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鸡柔嫩艾美耳球虫EtMIC-2基因真核表达载体的构建及其在Hela细胞中的表达 被引量：8
1
作者 刘颖丽 李建华 +1 位作者 郑君 张西臣 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1142-1146,共5页
根据GenBank发表EtMIC-2序列设计1对特异性引物,通过PCR技术扩增EtMIC-2基因,将该基因与真核表达载体pVAX1连接,构建了重组真核表达载体pVAX1-EtMIC-2,并用脂质体介导法将其转染Hela细胞。然后通过间接免疫荧光(IFA)、SDS-PAGE和Western... 根据GenBank发表EtMIC-2序列设计1对特异性引物,通过PCR技术扩增EtMIC-2基因,将该基因与真核表达载体pVAX1连接,构建了重组真核表达载体pVAX1-EtMIC-2,并用脂质体介导法将其转染Hela细胞。然后通过间接免疫荧光(IFA)、SDS-PAGE和Western-blot分析检测EtMIC-2蛋白在转染细胞中的表达情况。经测序和序列分析,成功扩增获得了EtMIC-2基因,并成功构建了重组真核表达载体pVAX1-EtMIC-2,Western-blot和IFA表明EtMIC-2蛋白在Hela细胞中得到表达。该结果为柔嫩艾美耳球虫核酸疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 etmic-2基因 真核表达载体 HELA细胞
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E.tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2 DNA疫苗的构建及保护力分析 被引量：5
2
作者 张召兴 张香斋 +6 位作者 李蕴玉 丁咚 张志强 吴同垒 贾青辉 张艳英 李佩国 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期77-81,共5页
为了构建E．tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗，并确定其抗球虫效力。采用RT-PCR方法分别克隆出鸡IL-2和E．tenella河北株EtMIC-2基因，并连接到pMD18-T载体上进行测序；将目的基因克隆到pcDNA3．0载体，构建重组质粒peDNA3．0-IL-... 为了构建E．tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗，并确定其抗球虫效力。采用RT-PCR方法分别克隆出鸡IL-2和E．tenella河北株EtMIC-2基因，并连接到pMD18-T载体上进行测序；将目的基因克隆到pcDNA3．0载体，构建重组质粒peDNA3．0-IL-2-EtMIC-2，并转染293T细胞，用Westernblot方法验证表达。将构建的重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗以50，100，150ug／只的剂量分别在14，21日龄胸肌注射免疫试验鸡，除阴性对照组外，28日龄时经口灌服孢子化E．tenella卵囊4×10 4个，研究其对E．tenella感染后的免疫保护效果。结果表明：成功构建了重组质粒pcDNA3．0-IL-2-EtMIC-2，且能在293T细胞中表达出融合蛋白；3个免疫组的ACI比阳性对照组分别提高了97．63％，127．02％和129．81％，其中免疫剂量为100，150ug时，ACI均达160以上，具有良好的免疫保护效果。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 etmic-2基因 IL-2基因 DNA疫苗
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E.tenella河北株EtMIC-2基因的克隆及毕赤酵母系统表达
3
作者 张召兴 李佩国 +4 位作者 李蕴玉 张香斋 贾青辉 张艳英 丁咚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期939-942,共4页
为表达鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株EtMIC-2蛋白,本试验采用RT-PCR方法克隆出E.tenella河北株EtMIC-2基因,连接到毕赤酵母分泌表达载体pPIC9中,构建重组表达载体pPIC9-EtMIC-2。将其线化后转化到巴斯德毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表... 为表达鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株EtMIC-2蛋白,本试验采用RT-PCR方法克隆出E.tenella河北株EtMIC-2基因,连接到毕赤酵母分泌表达载体pPIC9中,构建重组表达载体pPIC9-EtMIC-2。将其线化后转化到巴斯德毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达,饱和硫酸铵4℃沉淀浓缩后,用His选择镍-亲和层析柱纯化EtMIC-2蛋白。采用SDS-PAGE和Western blot方法验证其蛋白的表达。结果表明,构建的重组表达载体pPIC9-EtMIC-2在毕赤酵母菌中表达出相对分子质量约为45 000的目的蛋白,表达的EtMIC-2蛋白能被E.tenella阳性血清识别,具有良好的免疫反应原性。为进一步研究EtMIC-2蛋白功能及构建DNA疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 etmic-2基因 毕赤酵母系统 Western blot
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鸡柔嫩艾美耳球虫微线蛋白(Etmic-2)与鸡泛素融合蛋白基因的DNA疫苗表达载体的构建 被引量：5
4
作者 苑纯秀 蒋建林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期175-177,共3页
本文用RT_PCR技术从鸡的肌肉组织中扩增出泛素 (ubiquitin_Ub)编码基因 ,再将其定向克隆到真核表达载体pCMV_Script中多克隆位点的BamHⅠ、HindⅢ之间 ,构建成重组质粒pCMV_Ub。经酶切和测序确定为正确后 ,再将来源于E .teella裂殖子的E... 本文用RT_PCR技术从鸡的肌肉组织中扩增出泛素 (ubiquitin_Ub)编码基因 ,再将其定向克隆到真核表达载体pCMV_Script中多克隆位点的BamHⅠ、HindⅢ之间 ,构建成重组质粒pCMV_Ub。经酶切和测序确定为正确后 ,再将来源于E .teella裂殖子的Etmic_2基因克隆到pCMV_Ub质粒中Ub基因下游的SalⅠ位点上 ,经酶切鉴定 ,获得编码Etimc_2基因的真核表达载体pCMV_Ub_mic_2。该载体中的Etmic_2基因与Ub融合表达 ,并将用于DNA疫苗免疫鸡 ,希望融合了Ub的Etmic_2蛋白能更有效的进入MHC_Ⅰ循环 。 展开更多
关键词 鸡 柔嫩艾美耳球虫 微线蛋白 etmic-2 鸡泛素 基因 DNA疫苗 表达载体
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