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JSRV-Env诱导转染NIH 3T3细胞后对VEGF和EGFR因子表达的影响
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作者 骆爽 孙丽红 +1 位作者 于立新 么宏强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期898-904,共7页
通过探索JSRV Env真核表达质粒诱导转染小鼠NIH 3T3(小鼠成纤维细胞)后对血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响,进一步探讨其变化与绵羊肺腺瘤病(OPA)肿瘤发生的关联性。首先体外培养NIH 3T3细胞,设立转染pEGFP-C1... 通过探索JSRV Env真核表达质粒诱导转染小鼠NIH 3T3(小鼠成纤维细胞)后对血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响,进一步探讨其变化与绵羊肺腺瘤病(OPA)肿瘤发生的关联性。首先体外培养NIH 3T3细胞,设立转染pEGFP-C1-env、pEGFP-C1及未转染细胞组。本研究采用实时荧光定量PCR方法检测VEGF和EGFR mRNA水平上的表达;ELISA方法检测两细胞因子在不同处理的NIH 3T3细胞培养上清中蛋白的表达。结果显示,相比pEGFP-C1和未转染细胞组,转染pEGFP-C1-env细胞组中VEGF和EGFR mRNA的表达量均显著升高(P<0.05);且在该处理组的细胞培养上清中检测到VEGF和EGFR蛋白浓度呈明显上升趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。转染pEGFP-C1细胞组相比未转染细胞组VEGF和EGFR mRNA和蛋白表达量均差异不明显(P>0.05)。结果表明,JSRV Env在诱导转染小鼠NIH 3T3细胞转化过程中,通过qPCR和ELISA的检测结果均可得知VEGF和EGFR表达量均升高,由两者的过表达变化推测VEGF和EGFR在OPA肿瘤发生过程中可能起关键作用,同时为OPA针对两者进行的基因靶向治疗方法提供理论基础。 展开更多
关键词 JSRV env真核表达质粒 NIH 3T3细胞 VEGF因子 EGFR因子
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JSRV-Env诱导转染TC-1、TC-1-Hyal2细胞后对AKT和ERK表达的影响 被引量：1
2
作者 么宏强 孙丽红 +1 位作者 骆爽 纪秀红 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期283-291,共9页
为了探索JSRV与其受体相互作用后靶细胞的致瘤机制,本研究应用JSRV Env真核表达质粒分别诱导转染小鼠肺上皮细胞(TC-1)和稳定表达绵羊Hyal-2的小鼠肺上皮细胞(TC-1-Hyal2),而后检测细胞信号转导通路上AKT(丝氨酸/苏氨酸激酶)和ERK(细胞... 为了探索JSRV与其受体相互作用后靶细胞的致瘤机制,本研究应用JSRV Env真核表达质粒分别诱导转染小鼠肺上皮细胞(TC-1)和稳定表达绵羊Hyal-2的小鼠肺上皮细胞(TC-1-Hyal2),而后检测细胞信号转导通路上AKT(丝氨酸/苏氨酸激酶)和ERK(细胞外信号调节激酶)在mRNA及蛋白水平上的表达变化,并分析绵羊Hyal-2在JSRV Env诱导TC-1细胞转化过程中的作用。首先体外培养TC-1和TC-1-Hyal2两种细胞,并分别设立pEGFP-C1-env转染组、pEGFP-C1转染组及未转染质粒组。通过实时荧光定量PCR和Western blot方法检测两关键酶在不同水平上的表达变化。qPCR结果显示:与未转染质粒细胞组比较,转染pEGFP-C1-env的两细胞组中AKT和ERK1/2mRNA表达均显著升高(P<0.05)。Western blot结果显示:与未转染质粒细胞组比较,转染pEGFP-C1-env两细胞组中p-Akt(S473)蛋白表达量显著升高(P<0.05);且p-Akt(T308)和p-Erk1/2蛋白在转染pEGFP-C1-env的TC-1细胞组中表达量也均呈显著升高变化趋势(P<0.05),而这两种蛋白在相同处理的TC-1-Hyal2细胞组中表达量均呈极显著升高(P<0.01)。此外,转染pEGFP-C1空载体的各细胞组与未转染质粒细胞组相比较AKT和ERK mRNA和蛋白含量差异均不显著(P>0.05)。JSRV Env在诱导上述细胞系转化过程中,Ras-Raf-MAPK和PI3K-Akt两条细胞信号转导通路被激活;实验检测得知,转染pEGFP-C1-env的两细胞组中AKT、ERK表达量均升高;相比之下,在TC-1-Hyal2细胞组中其表达量升高更显著。研究结果推测绵羊Hyal-2在JSRV Env诱导TC-1细胞转化过程中起促进作用。 展开更多
关键词 JSRV-env真核表达质粒 TC-1细胞 TC-1-Hyal2细胞 AKT ERK
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