期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到2篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定 被引量：12
1
作者 孙自勇 陈均勇 +4 位作者 陈新园 汪晶 田鹏鹏 吴盛 刘建宁 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期41-48,共8页
　用RT＿PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn＿Sephar... 　用RT＿PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn＿Sepharose亲和层析一步纯化,从每升培养液可获得1.6mgEKLC,其纯度达90%以上.酶反应动力学结果表明,EKLC对小分子底物Gly＿Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿β＿naphthylamide的Km为(753±42)mol/L,kcat为(31.5±3.8)s-1.对硫氧化还原蛋白-脑钠素融合蛋白(Trx＿hBNP)的酶解作用显示,当酶与底物重量比大于1∶100时,经37℃保温5h后,超过75%的融合蛋白被裂解.上述结果表明,EKLC能够特异识别并水解Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿肽键,是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶. 展开更多
关键词 肠激酶 毕赤酵母 分泌表达 纯化 酶切 免疫印迹 丝氨酸蛋白水解酶
下载PDF
鳉鱼肠激酶在大肠埃希菌中的可溶性表达、纯化及活性鉴定
2
作者 张五妮 刘玉林 +4 位作者 朱秋媚 王江林 毕江坤 俞露 张宇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期678-684,共7页
目的利用大肠埃希菌表达系统实现鳉鱼肠激酶(enterokinase,EK)的可溶性表达,经纯化后获得具有酶切活性的重组鳉鱼EK。方法通过基因工程技术,构建pGEX-EK重组质粒,转化至TransB(DE3)化学感受态细胞,IPTG诱导表达获得可溶的GST-EK融合蛋白... 目的利用大肠埃希菌表达系统实现鳉鱼肠激酶(enterokinase,EK)的可溶性表达,经纯化后获得具有酶切活性的重组鳉鱼EK。方法通过基因工程技术,构建pGEX-EK重组质粒,转化至TransB(DE3)化学感受态细胞,IPTG诱导表达获得可溶的GST-EK融合蛋白,经谷胱甘肽(glutathione,GSH)亲和层析、离子交换层析,获得EK,并进行活性分析及酶切特异性试验。结果pGEX-EK重组质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确,经可溶性标签实现了具有生物活性的鳉鱼EK的可溶性表达,酶比活性为46 IU/mg,且具有较高的酶切特异性。结论通过使用GST融合标签成功实现了鳉鱼EK在大肠埃希菌中的可溶性表达,为实现EK的可溶性表达提供了新思路。 展开更多
关键词 肠激酶 鳉鱼 大肠埃希菌 可溶性表达 融合标签
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部