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肠出血性大肠杆菌O157胶体金免疫层析试纸条的研制 被引量：16
1
作者 孙洋 冯书章 +4 位作者 郭学军 祝令伟 周博 刘军 尹铁勇 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期356-359,共4页
目的建立一种简便实用的胶体金免疫层析检测方法用于食品样品中肠出血性大肠杆菌O157的快速筛查。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,以抗EHEC O157 LPS单克隆抗体标记,以兔抗O157多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜作为捕获抗体,利用双抗... 目的建立一种简便实用的胶体金免疫层析检测方法用于食品样品中肠出血性大肠杆菌O157的快速筛查。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,以抗EHEC O157 LPS单克隆抗体标记,以兔抗O157多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜作为捕获抗体,利用双抗夹心法,制成O157胶体金免疫层析检测试纸条,并进行了特异性和敏感性试验。结果该试纸条仅与O157反应,与其他受试菌株均不反应。检测敏感性为106CFU/mL,对人工污染EHEC O157模拟牛肉样品增菌后检测,敏感性为56 CFU/g。结论成功研制出EHEC O157胶体金免疫层析试纸条,敏感性高,特异性强,检测速度快,10min可出结果,操作简便,可用于现场大量样品的检测。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌o157 胶体金 免疫层析 检测
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7主要保护性抗原单克隆抗体的研制及特性分析 被引量：5
2
作者 祝令伟 冯书章 +1 位作者 刘军 陈萍 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期275-277,共3页
以基因重组技术构建工程菌株表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7主要保护性抗原紧密素和志贺毒素的融合蛋白。融合蛋白采用凝胶分离电洗脱法回收纯化,用纯化的蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,细胞融合后获得的3株杂交瘤细胞株1G2、3C6、1B10,... 以基因重组技术构建工程菌株表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7主要保护性抗原紧密素和志贺毒素的融合蛋白。融合蛋白采用凝胶分离电洗脱法回收纯化,用纯化的蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,细胞融合后获得的3株杂交瘤细胞株1G2、3C6、1B10,能分别稳定分泌针对紧密素、志贺毒素Stx1和Stx2的单克隆抗体。3株单抗分别制备腹水并纯化,ELISA检测效价分别为1∶6.4×105、1∶1.2×106、1∶3200。Western-blot检测表明,3株单抗与融合蛋白发生特异性反应。应用3株单抗均可特异性检出EHECO157∶H7,而3株单抗与其他不产生紧密素和志贺毒素的大肠杆菌不反应。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌o157:H7 单克隆抗体 紧密素 志贺毒素
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PCR方法检测EHEC O157∶H7的rfb_(O157)、fliC_(H7)、hlyA、eaeA、stx2及其变种基因 被引量：8
3
作者 陈道利 许彦梅 +1 位作者 罗霞 景怀琦 《中国卫生检验杂志》 CAS 2005年第10期1197-1200,共4页
目的:应用当前国际上常用的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种5对引物,对45株疑似肠出血性大肠埃希菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)检测鉴定,全面了解此类菌的致病力情况。方法:分纯并富集被鉴定菌株,首先以单克隆诊断血清学凝集,... 目的:应用当前国际上常用的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种5对引物,对45株疑似肠出血性大肠埃希菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)检测鉴定,全面了解此类菌的致病力情况。方法:分纯并富集被鉴定菌株,首先以单克隆诊断血清学凝集,阳性者再经100℃水煮制成粗模板,应用PCR检测各菌株是否具有rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA及stx2及其变种5种基因,扩增结果经EB染色后在凝胶成像仪下观察特异性条带并拍照。结果:45株被检测菌经PCR扩增检测,5种基因全部阳性的有10株,4种基因出现阳性的只有1株,3种基因阳性的有6株,2种基因阳性的有17株,1种基因阳性的有10株,1株菌的5种基因检测均为阴性。45株菌中rfbO157阳性的有44株,fliCH7基因阳性的菌株有30株,hlyA阳性的菌株只有10株,eaeA阳性基因的菌株有21株,stx2及其变种阳性的也只有11株。结论:这次45株菌中有5株具有全部的5种基因,44株为EHEC O157,其中30株为EHEC O157∶H7,这次选择的5种基因不仅能给被检测菌株定性,而且能较全面地反应其毒力强度,适合于有条件的基层实验室开展。 展开更多
关键词 ehec o157 致病力 PCR 基因
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抗肠出血性大肠杆菌O157∶H7鸡卵黄抗体的初步研究 被引量：6
4
作者 杨婷婷 李世清 +1 位作者 郭维植 施强 《海峡预防医学杂志》 CAS 2001年第4期3-5,共3页
[目的 ]制备高效价特异性鸡卵黄免疫球蛋白 (Yolk Immunoglobulin,Ig Y)抗体 ,探索肠出血性大肠杆菌(EHEC O15 7∶ H7)防治的新方法。 [方法 ]用 EHEC O15 7∶ H7菌株制备抗原 ,免疫育龄 L eghorn鸡 ,获取大量含高效价Ig Y的卵黄 ,经水... [目的 ]制备高效价特异性鸡卵黄免疫球蛋白 (Yolk Immunoglobulin,Ig Y)抗体 ,探索肠出血性大肠杆菌(EHEC O15 7∶ H7)防治的新方法。 [方法 ]用 EHEC O15 7∶ H7菌株制备抗原 ,免疫育龄 L eghorn鸡 ,获取大量含高效价Ig Y的卵黄 ,经水稀释法脱脂、盐析、初步纯化浓缩 ,用 EL ISA检定其免疫学活性 ,并测定提取物蛋白含量。 [结果 ]获得EL ISA效价达 1× 10 - 6 的抗 O15 7∶ H7Ig Y抗体 ,其蛋白含量为 141.8mg/ ml。 [结论 ]用水稀释法制备 Ig Y抗体简便、经济、高效。 EHEC O15 7∶ H7菌株抗原可有效地导致种鸡免疫反应 ,用其卵黄制备的 Ig Y抗体产量多、效价高、特异性强 ,可进一步用于抗 EHEC O15 7∶ H7感染的保护性研究。 展开更多
关键词 大肠杆菌o157 鸡卵黄免疫球蛋白(IgY) 免疫学治疗
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广西肠出血性大肠埃希菌O157监测研究 被引量：6
5
作者 李永红 林玫 +2 位作者 王鸣柳 周凌云 叶洁梅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1027-1029,共3页
目的了解广西人和动物中EHECO157的流行强度与规律,为卫生决策提供依据。方法采集腹泻病人和家禽家畜粪便、苍蝇及生熟肉类食品标本,经mEC肉汤增菌、O157快诊金卡筛选和免疫磁珠富集后,接种CHROMagarO157显色培养基,最后进行生化和血清... 目的了解广西人和动物中EHECO157的流行强度与规律,为卫生决策提供依据。方法采集腹泻病人和家禽家畜粪便、苍蝇及生熟肉类食品标本,经mEC肉汤增菌、O157快诊金卡筛选和免疫磁珠富集后,接种CHROMagarO157显色培养基,最后进行生化和血清学鉴定。结果2007-2008年,广西共采集各类标本3964份,从牛粪、猪粪、鸡粪和苍蝇标本中检出O157菌株22株,检出率分别为4.35%、1.27%、0.70%和1.84%,其它标本均未检出。22株O157菌株中有18株O157∶H7、4株O157:H-,分布于4-11月。结论广西家禽家畜和苍蝇均有较高的EHECO157带菌率,存在人感染甚至发生人间暴发流行的危险,应继续加强监测并采取适当措施以降低家禽家畜带菌率。 展开更多
关键词 肠出血性大肠埃希菌o157 监测 人群 动物 食品
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鲁西南地区O_(157)大肠杆菌动物宿主带菌情况调查 被引量：3
6
作者 崔树玉 孙启华 +3 位作者 孟蔚 温宪芹 周国清 毕振强 《预防医学文献信息》 2004年第2期135-137,共3页
[目的 ]了解山东省鲁西南地区动物宿主携带肠出血性大肠杆菌O1 57的情况。 [方法 ]将动物粪便直接接种EC肉汤增菌液 ,应用免疫磁珠富集分离于山梨醇麦康凯、麦康凯琼脂平板 ,点种ChromagarO1 57显色琼脂平板 ,纯化菌进行生化反应、血清... [目的 ]了解山东省鲁西南地区动物宿主携带肠出血性大肠杆菌O1 57的情况。 [方法 ]将动物粪便直接接种EC肉汤增菌液 ,应用免疫磁珠富集分离于山梨醇麦康凯、麦康凯琼脂平板 ,点种ChromagarO1 57显色琼脂平板 ,纯化菌进行生化反应、血清学以及毒素因子检测等。 [结果 ] 2 0 0 0年在鲁西南地区检测各类动物粪便 10 5 5份 ,87份检出O1 57大肠杆菌 ,阳性率为 8 2 5 %。其中猪、鸡、羊粪便的阳性率分别为 11 17%、8 3 6%、7 85 %;金乡县阳性率为 11 99%,枣庄市台儿庄区为 6 70 %,郯城县阳性率为 5 0 9%。检出的 94株菌株对丁胺卡那霉素、头孢唑啉、头孢三嗪、庆大霉素、妥布霉素敏感。 94株O1 57大肠杆菌VT毒素阳性 2 3株 ,阳性率 2 4 47%,其中有动力的为 42 86%,无动力的为 13 5 6%,差异有统计学意义 (P <0 0 1)。 [结论 ] 3个县 (区 )均在不同动物粪便中检出O1 57大肠杆菌 ,O1 展开更多
关键词 阳性率 o157大肠杆菌 动物宿主 检出 VT 带菌情况 调查 鲁西南地区 康凯 动物粪便
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双抗体夹心ELISA法检测食品中出血性大肠杆菌O15 被引量：4
7
作者 黄海燕 陈亮 陈萍 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期185-188,194,共5页
以灭活重组基因工程菌EHEC O157Δler/stx(p BR322::stx1/2B::eae)免疫新西兰大耳白兔获得的兔多抗作为捕获抗体,以针对出血性大肠杆菌O157主要毒力因子的特异性单抗2H9为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA方法并绘制标准曲线用于食品中出... 以灭活重组基因工程菌EHEC O157Δler/stx(p BR322::stx1/2B::eae)免疫新西兰大耳白兔获得的兔多抗作为捕获抗体,以针对出血性大肠杆菌O157主要毒力因子的特异性单抗2H9为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA方法并绘制标准曲线用于食品中出血性大肠杆菌O157的定量分析。标准曲线线性方程为y=0.3479x-0.4121,R^2=0.9862。该ELISA的重复性变异系数小于5%,稳定性良好。应用该方法测得出血性大肠杆菌O157∶H7 EDL933的最小检出限为10~3cfu/m L。食品样品接种实验表明:牛肉或猪肉样品接种量为0.08 cfu/g,增菌8 h后可以检出阳性反应;蔬菜和牛奶样品接种量为0.12 cfu/g(m L),增菌10 h后可以检出阳性反应。 展开更多
关键词 出血性大肠杆菌o157 主要毒力因子 双抗体夹心ELISA
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出血性大肠杆菌O157主要毒力因子单克隆抗体的制备 被引量：3
8
作者 黄海燕 陈萍 +2 位作者 陈亮 任常菲 李月红 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期122-126,共5页
目的利用两种抗原制备针对出血性大肠杆菌EHECO157主要毒力因子的特异性单克隆抗体。方法分别用纯化融合蛋白Eae-Stx1/2B和EHECO157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)全菌免疫BALB/C小鼠,通过细胞融合和EHECO157标准株EDL933间接ELISA筛... 目的利用两种抗原制备针对出血性大肠杆菌EHECO157主要毒力因子的特异性单克隆抗体。方法分别用纯化融合蛋白Eae-Stx1/2B和EHECO157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)全菌免疫BALB/C小鼠,通过细胞融合和EHECO157标准株EDL933间接ELISA筛选稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,纯化抗体并鉴定。结果纯化融合蛋白免疫获得了2株单抗2H9和3B4,EHECO157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)免疫获得了1株单抗4H7。2H9、3B4和4H7亚类鉴定分别为lgG2b、lgM和lgM;纯化腹水ELISA效价分别为1∶1.28×105、1∶3.2×104、1∶6.4×104,亲和力常数分别为2.9×106、1.4×106、2.6×105。结论3株单克隆抗体均具有较高特异性,2H9效价和亲和力最高,可作为产志贺毒素EHECO157的检测抗体。 展开更多
关键词 出血性大肠杆菌o157 主要毒力因子 单克隆抗体
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EHEC O157∶H7基因缺失突变株口服免疫小鼠的实验研究 被引量：4
9
作者 孙洋 冯书章 +3 位作者 刘军 郭学军 常国权 尹铁勇 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第9期765-768,共4页
目的　研究肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7基因缺失突变疫苗候选株EHEC 86 - 2 4 (Δstx/ler)的安全性和免疫保护效果 ,为进一步的临床实验提供依据。方法　对出生 7d昆明鼠经口服途径进行免疫 ,分别在一次免疫和加强免疫 14d后以O15 7∶H7... 目的　研究肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7基因缺失突变疫苗候选株EHEC 86 - 2 4 (Δstx/ler)的安全性和免疫保护效果 ,为进一步的临床实验提供依据。方法　对出生 7d昆明鼠经口服途径进行免疫 ,分别在一次免疫和加强免疫 14d后以O15 7∶H7强毒株EDL933(NalR)攻毒 ,观察小鼠的发病情况、疫苗候选株的保护率及攻毒后的带菌消长情况。同时又作了被动免疫实验 ,成年母鼠间隔 14d口服免疫两次 ,所生乳鼠 7d攻毒。结果　疫苗株以 10倍于强毒株最小致死剂量口服接种无致病作用。疫苗株一次免疫保护率可达 6 0 %。因小鼠的易感性随日龄和体重的增加而降低 ,加强免疫后 ,对照组未能全部致死 (死亡 4 0 % ) ,而免疫组全部存活 ;攻毒后免疫组比对照组排菌时间显著缩短 (2 4h/ 2 16h)。两次口服免疫后血清IgG抗体效价达 1∶16 0 0。被动免疫保护率 10 0 %。结论　该突变株通过口服接种能够引起特异性免疫应答反应 。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌o157 免疫 小鼠
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EHEC O157 △ler/stx (pBR322::stx1/2B::eae)对小鼠免疫保护作用的实验研究
10
作者 陈萍 冯书章 +2 位作者 刘军 孙洋 祝令伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期601-604,共4页
通过粘膜免疫途径对基因工程菌EHEC O157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)进行小鼠免疫保护作用实验研究。结果表明,用EHEC O157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)灌胃免疫小鼠能够诱导小鼠产生抗EHEC O157特异性免疫应答,两次免疫后7d,... 通过粘膜免疫途径对基因工程菌EHEC O157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)进行小鼠免疫保护作用实验研究。结果表明,用EHEC O157Δler/stx(pBR322::stx1/2B::eae)灌胃免疫小鼠能够诱导小鼠产生抗EHEC O157特异性免疫应答,两次免疫后7d,免疫组血清IgG抗体显著高于对照组,14 d检测IgG抗体达到最高峰,粪便中检测到高水平的抗EHEC O157特异性IgA抗体,表明该工程菌可以诱导肠道粘膜免疫应答和系统免疫应答。EHEC O157强毒株经胃肠道途径攻毒后,一次免疫组和两次免疫组小鼠存活率(67%和78%)均高于未免疫组(50%);免疫小鼠强毒菌排菌时间大大缩短,两次免疫组攻毒后第5 d检测不到强毒菌,未免疫组排菌达10 d以上;攻毒后免疫组小鼠体重较快恢复正常水平。 展开更多
关键词 出血性大肠杆菌 ehec o157 △ler/stx (pBR322::stx1/2B::eae) 小鼠 免疫
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大肠杆菌O157VT2 B亚基基因的克隆与表达 被引量：1
11
作者 郑峰 周志江 刘建青 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第2期115-118,共4页
目的对大肠杆菌O157VT2毒素B亚基基因进行克隆、表达与鉴定,为VT2毒素的抗原、抗体大规模制备及疾病的预防、诊断和疫苗研究打下基础。方法设计寡核苷酸引物,利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157的染色体基因组中扩增出VT2毒素B亚基基因,... 目的对大肠杆菌O157VT2毒素B亚基基因进行克隆、表达与鉴定,为VT2毒素的抗原、抗体大规模制备及疾病的预防、诊断和疫苗研究打下基础。方法设计寡核苷酸引物,利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157的染色体基因组中扩增出VT2毒素B亚基基因,连接到表达载体pET-28a以构建重组质粒。将重组质粒转入表达宿主菌BL21感受态细胞,通过IPTG诱导进行表达,对表达蛋白进行SDSPAGE电泳分析和Western检测。结果用PCR方法扩增出了预期大小的VT2B亚基基因,克隆得到重组质粒pET28aVT2B,转化后宿主菌成功表达分子量为8kD的目的蛋白,用特异抗体经Western检测该条带为阳性反应。结论目的基因成功克隆到宿主菌内,目的蛋白得到高效表达,最佳诱导时间为4h,目的蛋白表达量可达总蛋白量45.72%。 展开更多
关键词 大肠杆菌o157 志贺毒素2 B亚基 克隆与表达
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出血性大肠杆菌O157基因缺失疫苗株的构建及其免疫 被引量：2
12
作者 刘军 孙洋 冯书章 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期211-217,共7页
出血性大肠杆菌O157感染是重要的新发食物源性传染病,主要致病特征之一是能引起人肠上皮细胞特征性的A/E损伤,A/E损伤主要是由LEE致病岛所编码的毒力因子所引起,ler是LEE致病岛毒力基因群的中心调节基因,对LEE致病岛所编码的毒力因子有... 出血性大肠杆菌O157感染是重要的新发食物源性传染病,主要致病特征之一是能引起人肠上皮细胞特征性的A/E损伤,A/E损伤主要是由LEE致病岛所编码的毒力因子所引起,ler是LEE致病岛毒力基因群的中心调节基因,对LEE致病岛所编码的毒力因子有正调控作用。O157:H7另一个毒力因子是由整合到染色体上的原噬菌体编码的Stx毒素。以O157:H786-24为始发菌株,利用自杀性质粒pCVD442和同源重组的原理构建了O157:H7的ler基因缺失突变菌株(缺失了ler基因中第73-351位的碱基,共279bp),并利用噬菌体消除技术筛选到消除了编码Stx的原噬菌体DNA的菌株,构建出了O157:H7ler/stx基因缺失突变弱毒菌株,并对该菌株的Vero细胞毒性、小鼠模型的安全性以及乳鼠的被动免疫保护作用进行了研究。结果表明,O157:H7ler/stx基因缺失突变菌株丧失了对Vero细胞的毒性作用,并丧失了对实验小鼠的致病性,具有良好的安全性。乳鼠被动免疫保护性实验表明,用该菌株免疫母鼠后,乳鼠通过吸吮母乳可以获得良好的被动免疫保护作用。因此本研究所构建的O157:H7ler/stx基因缺失突变弱毒菌株可作为预防EHEC O157:H7感染的疫苗候选株,为最终研究制出O157的基因工程菌苗奠定基础。 展开更多
关键词 出血性大肠杆菌o157 基因缺失突变 免疫接种 弱毒疫苗
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EHEC O157Δler/stx(pBR322∷stx 1/2B∷eae)的构建与生物学特性分析 被引量：2
13
作者 陈萍 冯书章 +3 位作者 刘军 祝令伟 周博 孙洋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期631-635,共5页
为了获得安全性好，对出血性大肠杆菌具有良好免疫保护作用的疫苗株，本实验以构建的O157△ler／stx基因缺失突变株为载体，将决定特异性粘附的eae全基因插入到质粒pBR322∷stx 1／2B中，构建了基因工程菌O157△ler／six（pBR322∷stx 1... 为了获得安全性好，对出血性大肠杆菌具有良好免疫保护作用的疫苗株，本实验以构建的O157△ler／stx基因缺失突变株为载体，将决定特异性粘附的eae全基因插入到质粒pBR322∷stx 1／2B中，构建了基因工程菌O157△ler／six（pBR322∷stx 1／2B∷eae），对该基因工程菌进行生物学特性分析，实验结果表明，该菌正常培养可表达eae；具有粘附HEp-2细胞的特性；该菌培养上清对Vero细胞没有毒性作用；给小鼠口服接种该工程菌后可在肠道中定居至少10d；14日龄小鼠口服活菌量为5×10^9CFU／只，小鼠生长正常，没有出现任何临床症状；该菌通过口服免疫小鼠可以诱导肠道粘膜免疫应答和体液免疫应答。这些结果表明，该工程菌安全性好，免疫原性强，是有价值的预防EHEC O157感染的基因工程疫苗候选株。 展开更多
关键词 出血性大肠杆菌o157 疫苗 EAE STX 1/2B
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大肠杆菌O157 Z4182基因的克隆与表达 被引量：2
14
作者 秦晓冰 周志江 +3 位作者 丁伟 赵玉龙 唐中伟 任家琰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期52-55,共4页
根据大肠杆菌 O15 7Z4182基因设计 1对引物 ,并在其 5′端分别加入 Nco 、Xho 酶切位点 ,用聚合酶链反应(PCR)从本试验用的大肠杆菌 O15 7及 1株产志贺毒素大肠杆菌 (STEC) O8、1株肠道聚集粘附大肠杆菌 (EAgg EC)和 1株产肠毒素性大肠... 根据大肠杆菌 O15 7Z4182基因设计 1对引物 ,并在其 5′端分别加入 Nco 、Xho 酶切位点 ,用聚合酶链反应(PCR)从本试验用的大肠杆菌 O15 7及 1株产志贺毒素大肠杆菌 (STEC) O8、1株肠道聚集粘附大肠杆菌 (EAgg EC)和 1株产肠毒素性大肠杆菌 (ETEC)菌株中也扩增出了 80 3bp的 DNA片段。以大肠杆菌 O15 7菌株 94H的 DNA为模板 ,用上述引物做 PCR,将其产物连接到载体质粒 p ET2 8a(+) ,然后转化到宿主菌大肠杆菌 L E392 ,从该菌中提取重组质粒 ,再将其转化到表达宿主大肠杆菌 BL2 1(DE3) ,用 PCR、限制性内切酶位点分析及核苷酸序列测定法对克隆的重组质粒进行鉴定 ,表明 Z4182基因定向克隆到了载体质粒 p ET2 8a(+)。将转化子培养并经 IPTG诱导后 ,做SDS- PAGE电泳 ,表明该菌株可以表达 Z4182基因。本试验为阐明大肠杆菌 O15 7Z4182基因的分布及探讨该基因产物的功能和致病作用奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌0157 Z4182基因 克隆 表达
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出血性大肠杆菌O157 Eae-Stx1/2B融合蛋白的免疫学特性
15
作者 陈萍 冯书章 +3 位作者 孙洋 郭学军 周博 尹铁勇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期838-841,共4页
为了研究重构融合蛋白Eae-Stx1/2B免疫特性及对出血性大肠杆菌感染的免疫保护作用,进行了细胞粘附抑制试验和免疫保护试验。结果证明Eae-Stx1/2B融合蛋白免疫血清在体外能降低出血性大肠杆菌对HEp-2细胞的粘附作用,这一特性在出血性大... 为了研究重构融合蛋白Eae-Stx1/2B免疫特性及对出血性大肠杆菌感染的免疫保护作用,进行了细胞粘附抑制试验和免疫保护试验。结果证明Eae-Stx1/2B融合蛋白免疫血清在体外能降低出血性大肠杆菌对HEp-2细胞的粘附作用,这一特性在出血性大肠杆菌疫苗设计中具有重要价值。以纯化的融合蛋白Eae-Stx1/2B为抗原对小鼠进行腹腔注射免疫和滴鼻免疫,ELISA检测结果显示,2次免疫后7 d,免疫组抗Eae-Stx1/2B融合蛋白和抗出血性大肠杆菌O157血清IgG抗体显著高于未免疫组;用出血性大肠杆菌O157强毒株EDL933攻击免疫小鼠,免疫组小鼠排菌时间显著缩短,免疫组小鼠存活率均高于未免疫组,免疫组小鼠体质量恢复增长较快。上述试验结果表明,Eae-Stx1/2B融合蛋白对出血性大肠杆菌感染有保护作用。 展开更多
关键词 出血性大肠杆菌 Eae—Stx1/2B融合蛋白 免疫学特性
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大肠杆菌O157:H7菌毛分子伴侣基因的克隆与表达
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作者 牛晋国 秦晓冰 +2 位作者 单虎 韩一超 周志江 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1582-1585,共4页
根据Genebank中已登录的大肠杆菌O157：H7菌株EDL933基因序列中菌毛分子伴侣ycbR基因序列设计1对引物，并分别在其5′端分别加入NcoⅠ、XhoⅠ酶切位点，以大肠杆菌O157：H7国内分离株97094的DNA为模板，用聚合酶链反应（PCR）扩增出710b... 根据Genebank中已登录的大肠杆菌O157：H7菌株EDL933基因序列中菌毛分子伴侣ycbR基因序列设计1对引物，并分别在其5′端分别加入NcoⅠ、XhoⅠ酶切位点，以大肠杆菌O157：H7国内分离株97094的DNA为模板，用聚合酶链反应（PCR）扩增出710bp的DNA片段。回收并纯化该DNA片段，用限制性核酸内切酶NCOⅠ、XhoⅠ同时消化DNA片段和双酶切载体质粒pET28a（＋）。将它们回收纯化并连接，然后转化到宿主菌大肠杆菌DH5α，从该菌中提取重组质粒，用PCR、限制性内切酶位点分析及核苷酸序列测定法对克隆的重组质粒进行鉴定，表明ycbR基因定向克隆到了载体质粒pET28a（＋）。再将重组质粒转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21（DE3），在含Kan抗生素LB培养基中经IPTG诱导12～16h，做SDS-PAGE分析，表明ycbR基因在菌株中获得高效表达，表达蛋白相对分子质量大小约为30000，与预期结果一致。为研究大肠杆菌ycbR基因产物的功能和致病作用奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌o157 菌毛 ycbR基因 原核表达
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改良热酚水法制备大肠杆菌O157:H7脂多糖抗原的研究 被引量：19
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作者 宋宏新 刘晓阳 李宏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第10期273-275,共3页
采用热酚水法提取肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7的脂多糖(LPS),经浓缩酶解,离心分离得纯化LPS,酸解制得O-特异性侧链(O-PS),能有效去除核酸及杂蛋白,抗原具有鲎试剂凝集活性及对产蛋鸡有较强的免疫原性,建立了一种改良热酚水法提取制备... 采用热酚水法提取肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7的脂多糖(LPS),经浓缩酶解,离心分离得纯化LPS,酸解制得O-特异性侧链(O-PS),能有效去除核酸及杂蛋白,抗原具有鲎试剂凝集活性及对产蛋鸡有较强的免疫原性,建立了一种改良热酚水法提取制备O157:H7特异性脂多糖抗原的方法。 展开更多
关键词 ehec o157∶H7 热酚水法 脂多糖抗原制备
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肠出血性大肠杆菌O157:H7的检测方法进展 被引量：19
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作者 宋宏新 李宏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第11期607-610,共4页
肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7为新近报道的食源性强致病菌,对病原菌快速、简便、准确、灵敏的检测方法是预防控制的关键,本文对国内外常用的鉴别培养、免疫检测以及PCR等检测方法进行了系统的综述。
关键词 肠出血性大肠杆菌o157:H7 病原菌检测 食品生物安全性
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Stx2B与IntiminC300融合蛋白的构建、表达及免疫保护研究 被引量：13
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作者 易勇 邹全明 +6 位作者 程建平 毛旭虎 童文德 曾明 朱永红 马颖 王庆旭 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期227-233,共7页
目的　构建表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 57∶H7志贺毒素Ⅱ结合亚单位 (Stx2B)与紧密黏附素C 端免疫保护性片段 (IntiminC30 0 )的融合蛋白 (Stx2B IntiminC30 0 ) ,并观察其免疫保护作用。方法　设计引物采用PCR法自EHECO1 57∶H7基... 目的　构建表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 57∶H7志贺毒素Ⅱ结合亚单位 (Stx2B)与紧密黏附素C 端免疫保护性片段 (IntiminC30 0 )的融合蛋白 (Stx2B IntiminC30 0 ) ,并观察其免疫保护作用。方法　设计引物采用PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增Stx2B的编码基因stx2b ,T A克隆后在前期已构建原核表达质粒 pET 2 8a( + ) eaeC30 0的基础上构建融合基因表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0 ,经测序鉴定后转化E .coliBL2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 ,PAGE检测 ;通过包涵体洗涤与阴离子柱层析纯化 ,获得目的蛋白Stx2B IntiminC30 0 ,以Al(OH ) 3为佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,再以EHECO1 57∶H7超声破菌液腹腔注射免疫后的小鼠 ,观察攻毒保护效果。结果　PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增出了约 2 90bp的目的片段 ;原核表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化E .coliBL2 1 (DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约 2 5% ;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量 (Mr)约 4 3× 1 0 3,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达。纯化后目的蛋白Stx2B IntiminC30 0的纯度达 75% ,免疫BALB/c小鼠后血清特异性抗体阳转率及抗体效价均显著增高 ,能够抵御致死剂量EHECO1 57∶H7超声破菌? 展开更多
关键词 融合蛋白 o157:H7志贺毒素 保护研究 BALB/c小鼠 表达及 BL21(DE3) 肠出血性大肠杆菌 原核表达质粒 ehec 免疫保护性 基因组扩增 免疫保护作用 基因表达质粒 E.CoLI E.CoLI 相对分子质量 免疫保护效果 PCR法 PAGE T-A克隆
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肠出血性大肠杆菌O157:H7感染小鼠动物模型的初步建立 被引量：13
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作者 孙洋 刘军 +3 位作者 冯书章 高丰 郭学军 常国权 《实验动物科学与管理》 2003年第4期6-9,共4页
目的　建立肠出血性大肠杆菌O15 7:H7感染小鼠动物模型。方法　选用离乳小鼠随机分组 ,先以丝裂霉素和萘啶酮酸处理 ,提高小鼠对肠出血性大肠杆菌O15 7的敏感性 ,再分别以不同剂量口服接种肠出血性大肠杆菌O15 7:H7EDL933W ,进行临床和... 目的　建立肠出血性大肠杆菌O15 7:H7感染小鼠动物模型。方法　选用离乳小鼠随机分组 ,先以丝裂霉素和萘啶酮酸处理 ,提高小鼠对肠出血性大肠杆菌O15 7的敏感性 ,再分别以不同剂量口服接种肠出血性大肠杆菌O15 7:H7EDL933W ,进行临床和病理学检查。结果　利用对O15 7不易感的小鼠 ,复制出人类感染O15 7所出现的主要病理变化和部分临床症状 ,初步建立了动物模型。讨论　该动物模型对探索肠出血性大肠杆菌O15 7:H7的感染机制、毒力因子的作用有重要意义 ,并为O15 7:H7的疫苗侯选株安全性的评价打下初步基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌o157:H7 感染 小鼠 动物模型
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