杨振苹 邢体坤 +3 位作者 宋路萍 刘伟 李艳芳 张静静 《中国当代医药》 CAS 2023年第2期15-19,共5页
目的以β2-微球蛋白(B2M)为内参基因,建立一种检测CHO细胞中外源基因H拷贝数的TaqMan荧光定量PCR方法。方法使用含有目的基因H和内参基因B2M的质粒作为标准品,分别建立目的基因H和内参基因B2M的标准曲线。提取重组CHO细胞基因组DNA,并... 目的以β2-微球蛋白(B2M)为内参基因,建立一种检测CHO细胞中外源基因H拷贝数的TaqMan荧光定量PCR方法。方法使用含有目的基因H和内参基因B2M的质粒作为标准品,分别建立目的基因H和内参基因B2M的标准曲线。提取重组CHO细胞基因组DNA,并对所提基因组中目的基因H和内参基因B2M的拷贝数同时进行qPCR检测。结果成功建立了目的基因H和内参基因B2M的标准曲线,扩增效率分别为92.09%和94.96%。标准曲线的相关系数均在0.99以上,且具有良好的重复性。随着细胞传代的增加,目的基因的拷贝数相对稳定。结论成功建立了TaqMan荧光定量PCR法检测CHO细胞中外源基因拷贝数的方法,该方法可用于外源基因在CHO细胞中的遗传稳定性研究。 展开更多
关键词 TaqMan定量PCR 双标准曲线法 外源基因 拷贝数
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抗草甘膦转基因玉米外源基因ddPCR拷贝数分析 被引量：3
6
作者 余桂容 张维 +3 位作者 杜文平 宋军 陈谦 徐利远 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1707-1712,共6页
【目的】本研究是从前期获得的100余份转基因抗除草剂草甘膦玉米品系中,挑选T抗-1等14个转基因玉米品系进行拷贝数检测。【方法】采用一种新型的拷贝数分析方法——微滴数字PCR技术(droplet digital PCR,简称dd PCR),设计特异引物对外... 【目的】本研究是从前期获得的100余份转基因抗除草剂草甘膦玉米品系中,挑选T抗-1等14个转基因玉米品系进行拷贝数检测。【方法】采用一种新型的拷贝数分析方法——微滴数字PCR技术(droplet digital PCR,简称dd PCR),设计特异引物对外源抗草甘膦基因2m G2-epsps进行绝对定量分析。【结果】供试的14份转基因材料中10份是单拷贝品系。同时,通过引物探针特异性试验、叶片基因组DNA的PCR抑制和浓度检测、转基因玉米的外源基因2m G2-epsps的实时PCR检测和基因组DNA的酶切等系列研究,建立稳定的转基因玉米拷贝数分析的dd PCR检测体系。【结论】微滴数字PCR技术为这批转基因玉米的下一步转基因生物安全评价提供了重要参数,同时建立了转基因玉米(genetically modified maize)外源基因拷贝数dd PCR分析方法。 展开更多
关键词 转基因玉米 草甘膦抗性 外源基因 拷贝数 微滴数字PCR(ddPCR)
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转红色荧光蛋白基因唐鱼外源基因拷贝数的测定 被引量：3
7
作者 樊佳佳 白俊杰 +1 位作者 马冬梅 简清 《生物技术通讯》 CAS 2011年第1期61-65,共5页
目的:测定转红色荧光蛋白基因唐鱼的外源基因拷贝数。方法:以杂合F5代和杂合F6代转红色荧光蛋白基因唐鱼为材料,以其外源插入片段(pDsRed-mylz2)与基因组插入位点5′侧翼区之间的边界序列作为特异性内参片段,同时以外源整合的红色荧光... 目的:测定转红色荧光蛋白基因唐鱼的外源基因拷贝数。方法:以杂合F5代和杂合F6代转红色荧光蛋白基因唐鱼为材料,以其外源插入片段(pDsRed-mylz2)与基因组插入位点5′侧翼区之间的边界序列作为特异性内参片段,同时以外源整合的红色荧光表达载体序列(pDsRed-mylz2)作为目的基因,采用实时荧光定量PCR技术测定外源基因整合的拷贝数。结果:运用外源基因与特异内参在同批次实时荧光定量PCR中的初始拷贝数比值,得到杂合F5代和杂合F6代转红色荧光蛋白基因唐鱼中插入的外源红色荧光表达载体序列pDsRed-mylz2的拷贝数均值均为3。结论:转红色荧光蛋白基因唐鱼的外源基因拷贝数为3。 展开更多
关键词 唐鱼 实时荧光定量PCR 外源基因 拷贝数
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不同外源基因拷贝数背景CHO细胞的宿主细胞蛋白种类的研究 被引量：2
8
作者 高侨 余垚 蔡洁行 《中国医药生物技术》 2020年第2期171-177,共7页
目的研究外源基因拷贝数、生产工艺、细胞多样性对宿主细胞蛋白表达的影响。方法构建空载体CHO K1细胞株,检测其外源基因拷贝数,根据拷贝数的低、中、高对细胞进行分类。使用不同的生产工艺测试低拷贝、中等拷贝和高拷贝的细胞群,观察... 目的研究外源基因拷贝数、生产工艺、细胞多样性对宿主细胞蛋白表达的影响。方法构建空载体CHO K1细胞株,检测其外源基因拷贝数,根据拷贝数的低、中、高对细胞进行分类。使用不同的生产工艺测试低拷贝、中等拷贝和高拷贝的细胞群,观察其宿主细胞蛋白表达之间的差异。最后将三个拷贝数水平的细胞群进行混合,再生产,观察其混合表达的宿主细胞蛋白与单独生产时表达宿主细胞蛋白的差异。结果研究结果显示,不同拷贝数背景的细胞群之间表达宿主细胞蛋白相差6%~13%。相同的细胞进行不同的工艺生产时,也因为基础培养基和补料的不同而使宿主细胞蛋白的种类不同。细胞多样性增加并不能引起宿主细胞蛋白表达的种类增多。结论宿主细胞蛋白的表达与外源基因拷贝数、生产工艺以及细胞群的多样性有关。 展开更多
关键词 CHO细胞 宿主细胞蛋白 外源基因拷贝数 生产工艺 多样性
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转OsDREB3基因大豆外源基因拷贝数的确定及标准分子的构建 被引量：1
9
作者 孙喆 刘营 +2 位作者 张明辉 李璐 高学军 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期61-67,共7页
为建立抗逆转OsDREB3基因大豆快速稳定的品系特异性检测方法,本试验通过实时Real-time PCR方法,以大豆凝集素基因(lectin)作为内源参照基因,确定了外源基因OsDREB3在转OsDREB3基因大豆基因组中的拷贝数为单拷贝,为建立快速、有效的品系... 为建立抗逆转OsDREB3基因大豆快速稳定的品系特异性检测方法,本试验通过实时Real-time PCR方法,以大豆凝集素基因(lectin)作为内源参照基因,确定了外源基因OsDREB3在转OsDREB3基因大豆基因组中的拷贝数为单拷贝,为建立快速、有效的品系特异性检测方法奠定基础.同时,在原有构建的含4种转基因大豆品系特异性序列的标准分子载体上又增加了转OsDREB3基因大豆品系特异性序列,新构建了含有5种转基因大豆品系特异性序列的标准分子及大豆内参照基因(lectin),已完全满足对现有国内覆盖面最大的5种转基因大豆同时、快速筛查检测工作的需要. 展开更多
关键词 转OsDREB3基因大豆 外源基因 拷贝数 标准分子
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聚乙二醇双官能基异端修饰的研究进展 被引量：1
10
作者 张佳唯 廉明明 +3 位作者 石立旺 张大鹏 唐淑坤 彭海生 《中国医药生物技术》 2020年第2期209-215,177,共8页
聚乙二醇(PEG)是一种惰性、非致癌性聚合物,目前是修饰生物活性分子和纳米粒子表面的首选聚合物之一[1-2]。聚乙二醇已被证明可以增强疏水性药物、蛋白质、核酸、脂质体的溶解性、提高稳定性和延长循环时间[3-4]。此外,PEG还能通过增强... 聚乙二醇(PEG)是一种惰性、非致癌性聚合物,目前是修饰生物活性分子和纳米粒子表面的首选聚合物之一[1-2]。聚乙二醇已被证明可以增强疏水性药物、蛋白质、核酸、脂质体的溶解性、提高稳定性和延长循环时间[3-4]。此外,PEG还能通过增强渗透和保留(EPR)效应实现特异性肿瘤靶向治疗[5-6]。PEG现已成为生物技术和生物医学界关注的焦点,广泛应用于大分子与表面的连接、药物和脂质体的靶向性、纳米颗粒功能化等诸多领域[7-11]。 展开更多
关键词 疏水性药物 生物活性分子 致癌性 脂质体 靶向性 肿瘤靶向治疗 提高稳定性 纳米颗粒
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