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在Yunnanese（Aγδβ）^0—地贫3′缺失端点下游鉴别到两个增强子样顺序 被引量：1
1
作者 黄小东 张俊武 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期114-119,共6页
利用荧光酶报告基因系统搜索了Yunnanese (Aγδβ) 0 地中海贫血缺失 3′端点下游 11 5kb区域内的调控顺序 .确定缺失 3′端点立即下游区 1 7kb片段 ,在人红白血病细胞K5 6 2及鼠红白血病细胞MELGM979中 ,可使γ 珠蛋白基因启动子驱... 利用荧光酶报告基因系统搜索了Yunnanese (Aγδβ) 0 地中海贫血缺失 3′端点下游 11 5kb区域内的调控顺序 .确定缺失 3′端点立即下游区 1 7kb片段 ,在人红白血病细胞K5 6 2及鼠红白血病细胞MELGM979中 ,可使γ 珠蛋白基因启动子驱动的荧光酶基因表达增加 3 8～ 4 0倍 ,而在HeLa细胞中仅增加 1 5倍 .位于缺失 3′端点约 10kb的一个长 1 4kb片段在K5 6 2和MELGM979中 ,可使γ 基因启动子驱动的荧光酶基因表达增加 2 4～2 9倍 ,而在HeLa细胞中无增加 .结果说明这两段顺序均有增强子活性 ,并且这种活性具有一定的红细胞特异性 .进一步证明 1 7kb片段内包含多个转录调节蛋白结合模体的 430bp片段包含了 1 7kb片段的大部分增强子活性 .这些结果为缺失导致增强子样顺序并入到接近Gγ 基因 ,是Yunnanese (Aγδβ) 0 地贫缺失突变体中胎儿Gγ 珠蛋白基因 ,在成人期持续活跃表达原因的假设提供了实验证据 . 展开更多
关键词 Gγ-珠蛋白基因 γ(Aδβ)^0-地中海贫血 增强子样顺序 成人 胎儿
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具有增强蛋白质表达活性序列ER3的筛选及其功能区域的初步鉴定
2
作者 崔成成 毕艳红 +5 位作者 王应明 李攀 杨思达 黄芬 曾韦锟 井申荣 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期18-24,共7页
目的：利用构建的增强子样序列筛选载体,筛选在大肠杆菌中增强外源蛋白质表达的序列,并利用删除突变体初步鉴定其功能区域.方法：以氯霉素乙酰转移酶（CAT）基因序列与人乳头瘤病毒（HPV）主要衣壳蛋白基因 L1 的截短序列L11连接作为报... 目的：利用构建的增强子样序列筛选载体,筛选在大肠杆菌中增强外源蛋白质表达的序列,并利用删除突变体初步鉴定其功能区域.方法：以氯霉素乙酰转移酶（CAT）基因序列与人乳头瘤病毒（HPV）主要衣壳蛋白基因 L1 的截短序列L11连接作为报告基因,从采集的样品中筛选增强子样序列,通过蛋白质表达来检测其增强活性,并通过构建删除突变体来初步鉴定其功能区域.结果： 成功筛选到一条增强子样序列,可使检测载体氯霉素抗体提高11倍,融合蛋白表达水平提高2.26倍,其功能区域主要集中在1~265bp.结论：从收集的样品中成功筛选出一个增强子序列,能提高外源基因在大肠杆菌中的表达. 展开更多
关键词 增强子样序列 增强基因表达 删除突变体 功能区域
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原核增强子样序列筛选及其功能区域鉴定
3
作者 崔成成 王应明 +5 位作者 毕艳红 李攀 杨思达 黄芬 曾韦锟 井申荣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期251-256,共6页
目的从污水和土壤中富集的微生物菌体中筛选原核增强子样序列,构建包含增强子样序列的表达载体,并通过构建缺失突变体鉴定其功能区域。方法将人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）主要衣壳蛋白基因L1截短序列L11与氯霉素乙酰转移... 目的从污水和土壤中富集的微生物菌体中筛选原核增强子样序列,构建包含增强子样序列的表达载体,并通过构建缺失突变体鉴定其功能区域。方法将人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）主要衣壳蛋白基因L1截短序列L11与氯霉素乙酰转移酶基因（chloramphenicol acetyltransferase,CAT）连接,作为报告基因,从污水和土壤富集的微生物菌体中筛选具有增强子活性的序列,构建包含增强子样序列的表达载体,表达HPV L11蛋白,检测其增强活性;通过构建ER1的缺失突变体,测定不同突变体对L11蛋白表达的作用情况,确定其功能区域。结果从样品基因组DNA中筛选出1条具有一定增强蛋白表达功能的增强子样序列,可使检测菌株氯霉素抗性提高5倍,HPV L11蛋白表达水平提高1.78倍。其增强活性主要位于117~317 bp区域。结论从污水和土壤中成功筛选到1条增强子样序列,携带有增强子样序列的表达载体可提高目的蛋白表达水平。 展开更多
关键词 增强子样序列 筛选 外源基因 蛋白表达 功能区域
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痘苗病毒增强子样序列的筛选及应用研究 被引量：2
4
作者 韩峰 秘晓林 +2 位作者 曹茹 王艳 吴淑华 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期301-303,共3页
目的从痘苗病毒基因组中筛选原核增强子样序列,构建携带原核增强子样序列的表达载体,探讨其对干扰素基因表达的影响。方法采用氯霉素乙酰转移酶基因(cat)作为报告基因,从痘苗病毒基因组中筛选具有原核增强子样活性的序列,构建携带增强... 目的从痘苗病毒基因组中筛选原核增强子样序列,构建携带原核增强子样序列的表达载体,探讨其对干扰素基因表达的影响。方法采用氯霉素乙酰转移酶基因(cat)作为报告基因,从痘苗病毒基因组中筛选具有原核增强子样活性的序列,构建携带增强子样序列VV1的表达载体,表达干扰素基因和检测干扰素活性。结果从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选出18个在大肠埃希菌中具有增强活性的序列,从中筛选到两个原核增强子样序列VV1和VV16,VV1正反向分别可使lacZ基因活性提高10.9倍和3.8倍,VV16正反向分别可使lacZ基因活性提高9.0倍和4.1倍;证实它们的增强活性体现在转录水平;用痘苗病毒增强子样序列VV1构建的表达载体,其表达的IFN-α2b型干扰素比原表达载体活性高2.6倍。结论从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选到2个原核增强子样序列-携带有痘苗病毒增强子样序列的表达载体可提高干扰素基因的表达水平。 展开更多
关键词 痘苗病毒 原核增强子样序列 表达载体
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原核增强子样序列3A的克隆及其结构与功能的研究 被引量：2
5
作者 何建新 廖小慧 +3 位作者 秘晓林 韩峰 王艳 吴淑华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期189-193,共5页
从大肠杆菌 C60 0株染色体基因组中筛选到一个原核增强子样序列 3A,其正、反向增强活性分别能提高 β-半乳糖苷酶活性 7.1 1和 2 .93倍 .采用体内转录 ,RNA斑点印迹杂交的方法 ,证明3A序列对于基因表达的调控发生在转录水平上 . 3A功能... 从大肠杆菌 C60 0株染色体基因组中筛选到一个原核增强子样序列 3A,其正、反向增强活性分别能提高 β-半乳糖苷酶活性 7.1 1和 2 .93倍 .采用体内转录 ,RNA斑点印迹杂交的方法 ,证明3A序列对于基因表达的调控发生在转录水平上 . 3A功能区的研究表明 ,3A增强活性主要位于距其正向克隆 5′端 (增强活性较强的方向称为正向 ,反之为反向 ) 30 0～ 540 bp,长约 2 4 0 bp的区段内 ,并证明 展开更多
关键词 大肠杆菌 原核增强子样序列 末端缺失 结构 功能
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