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细粒棘球绦虫Eg95抗原表位的生物信息学预测 被引量:18
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作者 李玉娇 王晶 +5 位作者 赵慧 贾海英 李博 马秀敏 温浩 丁剑冰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期892-896,900,共6页
目的应用软件和在线网络分析Eg95的蛋白二级结构,预测B细胞表位和T细胞表位,为确定和筛选优势表位,研制安全、高效的表位疫苗奠定基础。方法采用DNAStar软件和在线网站IEDB、SYFPEITHI等对Eg95的B细胞表位和T细胞表位进行预测。结果 Eg9... 目的应用软件和在线网络分析Eg95的蛋白二级结构,预测B细胞表位和T细胞表位,为确定和筛选优势表位,研制安全、高效的表位疫苗奠定基础。方法采用DNAStar软件和在线网站IEDB、SYFPEITHI等对Eg95的B细胞表位和T细胞表位进行预测。结果 Eg95存在潜在的抗原表位,B细胞表位区域:16-38,41-48,50-67,68-90,92-100,103-113,120-132。分值高的T细胞表位区域:6-14,14-22,48-56,4-12,98-106,142-150,146-154。结论运用生物信息学方法确定Eg95存在7个抗原表位,对进一步研究Eg95的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要的意义。 展开更多
关键词 eg95 抗原表位 生物信息学
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羊细粒棘球蚴病抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:17
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作者 贾红 刘丹 +3 位作者 侯绍华 于琳琳 柏丽华 朱鸿飞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期65-70,共6页
本研究旨在通过建立检测羊细粒棘球蚴病抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,为羊细粒棘球蚴病的检测提供快速、简便的手段。作者利用DNAStar软件对GenBank上发表的细粒棘球蚴EG95蛋白的氨基酸序列进行分析,筛选出高度亲水的优势表位... 本研究旨在通过建立检测羊细粒棘球蚴病抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,为羊细粒棘球蚴病的检测提供快速、简便的手段。作者利用DNAStar软件对GenBank上发表的细粒棘球蚴EG95蛋白的氨基酸序列进行分析,筛选出高度亲水的优势表位区EG95s,对该区域编码基因进行克隆并表达。以纯化的重组融合蛋白为包被抗原,按常规方法建立检测羊细粒棘球蚴病抗体的间接ELISA,并对各种条件进行优化。SDS-PAGE结果表明成功获得了可溶性好、表达效率高、纯化简便的重组融合蛋白GST-1EG95s和HIS-1EG95s,Western blot检测结果表明表达产物具有较好的反应原性。间接ELISA方法优化结果显示:HIS-1EG95s作为包被抗原效果优于GST-1EG95s。经统计学分析,确定间接ELISA方法的判定标准:OD450nm值≥0.235时判定为阳性,OD450nm值≤0.191时判定为阴性,介于二者之间则为可疑。分别对采自新疆的70份羊包虫阳性血清和70份阴性血清进行检测,结果表明该方法与新西兰Wallaceville动物研究中心提供的间接ELISA方法符合率为100%,阻断试验结果显示与其他蛋白无交叉反应,批内变异系数介于3.8%~5.6%,批间变异系数介于5.7%~8.5%,结果表明该方法特异性强、敏感性高、重复性好。作者所建立的羊细粒棘球蚴病抗体的间接ELISA检测方法有望为羊细粒棘球蚴病的检测提供快速、简便的手段。 展开更多
关键词 羊细粒棘球蚴病 eg95s 重组融合蛋白 间接ELISA 检测
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棘球蚴(包虫)病预防疫苗的研制与应用 被引量:13
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作者 张文宝 张壮志 +1 位作者 郑雪婷 李军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期834-838,共5页
棘球蚴(包虫)病的控制是一个长期的过程。20世纪90年代以前,寄生虫病的防治手段主要是药物防治,但近年来,由于寄生虫耐药风险的增加和不理想的控制效果,以及大面积药物的使用对环境的不良影响等,寄生虫病控制的研究方向逐渐向免疫预防... 棘球蚴(包虫)病的控制是一个长期的过程。20世纪90年代以前,寄生虫病的防治手段主要是药物防治,但近年来,由于寄生虫耐药风险的增加和不理想的控制效果,以及大面积药物的使用对环境的不良影响等,寄生虫病控制的研究方向逐渐向免疫预防转移。本文从棘球绦虫疫苗研制的策略,中间宿主和终末宿主抗虫疫苗的研制,以及所面临的挑战和机遇等做一综述。在我国,EG95已经大面积接种绵羊用于囊性包虫病的控制。但泡球蚴病病原的传播是循环于犬,狐狸和狼等终末宿主和鼠类之间,终末宿主抗虫疫苗研制是泡球蚴病控制研究的方向之一。 展开更多
关键词 棘球蚴(包虫)病 疫苗研制 细粒棘球绦虫 多房棘球绦虫 eg95
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细粒棘球绦虫Eg95疫苗研究进展 被引量:8
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作者 李文桂 陈雅棠 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1070-1072,1077,共4页
关键词 细粒棘球绦虫 eg95 人畜共患寄生虫病 囊型包虫病 疫苗 人口流动 中国卫生部 人体健康
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细粒棘球蚴Eg95s基因的串联表达及表达系统优化 被引量:8
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作者 刘丹 贾红 +2 位作者 侯绍华 丁敏 朱鸿飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第8期33-37,共5页
为研制新型棘球蚴病基因工程疫苗,根据GenBank公布的细粒棘球蚴Eg95基因序列,针对其中一段348 bp高度亲水的优势表位序列设计引物,扩增Eg95s基因,利用同尾酶法基因同向串联方案,获得3拷贝Eg95s串联体。分别用两种表达载体pGEX-6p-1和pET... 为研制新型棘球蚴病基因工程疫苗,根据GenBank公布的细粒棘球蚴Eg95基因序列,针对其中一段348 bp高度亲水的优势表位序列设计引物,扩增Eg95s基因,利用同尾酶法基因同向串联方案,获得3拷贝Eg95s串联体。分别用两种表达载体pGEX-6p-1和pET-32a构建重组质粒,转化入3种大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)、Rosseta(DE3)和Origami(DE3),对其进行IPTG诱导表达,经免疫印迹分析结果表明,均能正确表达具有免疫原性的Eg95s蛋白。通过重组蛋白的表达量、可溶性、纯化方法等方面的比较,对Eg95s重组表达系统的载体及宿主菌进行了优化,结果表明,3拷贝的串联Eg95s在以pET-32a为表达载体,Rosseta(DE3)为宿主菌的系统中表达最佳。最终获得了表达量高、可溶性好、纯化方便的Eg95s重组蛋白表达系统,为大规模生产棘球蚴病基因工程疫苗提供了科学依据。 展开更多
关键词 eg95s 串联表达 表达系统 优化
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粪肠球菌介导的细粒棘球绦虫重组Efs-Eg95-EgA31疫苗的构建、鉴定及表达 被引量:5
6
作者 李文桂 欧兴坤 何爱琳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第9期1025-1029,共5页
目的构建粪肠球菌(Efs)为载体的细粒棘球绦虫重组Efs-Eg95-EgA31疫苗,并研究其表达效率。方法采用电穿孔技术将重组质粒pGEX-Eg95-EgA31转化粪肠球菌ATCC47077株,构建rEfs-Eg95-EgA31疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定;经IPTG诱导后进行10%S... 目的构建粪肠球菌(Efs)为载体的细粒棘球绦虫重组Efs-Eg95-EgA31疫苗,并研究其表达效率。方法采用电穿孔技术将重组质粒pGEX-Eg95-EgA31转化粪肠球菌ATCC47077株,构建rEfs-Eg95-EgA31疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定;经IPTG诱导后进行10%SDS-PAGE和Western blot等分析和鉴定表达产物。结果以从rEfs抽提的质粒为模板进行PCR可扩增出约1016 bp的Eg95-EgA31融合基因片段,SDS-PAGE显示表达产物为62.5 ku的重组蛋白,表达蛋白约占菌体总蛋白的11%;Western blot表明重组蛋白能被细粒棘球蚴感染的鼠血清识别。结论成功构建了细粒棘球绦虫rEfs-Eg95-EgA31疫苗,表达的融合蛋白具有特异的抗原性。 展开更多
关键词 粪肠球菌 细粒棘球绦虫 eg95 egA31 疫苗
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细粒棘球蚴Eg95蛋白减毒沙门氏菌重组株的构建与免疫原性分析 被引量:6
7
作者 王志昇 吴璟 +5 位作者 林源 李红兵 刘强 王志辉 郎多勇 杨文 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期339-343,共5页
目的探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)为载体构建细粒棘球蚴口服活载体疫苗的可行性。方法将细粒棘球蚴Eg95基因插入到表达载体p YA3341中,构建重组质粒p YA3341-Eg95,并用PCR和酶切鉴定。将重组质粒先后电转入减毒沙... 目的探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)为载体构建细粒棘球蚴口服活载体疫苗的可行性。方法将细粒棘球蚴Eg95基因插入到表达载体p YA3341中,构建重组质粒p YA3341-Eg95,并用PCR和酶切鉴定。将重组质粒先后电转入减毒沙门氏菌X3770和X4550,获得重组菌株St-Eg95,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组菌Eg95蛋白的表达情况。将重组菌St-Eg95体外培养传10代,每隔一代提取质粒,利用PCR鉴定重组质粒的稳定性。BALB/c小鼠30只,随机均分为6组,其中4组分别经口灌胃给予St-Eg95 1×109、1×1010、1×1011和1×1012 cfu/ml,100μl/只,余下2组分别经口灌胃给予等体积野生型沙门氏菌1×107 cfu/ml和PBS,常规饲养30 d,观察生存情况。另取15只BALB/c小鼠,均分为3组,分别为St-Eg95免疫组、阴性对照组和空白对照组,St-Eg95组和阴性对照组按5×1010cfu/ml剂量的重组菌和阴性菌分别经口灌胃免疫小鼠,0.5 ml/(只·次),共2次,间隔2周。分别于免疫前和末次免疫后2、4和6周采血,收集血清。用细粒棘球蚴Ig G抗体检测试剂盒(间接ELISA)检测Eg95蛋白的Ig G抗体滴度。于末次免疫后6周处死小鼠,用噻唑蓝(MTT)法检测特异性脾淋巴细胞增殖活性。结果经PCR和酶切鉴定表明,重组质粒p YA3341-Eg95构建成功,在重组菌St-Eg95中有目的蛋白Eg95的表达,相对分子质量(Mr)约为18 000,与预期大小一致。重组菌传10代后,PCR仍可扩增到约486 bp的Eg95基因片段。安全性实验结果显示,灌胃给予重组菌和PBS的小鼠30 d后均存活,活动正常;给予野生型沙门氏菌的小鼠均于4 d后死亡。间接ELISA检测结果显示,末次免疫后2周St-Eg95组小鼠特异性Ig G抗体水平即明显升高,显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);末次免疫后4周抗体水平达到最高值,约1∶1 700。小鼠淋巴细胞增殖试验结果显示,末次免疫后6周,St-Eg95组小鼠的脾淋巴细胞刺激指数(SI值)达到1.94±0 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 eg95 减毒沙门氏菌 免疫原性
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细粒棘球绦虫Eg95重组分泌型卡介苗的构建 被引量:5
8
作者 何莉莉 景涛 +1 位作者 祝秉东 贾万忠 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期320-324,共5页
目的构建细粒棘球绦虫Eg95重组分泌型卡介苗(rsBCG-Eg95)。方法分别以卡介苗BCG基因组DNA和pGEX-4T-Eg95重组质粒为模板,PCR扩增获117bp的BCG抗原85B(BCG-Ag85B)信号肽序列和471bp的Eg95基因序列。将这两个序列定向克隆至大肠埃希菌-BC... 目的构建细粒棘球绦虫Eg95重组分泌型卡介苗(rsBCG-Eg95)。方法分别以卡介苗BCG基因组DNA和pGEX-4T-Eg95重组质粒为模板,PCR扩增获117bp的BCG抗原85B(BCG-Ag85B)信号肽序列和471bp的Eg95基因序列。将这两个序列定向克隆至大肠埃希菌-BCG穿梭质粒pMV261,经酶切、PCR扩增及测序鉴定得到重组质粒pSMEg95。电穿孔法将重组质粒导入BCG菌构建rsBCG-Eg95疫苗,卡那霉素抗性基因筛选并经PCR扩增鉴定。结果质粒pSMEg95经双酶切、PCR扩增及测序鉴定,证实克隆基因Ag85B信号肽和Eg95基因序列正确插入载体pMV261,并将此重组质粒导入BCG菌,经PCR扩增鉴定证实细粒棘球绦虫Eg95重组分泌型卡介苗(rsBCG-Eg95)构建成功。结论构建了含有BCG信号肽Ag85B和保护性抗原Eg95基因序列的细粒棘球绦虫Eg95重组分泌型卡介苗rsBCG-Eg95。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 分泌型 eg95 BCG疫苗
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羊棘球蚴病基因工程亚单位疫苗EG95免疫绵羊的抗体检测 被引量:7
9
作者 阳爱国 侯巍 +14 位作者 邓永强 郭莉 文豪 陈冬 周明忠 毛光琼 陈斌 吴云飞 塔英 肖立新 邹国腾 李劲 吴宣 唐木克 四郎彭错 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第9期58-59,63,共3页
棘球蚴病(Echinococcosis)又称包虫病(Hyda-tidosis),是由带科(Taeniidae)棘球属(Echinococcus)的棘球绦虫(Echinococcus granulosus)的中绦期幼虫寄生于动物和人的肝、肺及其他器官内所引起的一种人兽共患病,农业部将其列为... 棘球蚴病(Echinococcosis)又称包虫病(Hyda-tidosis),是由带科(Taeniidae)棘球属(Echinococcus)的棘球绦虫(Echinococcus granulosus)的中绦期幼虫寄生于动物和人的肝、肺及其他器官内所引起的一种人兽共患病,农业部将其列为二类动物疫病,卫生部将其列入丙类传染病[1]。我省是全国包虫病重点省份之一,主要分布于甘孜州、阿坝州的31个疫区县,严重危害人民身体健康和生命安全,影响养殖业发展和畜产品安全,对社会经济发展造成严重威胁[2]。 展开更多
关键词 棘球蚴病 eg95 抗体检测 ECHINOCOCCUS 丙类传染病 棘球绦虫 棘球属 二类动物疫病 畜产品安全 人兽共患病
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细粒棘球绦虫EG95基因的克隆和序列分析 被引量:5
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作者 郭中敏 陆家海 +2 位作者 陈慧红 徐劲 余新炳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第6期35-37,13,共4页
目的 获得细粒棘球蚴EG95基因序列资料 ,进行序列分析 ,为研究包虫病疫苗候选抗原基因奠定基础。方法 从包囊内获取细粒棘球蚴原头蚴 (protoscoleces) ,提取RNA和DNA ,用特异引物分别以基因组DNA和cDNA为模板扩增EG95基因 ;并将其克隆... 目的 获得细粒棘球蚴EG95基因序列资料 ,进行序列分析 ,为研究包虫病疫苗候选抗原基因奠定基础。方法 从包囊内获取细粒棘球蚴原头蚴 (protoscoleces) ,提取RNA和DNA ,用特异引物分别以基因组DNA和cDNA为模板扩增EG95基因 ;并将其克隆到T载体后进行序列测定和分析。结果 以基因组为模板获得一个基因 ,长度为 12 5 3bp ,以cDNA为模板获得两个基因 ,长度分别为 112 1bp和 833bp ;同源性比较结果表明 :来自新疆羊源EG95基因序列和澳大利亚羊源EG95 2基因同源性为 98% ,有 13个碱基变异 ;从cDNA获得的EG95基因 (EG95 -like)和DNA来源的EG95相同 ,只是EG95序列的一部分 ;从cDNA获得的另一个EG95基因 (mEG95 )和澳大利亚源EG95 2同源性为 99% ,有 2个碱基不同。分析表明EG95是一个基因家族 ,可能是虫体发育到六沟蚴阶段特定表达的基因。结论 EG95是一个基因家族 ,进一步研究该基因家族的结构和功能对包虫病的免疫预防具有重要意义。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 eg95 基因克隆 基因序列 包虫病
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Genetic diversity and phylogenetic analysis of EG95 sequences of Echinococcus granulosus:Implications for EG95 vaccine application 被引量:4
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作者 Wei Pan De-Sheng Chen +6 位作者 Yun-Juan Lu Hui-Wen Xu Wen-Ting Hao Ya-Wen Zhang Su-Ping Qin Kui-Yang Zheng Ren-Xian Tang 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2017年第5期497-500,共4页
Objective:To analyse the genetic variability of EG95 sequences and provide guidance for EG95 vaccine application against Echinococcus granulosus(E. granulosus). Methods:We analysed EG95 polymorphism by collecting tota... Objective:To analyse the genetic variability of EG95 sequences and provide guidance for EG95 vaccine application against Echinococcus granulosus(E. granulosus). Methods:We analysed EG95 polymorphism by collecting total 97 different E. granulosus isolates from 12 different host species that originated from 10 different countries. Multiple sequence alignments and the homology were performed by Lasergene 1(DNASTAR Inc.,Madison,WI),and the phylogenetic analysis was performed by using MEGA5.1(CEMI,Tempe,AZ,USA). In addition,linear and conformational epitopes were analysed,including secondary structure,NXT/S glycosylation,fibronectin type ecoⅢ(Fnndary Ⅲ) domain and glycosylphosphatidylinositol anchor signal(GPIanchor). The s structure was predicted by PSIPRED method. Results:Our results indicated that most isolates overall shared 72.6-100% identity in EG95 gene sequence with the published standard EG95 sequence,X90928. However,EG95 gene indeed has polymorphism in different isolates. Phylogenetic analysis showed that different isolates could be divided into three subgroups. Subgroup 1 contained 87 isolates while Subgroup 2 and Subgroup 3 consisted of 3 and 7 isolates,respectively. Four sequences cloned from oncosphere shared a high identity with the parental sequence of the current vaccine,X90928,and they belonged to Subgroup 1. However,in comparison to X90928,several amino acid mutations occurred in most isolates besides oncosphere,which potentially altered the immunodominant linear epitopes,glycosylation sites and secondary structures in EG95 genes. All these variations might change their previous antigenicity and thereby affecting the efficacy of current EG95 vaccine. Conclusions:This study reveals the genetic variability of EG95 sequences in different E. granulosus isolates,and proposed that more vaccination trials would be needed to test the effectiveness of current EG95 vaccine against distinct isolates in different countries. 展开更多
关键词 Echinococcus granulosus Cystic echinococcosis eg95 VACCINE Genetic diversity
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乳酸乳球菌介导的细粒棘球绦虫重组LL-Eg95疫苗的构建、鉴定及表达
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作者 李文桂 欧兴坤 何爱琳 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1154-1158,共5页
目的 构建乳酸乳球菌(Lactococcus lactis, LL)为载体的细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus, Eg)重组LL-Eg95(rLL-Eg95)疫苗,并研究其表达效率。方法 以pCD-Eg95为模板扩增Eg95基因,采用XbaⅠ和HindⅢ双酶切后插入pMG36e,构建重组质... 目的 构建乳酸乳球菌(Lactococcus lactis, LL)为载体的细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus, Eg)重组LL-Eg95(rLL-Eg95)疫苗,并研究其表达效率。方法 以pCD-Eg95为模板扩增Eg95基因,采用XbaⅠ和HindⅢ双酶切后插入pMG36e,构建重组质粒pMG36e-Eg95,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,抽提质粒进行双酶切鉴定;电穿孔转化乳酸乳球菌MG1363株,构建细粒棘球绦虫重组LL-Eg95疫苗,抽提质粒进行PCR鉴定。结果 重组质粒用双酶切鉴定可切出预期大小的片段,以具有罗红霉素抗性的重组LL中抽提的质粒为模板进行PCR可扩增出471 bp的Eg95基因;SDS-PAGE显示重组LL可表达相对分子质量为16.5×10~3的Eg95蛋白,表达蛋白约占菌体总蛋白的17%;免疫印迹表明表达蛋白可被细粒棘球蚴感染的鼠血清识别。结论 成功构建了细粒棘球绦虫重组LL-Eg95疫苗,表达的Eg95具有特异的抗原性。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 细粒棘球绦虫 eg95 疫苗
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细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型分枝杆菌疫苗的构建 被引量:4
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作者 刘小荣 景涛 +3 位作者 李苗 宋楠楠 王明珠 祝秉东 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期526-530,共5页
目的分别构建细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型卡介苗及耻垢分枝杆菌疫苗。方法分别以卡介苗(BCG)基因组DNA和PGEX-4T-Eg95为模板,PCR扩增获120bp的BCG抗原85B信号肽序列和423bp的Eg95基因序列。先将Eg95基因序列定向克隆至大肠埃... 目的分别构建细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型卡介苗及耻垢分枝杆菌疫苗。方法分别以卡介苗(BCG)基因组DNA和PGEX-4T-Eg95为模板,PCR扩增获120bp的BCG抗原85B信号肽序列和423bp的Eg95基因序列。先将Eg95基因序列定向克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒pMV261,构建非分泌型重组质粒pMEg95。再将BCG-Ag85B信号肽序列定向克隆至pMEg95,构建分泌型重组质粒pSMEg95。电穿孔法将两型重组质粒分别导入BCG菌及耻垢分枝杆菌。结果双酶切、PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因Eg95序列和Ag85B信号肽序列正确插入载体PMV261,细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型分枝杆菌疫苗构建成功。结论构建了含有Eg95基因序列和BCG-Ag85B信号肽序列的细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型分枝杆菌疫苗。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 eg95 卡介苗 耻垢分枝杆菌 疫苗
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细粒棘球蚴EG95s重组蛋白串联表达免疫原性分析 被引量:4
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作者 贾红 袁维峰 +5 位作者 李杰 侯绍华 郭晓宇 鑫婷 马世春 朱鸿飞 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期843-847,共5页
目的比较、分析EG95s重组蛋白的免疫原性。方法本研究分别诱导表达含有1、2、3拷贝EG95s的pET-1EG95s、pET-2EG95s和pET-3EG95s重组质粒,并用His亲和纯化HIS-1EG95s、HIS-2EG95s和HIS-3EG95s3种重组蛋白。再以相同的免疫程序分别免疫8周... 目的比较、分析EG95s重组蛋白的免疫原性。方法本研究分别诱导表达含有1、2、3拷贝EG95s的pET-1EG95s、pET-2EG95s和pET-3EG95s重组质粒,并用His亲和纯化HIS-1EG95s、HIS-2EG95s和HIS-3EG95s3种重组蛋白。再以相同的免疫程序分别免疫8周龄BALB/c小鼠,通过间接ELISA方法检测小鼠体内抗体水平的变化分析其免疫原性。结果经过改造的EG95s重组蛋白:HIS-1EG95s、HIS-2EG95s、HIS-3EG95s均保留了免疫原性,能诱导小鼠产生特异性抗体。3者抗体水平的比较结果显示HIS-1EG95s首次免疫后1周产生的抗体水平明显高于HIS-2EG95s、HIS-3EG95s,但免疫后2周开始,HIS-3EG95s抗体水平超过HIS-1EG95s组,并在二次免疫及三次免疫后持续高于HIS-1EG95s组。免疫后最终抗体效价显示HIS-1EG95s和HIS-2EG95s两组均为1∶819 200,而HIS-3EG95s组为1∶1 638 400。HIS-1EG95s、HIS-2EG95s、HIS-3EG95s均诱导机体产生IFN-γ,但差异不显著,与羊包虫阳性血清反应结果显示HIS-1EG95s的反应性均显著低于HIS-2EG95s和HIS-3EG95s。结论 HIS-1EG95s、HIS-2EG95s与HIS-3EG95s均具有很好的免疫原性,虽HIS-EG95s在免疫初期免疫效果好,但串联3拷贝的EG95s后使得重组蛋白免疫效果更持久,更有利于产生更长效的免疫保护作用。本研究为羊包虫病疫苗的研制及免疫预防奠定了科学基础。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 免疫原性
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棘球蚴疫苗及诊断试剂候选抗原研究现状 被引量:3
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作者 张春霞 李鑫 +7 位作者 欧兰欣 叶碧锦 李波 王红彩 张浩吉 唐文强 王海峰 黄福强 《动物医学进展》 北大核心 2022年第10期99-104,共6页
棘球蚴病是人或动物感染棘球绦虫的中绦期幼虫即棘球蚴所致的慢性寄生虫病,在全世界范围内流行。根据感染寄生虫的种类不同可分为泡型棘球蚴病和囊型棘球蚴病。临床所用药物,如阿苯达唑、吡喹酮、奥苯达唑等治愈率不高,副作用大,且可能... 棘球蚴病是人或动物感染棘球绦虫的中绦期幼虫即棘球蚴所致的慢性寄生虫病,在全世界范围内流行。根据感染寄生虫的种类不同可分为泡型棘球蚴病和囊型棘球蚴病。临床所用药物,如阿苯达唑、吡喹酮、奥苯达唑等治愈率不高,副作用大,且可能出现耐药性等潜在风险,而疫苗具有安全、无残留、动物无休药期等优点。因此,研制有效的棘球蚴病疫苗对畜牧业发展和提高人类生活质量都有重要意义。目前,疫苗抗原的研发成果中已出现了较为成熟的Eg95抗原,以及大量亟待证明的候选抗原如EgA31、EgM、EgTpx、P29及TSP3等。利用这些抗原制成的不同种类的疫苗都起到了不同程度的免疫保护效果。不仅如此,在使用疫苗进行预防的同时,对易感动物进行准确甄别尤其是早期甄别在防控棘球蚴病的过程中也非常重要。目前,诊断试剂的研发也有大量候选抗原如AgB、Ag5以及Eg95-5等可供选择。论文将对疫苗和诊断候选抗原进行汇总、讨论,以期为该病疫苗和诊断试剂的研发提供参考。 展开更多
关键词 棘球蚴病 细粒棘球蚴 疫苗 诊断试剂 eg95
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羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗的工业化生产及应用 被引量:3
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作者 曹政 赵扬扬 +3 位作者 林雅 李春燕 刘晓竹 邓灿新 《四川畜牧兽医》 2016年第5期28-30,共3页
本文对羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗的工业化生产工艺及应用效果进行了研究,为有效防控包虫病在人畜间传播奠定了基础。
关键词 包虫病 基因工程亚单位疫苗 eg95 工业化生产
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细粒棘球绦虫FABP与Eg95融合基因的表达与抗原性鉴定 被引量:3
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作者 王玲 胡慧霞 +4 位作者 曾素祥 武伟华 甘文佳 胡黎平 胡旭初 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期261-265,共5页
目的构建细粒棘球绦虫脂肪酸结合蛋白(FABP)和Eg95两个保护性抗原基因的融合基因,并研究其重组蛋白的免疫学特性。方法以细粒棘球绦虫青海绵羊株保护基因FABP和Eg95的cDNA为模板,通过编码4个甘氨酸残基的连接序列,用非对称聚合酶链反应... 目的构建细粒棘球绦虫脂肪酸结合蛋白(FABP)和Eg95两个保护性抗原基因的融合基因,并研究其重组蛋白的免疫学特性。方法以细粒棘球绦虫青海绵羊株保护基因FABP和Eg95的cDNA为模板,通过编码4个甘氨酸残基的连接序列,用非对称聚合酶链反应扩增融合基因FABP·Eg95,克隆至表达载体pET28a(+)中,在大肠埃希菌BL21(DB3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定。通过Ni-IDA亲和层析获得高纯度目的蛋白,利用蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的免疫反应性。结果获得的融合基因FABP·Eg95长约795bp,双酶切和测序鉴定结果均显示pET-28a(+)-FABP-Eg95重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组质粒pET-28a(+)-FABP-Eg95在大肠埃希菌BL21(DB3)中获得高效表达,表达相对分子质量(Mr)约为31000的重组蛋白,主要以包涵体形式存在,经亲和层析获得目的蛋白。Western blotting分析结果显示,重组蛋白与细粒棘球蚴病患者血清有良好的免疫反应性,而不与健康人血清和血吸虫病患者血清反应。结论 FABP·Eg95融合基因构建成功,纯化的重组蛋白具有一定的抗原性。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 eg95 脂肪酸结合蛋白 蛋白质印迹
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细粒棘球绦虫G1型Eg95基因的原核表达及蛋白鉴定 被引量:2
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作者 徐丹 曹利利 +4 位作者 魏峰 杨美英 张莹光 商立民 刘全 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第4期46-49,共4页
根据GenBank发表的细粒棘球绦虫G1型Eg95序列合成Eg95抗原基因(HM345604.1),设计并合成一对引物,采用PCR技术扩增Eg95抗原基因,亚克隆到pET-28a原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达重组蛋白。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,Eg95抗原... 根据GenBank发表的细粒棘球绦虫G1型Eg95序列合成Eg95抗原基因(HM345604.1),设计并合成一对引物,采用PCR技术扩增Eg95抗原基因,亚克隆到pET-28a原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达重组蛋白。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,Eg95抗原蛋白可以在大肠埃希菌中高效表达,表达重组蛋白的分子质量约为16.5ku。Western blot结果表明,该蛋白可与阳性血清发生特异反应,具有很好的反应原性。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 eg95 原核表达 Western BLOT分析
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细粒棘球蚴95抗原在真核昆虫表达系统中表达、纯化及免疫原性初步分析 被引量:2
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作者 黎明 张晓霞 +3 位作者 赵嘉庆 杨延辉 赵巍 王浩 《宁夏医科大学学报》 2014年第9期949-953,共5页
目的采用真核昆虫表达系统表达细粒棘球蚴95(Eg95)抗原,探讨其免疫原性。方法从GeneBank获取Eg95基因序列(序列编号:EU595937.1),合成开放读码框(CDS)全长基因;利用杆状病毒表达系统Bac-to-Bac symtem在昆虫细胞中表达目的基因Eg95,亲... 目的采用真核昆虫表达系统表达细粒棘球蚴95(Eg95)抗原,探讨其免疫原性。方法从GeneBank获取Eg95基因序列(序列编号:EU595937.1),合成开放读码框(CDS)全长基因;利用杆状病毒表达系统Bac-to-Bac symtem在昆虫细胞中表达目的基因Eg95,亲和层析纯化,Western blot鉴定;对Balb/c小鼠分别免疫接种重组昆虫表达目的蛋白Eg95(简称eu rEg95)、原核重组表达Eg95(简称pro rEg95)、阴性对照PBS,制备免疫血清,间接法ELISA对各组特异性IgG抗体进行分析。结果合成Eg95基因CDS全长471 bp,经测序与理论完全一致;Western blot证实目的蛋白通过重组杆状病毒在昆虫细胞内实现可溶性表达;ELISA结果表明:eu rEg95能够诱导产生原头蚴特异性IgG抗体,抗体水平高于pro rEg95组(P<0.05)。结论利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达出具有良好免疫原性的Eg95抗原,为优化细粒棘球蚴疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 eg95 昆虫表达 SF9细胞
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细粒棘球绦虫Eg95疫苗的研制现状 被引量:2
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作者 李文桂 《国外医学(医学地理分册)》 CAS 2014年第1期1-8,共8页
囊型棘球蚴病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,采用疫苗防治该病是当前研究的热点领域之一。Eg95是一种有效的疫苗候选分子,其疫苗种类有重组抗原、合成肽疫苗、DNA疫苗、重组酵母、重组牛痘病毒疫苗、重组BCG疫苗、转基因苜... 囊型棘球蚴病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,采用疫苗防治该病是当前研究的热点领域之一。Eg95是一种有效的疫苗候选分子,其疫苗种类有重组抗原、合成肽疫苗、DNA疫苗、重组酵母、重组牛痘病毒疫苗、重组BCG疫苗、转基因苜蓿疫苗和重组双歧杆菌疫苗等。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 eg95 疫苗
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