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A Review: Interactions of Equine Herpesvirus-1 with Immune System and Equine Lymphocyte 被引量:2
1
作者 Nor Dini Rusli Khairiyah Binti Mat Hasnita Che Harun 《Open Journal of Veterinary Medicine》 2014年第12期294-307,共14页
Equine herpesvirus-1 (EHV-1) remains one of the most common viral pathogens affecting horses worldwide presenting as a persistent infection which can establish latency in nerve ganglia (trigeminal ganglion), lymphoid ... Equine herpesvirus-1 (EHV-1) remains one of the most common viral pathogens affecting horses worldwide presenting as a persistent infection which can establish latency in nerve ganglia (trigeminal ganglion), lymphoid tissues of the respiratory tract and peripheral blood lymphocytes. EHV-1 infection induces both humoral and cellular immune responses in horses. Virus neutralising antibody, particularly in the nasopharynx, is to kill free virus shed from infected epithelial cells. Hence this antibody has important functions in reducing virus shedding and spreading infection to cohorts. Cellular immune responses, particularly those carried out by cytotoxic T lymphocyte (CTL), have been shown to be effective in killing virus-infected cells in vitro. This review underlines the state of knowledge regarding immunity to EHV-1 and also its interaction with equine lymphocyte. Finally, the review also includes the importance of the viral immediate early (IE) protein in the pathogenesis of EHV-1. This information can be used as the basis for future research. 展开更多
关键词 equine herpesvirus-1 (ehv-1) LYMPHOCYTE CYTOTOXIC T LYMPHOCYTE (CTL) Immune Response Peripheral Blood MONONUCLEAR cell (PBMC)
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马疱疹病毒1型(EHV-1)gC蛋白的原核表达及其免疫原性分析 被引量:1
2
作者 王美月 胡哲 +2 位作者 何佳 刘荻萩 王晓钧 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第10期876-880,共5页
目的马鼻肺炎由马疱疹病毒1型(EHV-1)和4型(EHV-4)引起,但是二者存在广泛的抗原交叉反应,给两型病毒感染的鉴别诊断带来困难。EHV-1gC糖蛋白(gC1)具有凝集马红细胞的功能,而EHV-4gC糖蛋白不具有此特性,因此获得纯化的gC蛋白有助于建立... 目的马鼻肺炎由马疱疹病毒1型(EHV-1)和4型(EHV-4)引起,但是二者存在广泛的抗原交叉反应,给两型病毒感染的鉴别诊断带来困难。EHV-1gC糖蛋白(gC1)具有凝集马红细胞的功能,而EHV-4gC糖蛋白不具有此特性,因此获得纯化的gC蛋白有助于建立马鼻肺炎鉴别诊断方法以及进一步研究马疱疹病毒感染的免疫分子机制。方法提取病毒基因组DNA,用特异性引物对目的基因片段进行扩增,对正确扩增的基因片段以及克隆载体pET30a(+)分别进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,将所得目的基因片段插入表达载体pET30a(+)中,构建重组质粒pET30a-gC1。经双酶切和序列鉴定为阳性的重组质粒pET30a-gC1转化入大肠埃希菌表达菌株Rosseta中,经IPTG诱导表达目的蛋白并对表达条件进行优化,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重组质粒转化菌经IPTG诱导表达60ku的目的蛋白,大小与预期相符,且在诱导温度为25℃时蛋白呈可溶性表达,诱导温度为30℃时蛋白以包涵体的形式表达。将包涵体电泳后切胶纯化回收,纯化效率相对较好,纯度较高。Western blot检测目的蛋白能被EHV-1和EHV-2感染马血清识别。结论成功构建EHV-1gC基因表达载体,其表达产物具有反应原性,为进一步开展EHV感染的分子诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 马疱疹病毒 糖蛋白C 原核表达 包涵体纯化
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马疱疹病毒1型XJ2015株的增殖、纯化及鉴定
3
作者 贾钦瑞 鲍子磊 +3 位作者 车传忠 郑学功 翟少华 冉多良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期282-285,共4页
目的评价蔗糖密度梯度离心法对马疱疹病毒1型(equine herpesvirus-1,EHV-1)XJ2015株的纯化效果。方法病毒增殖后,收获病毒液,经硫酸铵浓缩、蔗糖密度梯度离心法纯化EHV-1,电镜下观察病毒形态,SDS-PAGE、Western blot、BCA及马体致病性... 目的评价蔗糖密度梯度离心法对马疱疹病毒1型(equine herpesvirus-1,EHV-1)XJ2015株的纯化效果。方法病毒增殖后,收获病毒液,经硫酸铵浓缩、蔗糖密度梯度离心法纯化EHV-1,电镜下观察病毒形态,SDS-PAGE、Western blot、BCA及马体致病性试验鉴定病毒纯化效果。结果纯化后的EHV-1电镜下可见完整的病毒颗粒且形态典型,直径约120 nm,效价可达10^(10.02) TCID_(50)/0.1 mL,回收率为61.7%;SDS-PAGE及Western blot分析显示,纯化病毒杂蛋白显著减少且具有良好的反应原性;纯化后病毒感染马匹出现原发性感染临床症状并出现排毒现象。结论利用蔗糖密度梯度离心法可获得高纯度的纯化病毒株EHV-1-XJ-2015,为进一步研究EHV-1的致病机理及减毒、灭活疫苗的研发提供了参考。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1 蔗糖密度梯度离心 纯化 鉴定
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马疱疹病毒1型QuantStudio^TM 3D数字PCR检测方法的建立 被引量:7
4
作者 雷程红 陈凯云 +6 位作者 徐新峰 胡都斯·艾尔肯 徐军 白梅花 史茜 肖媛媛 王科珂 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第5期1299-1306,共8页
试验旨在建立一种高灵敏性的马疱疹病毒1(EHV-1)3D数字PCR(3D-dPCR)检测方法,对EHV-1病毒含量较低的样品能准确定量检出,实现马鼻肺炎早期诊断及预防。根据EHV-1糖蛋白B基因保守区域设计特异性引物和探针,优化3D-dPCR反应体系中引物探... 试验旨在建立一种高灵敏性的马疱疹病毒1(EHV-1)3D数字PCR(3D-dPCR)检测方法,对EHV-1病毒含量较低的样品能准确定量检出,实现马鼻肺炎早期诊断及预防。根据EHV-1糖蛋白B基因保守区域设计特异性引物和探针,优化3D-dPCR反应体系中引物探针浓度和退火温度,对该方法进行灵敏性、特异性、重复性分析,建立了EHV-1的3D-dPCR方法。本研究建立的3D-dPCR方法,引物和探针最佳浓度分别为0.4和0.4μmol/L,最佳退火温度为60℃,该方法绝对定量曲线的R2=0.998,线性关系良好,与实时荧光定量PCR方法相比灵敏度高10倍左右,最低检出限为5.83拷贝/μL;批内和批间重复性试验变异系数均<3.2%;与EHV-4、马泰勒虫、马病毒性动脉炎的核酸无交叉反应;通过对123份临床样品进行3D-dPCR检测,结果显示,3D-dPCR方法阳性检出率为66.7%,高于世界动物卫生组织(OIE)中EHV-1的实时荧光定量PCR方法阳性检出率64.2%。3D-dPCR方法对病毒含量较高的样品与实时荧光定量PCR结果一致,对病毒含量较低的样品敏感性更高,能有效检出可疑样品。本试验结果表明,建立的3D-dPCR方法检测低拷贝数的临床样品时灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于EHV-1的准确定量检测。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型(ehv-1) 3D数字PCR(3D-dPCR) 绝对定量
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马疱疹病毒1型主要毒力基因分析及TK基因缺失载体的构建 被引量:4
5
作者 范斌 陈卓 +5 位作者 刘建华 鲍子磊 胡月 贾钦瑞 王雪竹 冉多良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第10期2681-2690,共10页
为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)主要毒力基因遗传进化情况并构建TK基因缺失株,本研究以EHV-1XJ2015株DNA为模板,对其主要毒力基因TK、gI和gE全长进行克隆、测序及生物信息学分析,并扩增TK基因左右重组臂TKL和TKR,构建质粒pUC-TKLR,将... 为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)主要毒力基因遗传进化情况并构建TK基因缺失株,本研究以EHV-1XJ2015株DNA为模板,对其主要毒力基因TK、gI和gE全长进行克隆、测序及生物信息学分析,并扩增TK基因左右重组臂TKL和TKR,构建质粒pUC-TKLR,将扩增后的增强绿色荧光蛋白(EGFP,含有CMV+polyA)插入pUC-TKLR质粒,构建TK基因缺失打靶质粒。TK、gI和gE基因同源性分析结果显示,XJ2015株与国外EHV-1分离株TK、gI和gE基因同源性均较高,分别为99.8%~100.0%、99.6%~100.0%和99.9%~100.0%;与EHV-3分离株同源性均最低,分别为72.9%、59.4%和62.1%;遗传进化分析显示,3个基因均与国外EHV-1同属于一个遗传进化分支,与EHV-9和EHV-4进化关系较近,但与EHV-3进化关系较远,表明XJ2015毒株与国外EHV-1毒株TK、gI、gE基因核苷酸上差异不明显,没有明显的地域性特征,功能基因保守且进化缓慢,同源基因功能相同或相近;经PCR扩增、酶切、测序及转染鉴定,本试验成功构建了用于TK基因缺失的打靶质粒pUC-TKLR-EGFP。通过对EHV-1主要毒力基因的分析及TK基因缺失打靶载体的构建,为新疆地区马鼻肺炎流行病学调查分析、TK基因缺失株的构建提供理论依据。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型(ehv-1) 序列分析 基因缺失载体
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含EGFP基因的马疱疹病毒1型新疆株gE基因缺失株的构建 被引量:3
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作者 范斌 鲍子磊 +3 位作者 贾钦瑞 刘建华 贺笋 冉多良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第8期2652-2659,共8页
为筛选马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis,ER)基因缺失减毒活疫苗的候选毒株,本研究参考GenBank中EHV-1(登录号:KF644579.1)目的基因序列设计同源臂引物,以本地区流行株XJ2015株DNA为模板PCR扩增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表达盒(CM... 为筛选马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis,ER)基因缺失减毒活疫苗的候选毒株,本研究参考GenBank中EHV-1(登录号:KF644579.1)目的基因序列设计同源臂引物,以本地区流行株XJ2015株DNA为模板PCR扩增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表达盒(CMV+EGFP+polyA)为标记基因,酶切后依次连接至载体pUC-19,成功构建重组质粒pUC-gEH1H2-EGFP。将XJ2015基因组与质粒pUC-gEH1H2-EGFP共转染至RK-13细胞进行同源重组,以EGFP为标记进行gE基因缺失毒株的筛选及纯化,并测定重组毒株效价。结果显示:经5轮荧光噬斑纯化、PCR及测序鉴定,成功获取一株携带EGFP基因的重组毒株XJ2015-△gE-EGFP,且重组毒株效价(107.1TCID50/0.1 mL)较原毒株(108.8TCID50/0.1 mL)下降约101.7TCID50/0.1 mL。采用同源重组技术成功构建了1株马疱疹病毒1型流行株gE基因缺失突变株,为未来筛选马鼻肺炎基因缺失弱毒疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 马鼻肺炎 马疱疹病毒1型(ehv-1) gE基因缺失
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马疱疹病毒1型感染马疾病模型的建立及评价 被引量:2
7
作者 车传忠 鲍子磊 +3 位作者 胡月 郑学功 刘建华 冉多良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第6期2196-2203,共8页
试验旨在建立马疱疹病毒1型(Equine herpesvirus type1,EHV-1)人工发病模型,确定EHV-1感染马的半数感染量(ID_(50))及感染发病的判定标准,为该病的预防与治疗药物的研发奠定基础。以新疆伊犁地区某发病马场流产胎儿中分离的EHV-1 XJ201... 试验旨在建立马疱疹病毒1型(Equine herpesvirus type1,EHV-1)人工发病模型,确定EHV-1感染马的半数感染量(ID_(50))及感染发病的判定标准,为该病的预防与治疗药物的研发奠定基础。以新疆伊犁地区某发病马场流产胎儿中分离的EHV-1 XJ2015株为研究对象,设立4组不同病毒剂量感染组及对照组,经鼻内喷雾感染马,5 mL/匹,每天观察试验马的临床症状和发病情况,14 d后进行剖检,观察各组织脏器病理变化并应用实时荧光定量PCR方法检测鼻腔排毒及病毒分布情况。结果显示,EHV-1 XJ2015株感染马的ID_(50)为10^(-6.67)/5 mL,其病毒含量为104.33 TCID_(50)/mL。与对照组相比,1×10^(6)和1×10^(5)TCID_(50)/mL感染组马临床评分显著升高,主要表现为体温升高(高达39.5℃,一般持续2~6 d)、食欲不振、流浆液性鼻液和下颌淋巴结肿大;且1×10^(6)和1×10^(5)TCID_(50)/mL感染组试验马均表现出不同程度的排毒,肺脏及脑组织中可检测出大量病毒,与对照组相比极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05);病理学检查发现,患马脑组织出现非化脓性脑炎及神经元水肿,肺脏组织出现间质性肺炎、嗜中性粒细胞、炎性细胞浸润、出血和肺泡间隔增厚。以上结果表明,EHV-1 XJ2015株对马具有较强的致病性,患病马临床症状典型,病毒主要随鼻液排出,并富集在肺脏及脑组织,通过上述指标确定EHV-1感染马发病的判定标准,本试验成功建立EHV-1感染本体动物疾病模型。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型(ehv-1) 模型 判定标准
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马疱疹病毒1型LAMP检测方法的建立 被引量:6
8
作者 杨夷平 刘建华 +3 位作者 冉多良 许全圆 李娜 加尔肯 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第9期35-40,共6页
本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型(EHV-1)的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术(LAMP),同时评价该方法的可靠性。根据马鼻肺炎糖蛋白B(gB)基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进... 本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型(EHV-1)的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术(LAMP),同时评价该方法的可靠性。根据马鼻肺炎糖蛋白B(gB)基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程,进行引物筛选和反应条件的优化,建立能特异性扩增EHV-1DNA的LAMP检测方法,并加入SYBR GreenⅠ通过肉眼判断结果。该方法在65℃恒温下作用50min,使EHV-1DNA获得了高效率的特异性扩增,与其他马易感病毒如马疱疹病毒4型(EHV-4)等无交叉反应;且具有极高的灵敏性,可检测到10-4稀释的目标病毒,比普通PCR的灵敏度高10倍;反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼观察的结果与LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过将4份临床样品的LAMP检测结果与已得到验证的PCR结果进行比对,结果显示符合率为100%。本研究建立的LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏、简单易操作且设备要求低等特点,具有实地检测EHV-1的前景。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1 环介导等温扩增技术 快速检测
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