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肠道病毒-D68 2A蛋白对抗病毒IFN-Ⅰ通路影响的研究 被引量：1
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作者 郑惠文 杨智尧 +10 位作者 杨泽宁 宋杰 黄星 李楠 丁丽莎 李恒 李洪哲 郭磊 储曼曼 施海晶 刘龙丁 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期401-409,共9页
目的观察肠道病毒(EV)-D68蛋白2A在EV-D68病毒感染293T细胞过程中对抗病毒IFN-Ⅰ通路的影响。方法免疫印迹法(Western blot)检测重组2A蛋白、IFN-α因子及信号传导及转录激活因子1(STAT1)的蛋白表达水平;免疫荧光技术(Immunofluorescenc... 目的观察肠道病毒(EV)-D68蛋白2A在EV-D68病毒感染293T细胞过程中对抗病毒IFN-Ⅰ通路的影响。方法免疫印迹法(Western blot)检测重组2A蛋白、IFN-α因子及信号传导及转录激活因子1(STAT1)的蛋白表达水平;免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测细胞内不同时间点EV-D68病毒VP1与2A的表达;通过观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),计算细胞培养半数感染量(50% cell culture infective dose,CCID50)来检测病毒感染性滴度;利用实时荧光定量PCR技术(real-time PCR,RT-PCR)检测IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的表达。结果成功构建pCLIPf-2A质粒,在转染后的24 h,重组蛋白2A有较好的表达。病毒滴度结果表明,2A蛋白在感染后期可以有效促进EV-D68病毒的增殖复制。IFN-α干扰素检测结果表明,EV-D68 2A可以刺激IFN-α的表达。IFN-Ⅰ干扰素相关基因检测表明,EV-D68+2A组、2A组及EV-D68对照组的IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的IFN-α mRNA水平均有不同程度的上调或下调,但是三者诱导相关基因表达上调、下调的趋势不同。对IFN-Ⅰ干扰素通路下游蛋白STAT1检测结果表明,各组均能有效诱导STAT1蛋白的表达。结论EV-D68 2A可以促进抗病毒IFN-Ⅰ通路相关基因及下游蛋白的应答,病毒感染后期,2A可以促进病毒较快增殖。 展开更多
关键词 ev-D68病毒感染 2A蛋白 抗病毒IFN-Ⅰ通路
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