通过细胞-指数级富集的配基系统进化(Cell based systematic evolution of ligands by exponentialenrichment,cell-SELEX)方法从随机文库中筛选得到与稳定过表达人表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(Epidermal growth factor receptor varian...通过细胞-指数级富集的配基系统进化(Cell based systematic evolution of ligands by exponentialenrichment,cell-SELEX)方法从随机文库中筛选得到与稳定过表达人表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(Epidermal growth factor receptor variantⅢ,EGFRvⅢ)的胶质瘤细胞U87细胞株(U87-EGFRvⅢ)特异结合的DNA适配子。以U87-EGFRvⅢ细胞作为检测对象,筛选到的适配子A15作为检测分子,建立一种细胞酶联反应(Cell enzyme-linked assay,cell-ELA)方法测定适配子的亲和力,并用EGFR抗体作为对照来比较此种DNA适配子的亲和力。结果显示,所测定的DNA适配子A15的解离平衡常数(Equilibrium dissociation constants,Kd)小于100 nmol/L,对U87-EGFRvⅢ细胞的结合能力与抗体相似。Cell-ELA法可较方便地用于cell-SELEX中适配子亲和力的测定。展开更多
文摘基于核酸适体对靶标的特异性识别和辣根过氧化物酶（HRP）的高效催化反应,发展了一种用于检测三磷酸腺苷（ATP）的酶联核酸适体分析新方法.核酸适体和靶标的特异性结合导致与核酸适体杂交的短链DNA 解链,解离的 DNA 通过杂交被固定在另一酶标板的 DNA 捕获.解离的 DNA 预先标记了异硫氰酸荧光素（FITC）基团, FITC 特异性结合 HRP 标记的 FITC 抗体, HRP 作为信号传导元素催化四甲基二苯胺（TMB）底物显色,通过颜色变化及450 nm 波长处吸光度的变化检测 ATP.该方法对 ATP 具有良好的选择性,检测不受其它物质如 GTP, UTP 和 CTP 的干扰,且检测能在较复杂的试样（体积分数10%和50%的血清）中进行.实验结果表明,在 ATP 浓度为50~400 nmol/ L 范围内,具有良好的线性关系,检出限为26 nmol/ L.
