植物莽草酸途径EPSPS蛋白的分子进化和基因结构分析 被引量：6

1

作者 巩元勇 郭书巧 +6 位作者 束红梅 倪万潮 帕尔哈提·买买提 沈新莲 徐鹏 张香桂 郭琪 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期295-309,共15页

EPSPS既是植物、微生物和真菌等生物芳香族氨基酸生物合成途径——莽草酸途径中的关键酶,也是除草剂草甘膦的靶标酶。EPSPS的克隆能为草甘膦抗性转基因作物的研发提供候选基因。该研究运用比较基因组学方法,通过对41种不同植物的43条EP... EPSPS既是植物、微生物和真菌等生物芳香族氨基酸生物合成途径——莽草酸途径中的关键酶,也是除草剂草甘膦的靶标酶。EPSPS的克隆能为草甘膦抗性转基因作物的研发提供候选基因。该研究运用比较基因组学方法,通过对41种不同植物的43条EPSPS蛋白序列进行进化分析,取得主要结果如下:(1)不同植物EPSPS蛋白的相似性很高,且具有相同的结构域、保守基序和保守位点,但是其叶绿体转运肽序列差异显著;(2)系统发育分析表明,EPSPS基因按照双子叶植物纲和单子叶植物纲分为2个大的分支,各个小的分支又按照植物的种属亲缘关系进行分支和聚类;(3)基因结构分析表明,植物EPSPS基因基本都含有8个外显子和7个内含子,且所对应外显子的长度相当,而内含子的长度差异很大,说明在植物基因组进化过程中造成EPSPS基因结构差异的主要因素是内含子的改变。研究结果将为揭示植物EPSPS蛋白的结构功能提供参考。 展开更多

关键词 植物 epsps蛋白 系统发育分析 基因结构

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杂草环境下转EPSPS基因大豆NZL06-698的生态适应性研究 被引量：4

2

作者 黄鹞 郭汝清 刘标 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期866-871,共6页

为研究转EPSPS基因大豆NZL06-698在杂草环境中的生态适应性,试验设置杂草处理模拟野外环境,研究转基因大豆NZL06-698(GT698)的生存竞争能力以及外源EPSPS蛋白表达情况。结果表明:在相同处理下转基因大豆GT698的株高(R8期)、百粒重显著... 为研究转EPSPS基因大豆NZL06-698在杂草环境中的生态适应性,试验设置杂草处理模拟野外环境,研究转基因大豆NZL06-698(GT698)的生存竞争能力以及外源EPSPS蛋白表达情况。结果表明:在相同处理下转基因大豆GT698的株高(R8期)、百粒重显著高于亲本大豆蒙豆12(MD12),但单株产量、单株籽粒数、结实率显著低于亲本大豆,说明外源基因的存在并未增强转基因大豆的生存竞争力,且转基因大豆在野外的生存竞争能力与亲本大豆相比较弱。试验注意到,杂草环境对转EPSPS基因大豆的生长有明显的限制作用,杂草处理下转基因大豆的单株产量、单株籽粒数、百粒重、结实率等指标均显著低于对照处理。ELISA检测结果表明,转基因大豆叶片及籽粒中外源EPSPS蛋白在杂草处理及对照中均正常表达,且两种处理下的EPSPS蛋白表达量无显著差异。以上结果表明杂草环境中转基因大豆的EPSPS蛋白正常表达,正常提供抗草甘膦性状,但是外源基因的存在并没有增加转基因大豆的生存竞争能力,且转基因大豆的生长受到杂草环境的显著抑制,由此得出结论:与亲本大豆相比,转EPSPS基因大豆NZL06-698在野外环境中生态适应能力较弱。 展开更多

关键词 转epsps基因大豆 生存竞争能力 epsps蛋白

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转基因玉米EPSPS蛋白适体的筛选与结构分析 被引量：5

3

作者 江树勋 黄新 +6 位作者 邵碧英 陈敏 陈洪俊 Jun Sheng Lin 陈文炳 吴亚君 潘大仁 《热带作物学报》 CSCD 2010年第4期600-604,共5页

通过体外合成长度为70个碱基的随机ssDNA文库,采用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,以转基因玉米EPSPS蛋白为靶目标进行16轮筛选,将筛选到的适体群进行克隆、测序,初步获得与转基因玉米EPSPS蛋白特异性结合的适体。并用Macaw2.05和DN... 通过体外合成长度为70个碱基的随机ssDNA文库,采用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,以转基因玉米EPSPS蛋白为靶目标进行16轮筛选,将筛选到的适体群进行克隆、测序,初步获得与转基因玉米EPSPS蛋白特异性结合的适体。并用Macaw2.05和DNAMAN软件对每个适体的保守序列和二级结构进行分析。结果表明:一级结构分析序列同源性可分为四大群,其中A群有11条序列含有67个保守碱基;二级结构分析结果表明,茎环状和口袋状等结构可能是适体与转基因玉米EPSPS蛋白结合的结构基础。利用SELEX技术获得与转基因玉米EPSPS蛋白特异结合的适体群,其一级和二级结构与亲和力密切相关。 展开更多

关键词 转基因玉米 epsps蛋白 SELEX 适体 结构

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AM79 EPSPS蛋白的体外模拟胃肠液消化稳定性研究 被引量：4

4

作者 王玉 王建华 刘允军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期176-181,共6页

AM79 EPSPS基因是从草甘膦高度污染的土壤中克隆的、具有我国自主知识产权的一个新型抗草甘膦基因,在转基因玉米中过表达能显著提高转基因玉米的草甘膦抗性,具有重要应用价值。为了评价AM79 EPSPS蛋白的食用安全性,本研究参考中华人民... AM79 EPSPS基因是从草甘膦高度污染的土壤中克隆的、具有我国自主知识产权的一个新型抗草甘膦基因,在转基因玉米中过表达能显著提高转基因玉米的草甘膦抗性,具有重要应用价值。为了评价AM79 EPSPS蛋白的食用安全性,本研究参考中华人民共和国国家标准,开展了AM79 EPSPS蛋白的消化稳定性研究。将AM79 EPSPS基因构建到原核表达载体pET-30a上,在大肠杆菌中表达了分子量为48.3 kD的可溶性AM79 EPSPS蛋白。通过Ni-NTA亲和层析方法纯化了AM79 EPSPS蛋白用于体外模拟胃肠液实验。结果表明,AM79 EPSPS蛋白在模拟胃肠液中均在15 s内即被消化,SDS-PAGE和Western蛋白免疫印迹均未检测到蛋白残留,表明AM79 EPSPS蛋白在模拟胃肠液体系中极易被消化。 展开更多

关键词 AM79 epsps蛋白 草甘膦 模拟胃肠液 消化稳定性

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EPSPS蛋白和PAT蛋白的模拟胃液消化稳定性分析 被引量：1

5

作者 毛德倩 王艳萍 +5 位作者 王倩 杜克贺 胡贻椿 李敏 杨晓光 杨丽琛 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期453-457,共5页

目的研究5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase,EPSPS)蛋白和膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricina cetyltransferase,PAT)蛋白在模拟胃液中的消化稳定性。方法参照中华人民共和国国家标准... 目的研究5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase,EPSPS)蛋白和膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricina cetyltransferase,PAT)蛋白在模拟胃液中的消化稳定性。方法参照中华人民共和国国家标准(农业部869号公告-2-2007)模拟胃肠液外源蛋白质消化稳定性试验方法中模拟胃液的配方,在体外建立模拟胃液消化体系,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(dodecyl sulfate,sodium salt-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot),分析EPSPS蛋白和PAT蛋白在模拟胃液中不同消化时间点的降解情况。结果EPSPS蛋白和PAT蛋白均在15 s内消化完全,SDS-PAGE和Western blot蛋白免疫印迹均未检测到蛋白残留,EPSPS蛋白和PAT蛋白在模拟胃液中极易被消化。结论EPSPS蛋白和PAT蛋白经过胃液消化后,不具有免疫原性。 展开更多

关键词 epsps蛋白 PAT蛋白 模拟胃液 消化稳定性 转基因食品 食品安全

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转基因玉米表达的Cry1Ab、PAT和EPSPS蛋白对日本通草蛉幼虫的安全风险评估 被引量：3

6

作者 高欣欣 全玉东 +3 位作者 王振营 白树雄 张天涛 何康来 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期663-669,共7页

为评价我国自主研发的转基因玉米表达的Cry1Ab、PAT和EPSPS蛋白对日本通草蛉Chrysoperla nipponensis幼虫生长发育的安全风险,通过将外源蛋白混入日本通草蛉人工饲料中的方法,以加入砷酸二氢钾(KH_2AsO_4)的饲料为阳性对照,研究了日本... 为评价我国自主研发的转基因玉米表达的Cry1Ab、PAT和EPSPS蛋白对日本通草蛉Chrysoperla nipponensis幼虫生长发育的安全风险,通过将外源蛋白混入日本通草蛉人工饲料中的方法,以加入砷酸二氢钾(KH_2AsO_4)的饲料为阳性对照,研究了日本通草蛉幼虫取食后的生长发育状况。结果表明:日本通草蛉取食含Cry1Ab和EPSPS蛋白饲料的幼虫发育历期、茧期、结茧率、羽化率及成虫体重等生物学参数与取食正常饲料处理相比均没有显著差异;而取食含PAT蛋白饲料的幼虫发育历期和结茧率分别为10.7 d和96.6%,与取食正常饲料的对照11.1 d和89.9%差异显著,即饲料中添加PAT蛋白显著提高了幼虫的存活率和发育速率;取食含KH_2AsO_4饲料的日本通草蛉幼虫不能存活到茧期,说明KH_2AsO_4具有显著的杀虫活性。ELISA检测结果表明,取食了分别添加有3种外源蛋白饲料的日本通草蛉幼虫体内可以检测到相应的Cry1Ab、EPSPS和PAT蛋白,含量分别为2 758.8~5 210.7、35 018.0~54 426.6、16.8~149.8 ng/g。表明转基因玉米所表达的Cry1Ab、EPSPS和PAT蛋白对日本通草蛉幼虫没有显著的不利影响。 展开更多

关键词 日本通草蛉 Cry1Ab/PAT/epsps蛋白 安全性评价 转基因玉米

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豆粕中转基因成分检测方法的研究 被引量：2

7

作者 梁克红 李俊 +1 位作者 李军国 秦玉昌 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2008年第S2期81-86,共6页

从核酸和蛋白质两个角度对转基因豆粕及大豆原料进行了检测方法上的研究。设计并合成引物对转基因豆粕的内源基因lectin、CaMV35S启动子基因、NOS终止子和Cp4-epsps基因进行检测。应用ELISA的方法对不同含量的转基因蛋白及转基因豆粕进... 从核酸和蛋白质两个角度对转基因豆粕及大豆原料进行了检测方法上的研究。设计并合成引物对转基因豆粕的内源基因lectin、CaMV35S启动子基因、NOS终止子和Cp4-epsps基因进行检测。应用ELISA的方法对不同含量的转基因蛋白及转基因豆粕进行检测,其检测的灵敏度可达到0.25%,但ELISA不适用于加工产品转基因成分的检测。Western杂交检测转基因豆粕及大豆,其检测极限达到0.5%。对于豆粕这样的加工产品,检测蛋白质及核酸两种方法结合使用,可使检测结果更为准确。 展开更多

关键词 转基因豆粕 PCR方法 Cp4-epsps蛋白

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CP4-EPSPS蛋白的模拟胃肠液消化稳定性分析 被引量：2

8

作者 赵浩含 王建华 刘允军 《生物技术》 北大核心 2017年第2期180-185,204,共7页

CP4-EPSPS蛋白与草甘膦亲和力低,使草甘膦不能阻断生物体内的莽草酸合成途径,成功用于培育抗草甘膦转基因作物。[目的]为评价CP4-EPSPS蛋白的食用安全性,分析了CP4-EPSPS蛋白在模拟胃肠液消化中的稳定性研究。[方法]根据NCBI公布的基因... CP4-EPSPS蛋白与草甘膦亲和力低,使草甘膦不能阻断生物体内的莽草酸合成途径,成功用于培育抗草甘膦转基因作物。[目的]为评价CP4-EPSPS蛋白的食用安全性,分析了CP4-EPSPS蛋白在模拟胃肠液消化中的稳定性研究。[方法]根据NCBI公布的基因序列信息,人工合成CP4-EPSPS基因并构建原核表达载体p ET-CP4,转化大肠杆菌菌株Transetta(DE3)并表达CP4-EPSPS蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化蛋白。根据国家标准建立体外模拟胃肠液消化体系,对照和样品蛋白均以5 g/L的浓度进行模拟胃液消化,以2 g/L的浓度进行模拟肠液消化。在消化0 s、15 s、2 min、30 min和60 min后分别进行取样,然后将其进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳,并进行Western Blot杂交分析。[结果]模拟胃肠液消化实验结果表明,CP4-EPSPS蛋白在模拟胃肠液中均在15 s内即被消化,SDS-PAGE与Western Blot杂交未检测到蛋白残留。[结论]说明CP4-EPSPS蛋白在胃肠液体系中极易被消化。 展开更多

关键词 CP4-epsps蛋白 消化稳定性 草甘膦 模拟胃液 模拟肠液

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转G2-EPSPS和GAT基因大豆外源基因重组蛋白在模拟胃肠液中的消化稳定性 被引量：1

9

作者 秦文 王丽媛 +3 位作者 杨倬 王晶波 卓勤 李岩 《环境与健康杂志》 CAS 北大核心 2020年第7期610-614,共5页

目的评价转G2-EPSPS和GAT基因耐草甘膦大豆中的外源基因重组蛋白G2-EPSPS和GAT在模拟胃肠液中的消化稳定性。方法建立体外模拟胃肠环境的消化体系,样品或对照蛋白以5 g/L的浓度进行模拟胃液消化,以2 g/L的浓度进行模拟肠液消化。分别于... 目的评价转G2-EPSPS和GAT基因耐草甘膦大豆中的外源基因重组蛋白G2-EPSPS和GAT在模拟胃肠液中的消化稳定性。方法建立体外模拟胃肠环境的消化体系,样品或对照蛋白以5 g/L的浓度进行模拟胃液消化,以2 g/L的浓度进行模拟肠液消化。分别于反应0 s、15 s、2 min、30 min和60 min时取200μl模拟消化液,加入上样缓冲液并沸水浴5 min终止反应,然后取样进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳,并进行蛋白印迹(Western blot)分析。结果G2-EPSPS和GAT重组蛋白在模拟胃、肠液中均在0~15 s内完全消化,SDS-PAGE电泳与Western blot未检测到蛋白残留。结论耐草甘膦转基因大豆的外源基因重组蛋白G2-EPSPS和GAT在模拟胃肠液体系中极易被消化。 展开更多

关键词 转基因大豆 G2-epsps蛋白 GAT蛋白 模拟胃液 模拟肠液 消化稳定性

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膨化对转基因豆粕CP4-EPSPS蛋白的影响 被引量：1

10

作者 田芳 王秀敏 +3 位作者 滕达 杨雅麟 敖长金 王建华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期222-226,共5页

旨在研究转基因豆粕经挤压膨化后外源蛋白的变化规律。以CP4-EPSPS多克隆抗体和转基因含量为2%的大豆标准品作为材料,建立ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4-EPSPS蛋白的方法。结果表明,膨化豆粕中外源蛋白含量随着温度和含水率的... 旨在研究转基因豆粕经挤压膨化后外源蛋白的变化规律。以CP4-EPSPS多克隆抗体和转基因含量为2%的大豆标准品作为材料,建立ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4-EPSPS蛋白的方法。结果表明,膨化豆粕中外源蛋白含量随着温度和含水率的升高逐渐降低,ELISA法检测低限达到0.25%,可以定量检测经过加工的转基因豆粕。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附法 挤压膨化 转基因豆粕 CP4-epsps蛋白

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不同类型土壤中CP4 - EPSPS基因的降解规律及对环境影响的研究

11

作者 王康 《黑龙江生态工程职业学院学报》 2021年第3期45-48,共4页

以转CP4-EPSPS基因玉米CC-2叶片为试验材料,将叶片研磨成粉末,后分别混入取自吉林公主岭、北京上庄、山东济南、河南新乡的四种土壤中。放入25℃的培养箱中,按期取样,测定各个取样时期土壤中CP4-EPSPS的蛋白残留量,建立降解模型,获得蛋... 以转CP4-EPSPS基因玉米CC-2叶片为试验材料,将叶片研磨成粉末,后分别混入取自吉林公主岭、北京上庄、山东济南、河南新乡的四种土壤中。放入25℃的培养箱中,按期取样,测定各个取样时期土壤中CP4-EPSPS的蛋白残留量,建立降解模型,获得蛋白50%降解天数(DT50)及90%降解天数(DT90)。结果表明,不同地点土壤中的CP4-EPSPS蛋白均呈前期快速降解后期缓慢降解并逐渐趋于稳定的趋势;吉林公主岭、北京上庄、山东济南、河南新乡的DT50分别为1.68 d、1.88 d、1.95 d、2.38 d,DT90分别为5.79 d、5.84 d、6.54 d、7.44 d;四种土壤理化性质检测结果中CP4-EPSPS蛋白在土壤中的降解速度和土壤成分有机质和有效磷含量呈正相关。明确该转基因抗除草剂作物中外源蛋白在不同类型土壤中的降解规律,为下一步田间试验建立降解模型,比较室内及田间降解规律异同奠定基础,以期为转CP4-EPSPS基因抗除草剂玉米释放田间后可能引起的生态环境风险研究提供初步科学依据。 展开更多

关键词 CP4-epsps蛋白 降解规律 环境安全

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孟山都发现新型抗草甘膦EPSPS蛋白 被引量：1

12

《农药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期483-483,共1页

产生对草甘膦不敏感的EPSPS蛋白是抗草甘膦作物开发的最主要策略。孟山都公司利用农杆菌cp4菌株中的cp4 EPSPS基因开发的转基因玉米NK603和转基因大豆40-3-2,依据的就是这个原理。最近,孟山都公司在草甘膦抗性杂草中发现了新的对草甘膦... 产生对草甘膦不敏感的EPSPS蛋白是抗草甘膦作物开发的最主要策略。孟山都公司利用农杆菌cp4菌株中的cp4 EPSPS基因开发的转基因玉米NK603和转基因大豆40-3-2,依据的就是这个原理。最近,孟山都公司在草甘膦抗性杂草中发现了新的对草甘膦不敏感的EPSPS蛋白,为抗草甘膦作物培育开辟了新的路径。 展开更多

关键词 抗草甘膦 epsps蛋白 孟山都公司 转基因大豆 农杆菌 牛筋草 抗性水平 转基因玉米 发育时期 植物拟南芥

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CP4-EPSPS转基因蛋白的适体筛选与亲和性分析

13

作者 江树勋 郎春燕 +3 位作者 邵碧英 陈洪俊 陈文炳 潘大仁 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期53-57,共5页

目的:通过筛选获得CP4-EPSPS转基因蛋白的最优适体,为应用于检测作准备。方法:体外合成长度为78个碱基的随机ssDNA文库,应用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,以CP4-EPSPS转基因蛋白为靶目标进行15轮筛选,将筛选到的适体群进行克隆、... 目的:通过筛选获得CP4-EPSPS转基因蛋白的最优适体,为应用于检测作准备。方法:体外合成长度为78个碱基的随机ssDNA文库,应用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,以CP4-EPSPS转基因蛋白为靶目标进行15轮筛选,将筛选到的适体群进行克隆、测序,用DNAMAN软件对每个适体的保守序列和二级结构进行分析并应用生物素-抗地高辛碱性磷酸酶显色系统进行亲和性分析。结果:成功获得靶目标的最优适体,即D04号适体,结合率最高(2.2745)为最低的5.9倍。结论:筛选流程合理、可行,实验结果较理想。 展开更多

关键词 CP4-epsps转基因蛋白 SELEX 适体 诱变PCR 亲和性

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