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层析法纯化马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的质量研究
1
作者 梁凌宇 包正琦 +5 位作者 段丽娟 杨凯 马江 任正祥 戴于栋 高建军 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第1期31-35,共5页
目的 建立一种在现行硫酸铵盐析工艺基础上,采用疏水层析和离子交换层析制备马破伤风免疫球蛋白F(ab’)_(2)的层析纯化工艺,以进一步提高该类产品的纯度及比活性,改善其安全性。方法 通过3种不同工艺(传统硫酸铵工艺、传统硫酸铵工艺+... 目的 建立一种在现行硫酸铵盐析工艺基础上,采用疏水层析和离子交换层析制备马破伤风免疫球蛋白F(ab’)_(2)的层析纯化工艺,以进一步提高该类产品的纯度及比活性,改善其安全性。方法 通过3种不同工艺(传统硫酸铵工艺、传统硫酸铵工艺+一步阴离子交换层析、传统硫酸铵盐析+疏水层析+阴离子交换层析)纯化制备马破伤风免疫球蛋白F(ab’)_(2),然后检测各产物的比活性、纯度、聚合物含量等。结果 采用硫酸铵盐析工艺结合疏水层析和离子交换层析制备的马破伤风免疫球蛋白F(ab’)_(2),比活性均>100 000 IU/g,分子排阻高效液相色谱法检测F(ab’)_(2)含量>97.0%,完整IgG和聚合物含量之和降至0.5%以下,产品质量大幅提升。结论 建立的马破伤风免疫球蛋白F(ab’)_(2)的层析纯化工艺能有效地提高该类产品的纯度、比活性等关键质量,改善产品的安全性,且工艺可控性较好,易于生产放大,适用于马破伤风免疫球蛋白F(ab’)_(2)的规模化生产。 展开更多
关键词 马破伤风免疫球蛋白f(ab’)_(2) 破伤风抗毒素 疏水层析 离子交换层析 硫酸铵盐析 免疫马血清
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低pH孵放法对马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2病毒灭活效果的验证 被引量：2
2
作者 包正琦 段丽娟 +3 位作者 戴于栋 孙伟 田芳园 高建军 《微生物学免疫学进展》 2020年第3期36-41,共6页
目的采用低pH孵放法对马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2样品中辛德毕斯病毒(sindbis virus, SINV)、水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)、脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus, EMCV)的灭活效果进行验证。方法以SINV、VSV... 目的采用低pH孵放法对马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2样品中辛德毕斯病毒(sindbis virus, SINV)、水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)、脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus, EMCV)的灭活效果进行验证。方法以SINV、VSV、EMCV作为指示病毒,将3批马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2的pH调至4.1±0.1,每批12瓶(3 mL/瓶),分别加入333μL指示病毒,25℃放置21 d灭活病毒,同时设置中性对照和阳性对照,并于0 d、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d取样测定剩余病毒滴度,验证低pH孵放法的病毒灭活效果。结果马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2样品经低pH孵放处理21 d后,SINV、VSV和EMCV等3种指示病毒残余病毒滴度均≤0.5 lgTCID50/0.1 mL,灭活效果分别达到5.50~5.83、5.70~6.00和6.00~6.17 lgTCID50/0.1 mL。结论采用低pH孵放法处理马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2中SINV、VSV、EMCV,病毒滴度下降值均>4 lgTCID50/0.1 mL,灭活效果较好。 展开更多
关键词 马破伤风免疫球蛋白f(ab′)2 低pH孵放法 病毒灭活
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免疫亲和层析法对马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)中猪细小病毒的去除效果评价
3
作者 包正琦 段丽娟 +5 位作者 张锐 马宁 刘建光 戴于栋 梁凌宇 高建军 《国际生物制品学杂志》 CAS 2024年第1期29-32,共4页
目的评价马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的免疫亲和层析纯化工艺对猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的去除效果.方法分别采用首次装填和重复使用100次的层析柱,对3批中试规模生产的中间品进行缩小规模的层析工艺去除病毒效果评价.... 目的评价马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的免疫亲和层析纯化工艺对猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的去除效果.方法分别采用首次装填和重复使用100次的层析柱,对3批中试规模生产的中间品进行缩小规模的层析工艺去除病毒效果评价.将PPV指示病毒加至层析前的料液中,分别于层析纯化上样前、流穿、洗脱、在位清洗阶段取样进行病毒滴度检测.结果新装填的免疫亲和层析柱对PPV的去除效果符合要求,洗脱液病毒平均降低量≥4.30 lgTCID_(50)/0.1 ml.免疫亲和层析柱重复使用100次,对PPV的去除效果仍符合要求,洗脱液病毒平均降低量≥4.33 lgTCID_(50)/0.1 ml.结论马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的免疫亲和层析纯化工艺具有良好的PPV去除效果,层析柱重复使用100次与首次使用的病毒去除效果无明显差别. 展开更多
关键词 免疫亲和层析 马破伤风免疫球蛋白f(ab’)_(2) 猪细小病毒 病毒去除
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免疫亲和层析法制备马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2) 被引量：2
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作者 包正琦 段丽娟 +3 位作者 戴于栋 孙伟 杨凯 高建军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期598-602,共5页
目的采用免疫亲和层析法纯化制备马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)。方法破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)免疫马血浆经胃酶消化、加温变性、硫酸铵盐析、明矾吸附、超滤,获得破伤风抗毒素;再经CNBr activated Sepharose 4FF介质偶联T... 目的采用免疫亲和层析法纯化制备马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)。方法破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)免疫马血浆经胃酶消化、加温变性、硫酸铵盐析、明矾吸附、超滤,获得破伤风抗毒素;再经CNBr activated Sepharose 4FF介质偶联TT制成的亲和层析柱纯化,获得马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)。检测其蛋白质含量、分子大小分布、纯度、效价、比活性,并与破伤风抗毒素进行比较。将马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)置(25±2)℃分别保存1、2、3、6个月,测定效价。结果与破伤风抗毒素比较,马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的蛋白质含量平均值由45.6 mg/mL下降至20.03 mg/mL,降低了56%;F(ab')2含量变化较小,聚合物含量由2.92%下降至1.22%,降低了59%;纯度略有降低;效价平均值由2533 IU/mL升高至3733 IU/mL,提高了47%;比活性平均值由55563 IU/g升高至186277 IU/g,提高了335%。加速稳定性试验6个月,马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)效价及F(ab')2含量均在合格范围之内。结论采用免疫亲和层析方法制备了高效价及高比活性的马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2),且稳定性良好。 展开更多
关键词 免疫亲和层析 马破伤风免疫球蛋白f(ab')_(2) 破伤风抗毒素 效价 比活性
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