miRNA-7通过EGFR/PI3K/Akt通路抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖 被引量：9

1

作者 孙栋勋 黄栋栋 +2 位作者 金巧智 陈武兵 蔡志毅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1807-1812,共6页

目的:探讨过表达微小RNA(microRNA-7,miRNA-7)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)5-8F细胞增殖能力的抑制作用及其与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI... 目的:探讨过表达微小RNA(microRNA-7,miRNA-7)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)5-8F细胞增殖能力的抑制作用及其与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,也称Akt)通路的关联情况。方法:利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-7模拟物转染入人鼻咽癌5-8F细胞中;采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-7的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖能力变化;细胞平板克隆形成实验观察转染后细胞克隆能力变化情况;real-time PCR法检测EGFR/PI3K/Akt通路各mRNA表达水平的变化;Western blotting法检测EGFR/PI3K/AKT通路各蛋白表达水平的变化。结果:real-time PCR结果显示,转染miRNA-7模拟物组细胞中的miRNA-7表达水平显著高于无关序列组和空白对照组(P<0.01);5-8F细胞转染miRNA-7模拟物后,细胞增殖和平板克隆能力均呈明显下降(P<0.01);real-time PCR及Western blotting结果显示,转染组的5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路中各主要成员的mRNA及相应蛋白表达水平均有明显降低(P<0.01)。结论:过表达miRNA-7可以显著降低鼻咽癌5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路各主要成员mRNA和蛋白的表达水平,进而显著抑制其增殖和平板克隆形成能力。 展开更多

关键词 微小RNA egfr/pi3k/akt通路 鼻咽肿瘤 细胞增殖

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miR-1231通过靶向EGFR/PI3K/AKT通路抑制脑膜瘤细胞增殖 被引量：1

2

作者 陈波 郭玉涛 王英莉 《中国微侵袭神经外科杂志》 CAS 2020年第9期413-417,共5页

目的探究miR-1231通过靶向EGFR/PI3K/AKT通路对脑膜瘤细胞增殖的影响。方法生物信息学软件分析预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-1231与EGFR之间的靶向结合作用,RT-PCR检测脑膜瘤细胞miR-1231表达和EGFR mRNA表达,Western blot检... 目的探究miR-1231通过靶向EGFR/PI3K/AKT通路对脑膜瘤细胞增殖的影响。方法生物信息学软件分析预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-1231与EGFR之间的靶向结合作用,RT-PCR检测脑膜瘤细胞miR-1231表达和EGFR mRNA表达,Western blot检测EGFR蛋白表达、PI3K和AKT磷酸化水平,CCK-8检测脑膜瘤细胞活力,集落形成实验和EdU实验检测脑膜瘤细胞增殖。结果与正常脑膜细胞相比,脑膜瘤细胞中miR-1231表达显著下调,而EGFR表达显著上调(P<0.05)。生物信息学软件分析预测并通过荧光素酶报告基因证明EGFR为miR-1231的靶基因。与miR-NC组相比,miR-1231组显著抑制脑膜瘤细胞增殖、抑制EGFR/PI3K/AKT通路(P<0.05);与anti-miR-NC组相比,anti-miR-1231组显著促进脑膜瘤细胞增殖、激活EGFR/PI3K/AKT通路(P<0.05);与miR-NC+EGFR-NC组相比,miR-1231+EGFR-NC组显著抑制脑膜瘤细胞EGFR/PI3K/AKT通路,并显著下调细胞增殖能力(P<0.05);与miR-NC+EGFR-NC组相比,miR-NC+EGFR组显著激活脑膜瘤细胞PI3K/AKT通路,并显著上调细胞增殖能力(P<0.05),且能逆转miR-1231+EGFR-NC对脑膜瘤细胞PI3K/AKT通路和细胞增殖能力的抑制作用。结论miR-1231通过靶向EGFR调节PI3K/AKT通路抑制脑膜瘤细胞增殖。 展开更多

关键词 脑膜瘤 miR-1231 egfr/pi3k/akt通路 细胞增殖

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miR-1231通过靶向EGFR/PI3K/AKT通路抑制脑膜瘤细胞增殖研究 被引量：1

3

作者 陈波 郭玉涛 王英莉 《河北医学》 CAS 2020年第8期1233-1237,共5页

目的:探究miR-1231通过靶向EGFR/PI3K/AKT通路对脑膜瘤细胞增殖的影响。方法:生物信息学软件分析预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-1231与EGFR之间的靶向结合作用;RT-PCR检测脑膜瘤细胞miR-1231表达和EGFR mRNA表达;Western blot... 目的:探究miR-1231通过靶向EGFR/PI3K/AKT通路对脑膜瘤细胞增殖的影响。方法:生物信息学软件分析预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-1231与EGFR之间的靶向结合作用;RT-PCR检测脑膜瘤细胞miR-1231表达和EGFR mRNA表达;Western blot检测EGFR蛋白表达、PI3K和AKT磷酸化水平;CCK-8检测脑膜瘤细胞活力;集落形成实验和EdU实验检测脑膜瘤细胞增殖。结果:与正常脑膜细胞相比,脑膜瘤细胞中miR-1231表达显著下调(P<0.05),EGFR表达显著上调(P<0.05);生物信息学软件分析预测并通过荧光素酶报告基因证明EGFR为miR-1231的靶基因;与miR-NC组相比,miR-1231显著抑制脑膜瘤细胞增殖和抑制EGFR/PI3K/AKT通路(P<0.05);与anti-miR-NC组相比,anti-miR-1231显著促进脑膜瘤细胞增殖和激活EGFR/PI3K/AKT通路(P<0.05);与miR-NC+EGFR-NC组相比,miR-1231+EGFR-NC显著抑制脑膜瘤细胞EGFR/PI3K/AKT通路(P<0.05),显著下调细胞增殖能力(P<0.05);与miR-NC+EGFR-NC组相比,miR-NC+EGFR显著激活脑膜瘤细胞PI3K/AKT通路(P<0.05),显著上调细胞增殖能力(P<0.05),且能逆转miR-1231+EGFR-NC对脑膜瘤细胞PI3K/AKT通路和细胞增殖能力的抑制作用。结论:miR-1231通过靶向EGFR调节PI3K/AKT通路抑制脑膜瘤细胞增殖。 展开更多

关键词 miR-1231 脑膜瘤 egfr/pi3k/akt通路 细胞增殖

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迷迭香酸衍生物RAD-9对MCF-7/ADM细胞凋亡及P-gp和EGFR/PI3K/AKT通路的影响

4

作者 韦立群 甘嘉亮 +1 位作者 李启军 唐双意 《中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生》 2022年第10期56-63,共8页

探讨迷迭香酸衍生物RAD-9诱导耐阿霉素乳腺癌细胞株MCF-7/ADM凋亡的可能机制。方法 MTT法检测RAD-9对MCF-7/ADM细胞增殖的影响;Hoechst33258染色法观察RAD-9对MCF-7/ADM细胞核凋亡形态的影响;流式细胞术检测RAD-9对MCF-7/ADM细胞凋亡情... 探讨迷迭香酸衍生物RAD-9诱导耐阿霉素乳腺癌细胞株MCF-7/ADM凋亡的可能机制。方法 MTT法检测RAD-9对MCF-7/ADM细胞增殖的影响;Hoechst33258染色法观察RAD-9对MCF-7/ADM细胞核凋亡形态的影响;流式细胞术检测RAD-9对MCF-7/ADM细胞凋亡情况的影响;qRT-PCR法检测RAD-9对MCF-7/ADM细胞中MDR1 mRNA表达水平的影响;Western blot法检测RAD-9对MCF-7/ADM细胞中P-gp、EGFR、AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示RAD-9能有效抑制MCF-7/ADM细胞的增殖(P<0.01),且呈浓度依赖性,但无细胞毒性的RAD-9(25μmol·L-1)不能增强ADM的抗肿瘤效果。Hoechst33258染色结果显示RAD-9作用MCF-7/ADM细胞48h后细胞核固缩成不规则凋亡形态;流式细胞术结果显示RAD-9作用MCF-7/ADM细胞48h可致MCF-7/ADM细胞凋亡,并呈浓度依赖性(P<0.05);qRT-PCR结果显示RAD-9作用MCF-7/ADM细胞48h后,MDR1 mRNA表达水平明显下降(P<0.001);Western blot结果显示,RAD-9干预MCF-7/ADM细胞48h后,与对照组相比,Bax、caspase-3蛋白的表达水平显著上调(P<0.01),Bcl-2及P-gp、EGFR、AKT、p-AKT蛋白的表达水平显著下调(P<0.05)。结论 RAD-9能抑制MCF-7/ADM细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制P-gp蛋白的表达、抑制EGFR/PI3K/AKT通路有关。 展开更多

关键词 RAD-9 MCF-7/ADM细胞 凋亡 P-GP egfr/pi3k/akt通路 乳腺癌 耐药

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金雀异黄酮对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及EGFR/PI3K/Akt通路的影响 被引量：25

5

作者 韦立群 李婉婷 +3 位作者 李通 徐成飞 唐双意 甘嘉亮 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1376-1381,共6页

目的研究金雀异黄酮(genistein)诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其机制。方法 MTT法观察金雀异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258染色观察金雀异黄酮对MDA-MB-231细胞核凋亡形态学的影响;qRT-PCR法观察金... 目的研究金雀异黄酮(genistein)诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其机制。方法 MTT法观察金雀异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258染色观察金雀异黄酮对MDA-MB-231细胞核凋亡形态学的影响;qRT-PCR法观察金雀异黄酮干预MDAMB-231细胞36 h后,EGFR mRNA表达水平的变化;金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3,EGFR、Akt、p-Akt蛋白的变化;Akt激活剂胰岛素(insulin)、金雀异黄酮单独及联合胰岛素干预乳腺癌MDA-MB-231细胞后,Western blot检测Akt和p-Akt蛋白表达量的变化。结果 MTT结果显示,金雀异黄酮呈时间浓度依赖性抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖;Hoechst 33258染色结果显示,金雀异黄酮干预乳腺癌MDAMB-231细胞36 h后细胞核呈现典型凋亡形态学改变;qRTPCR结果显示,经金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,EGFR的mRNA表达水平明显下降(P<0.01);Western blot结果显示金雀异黄酮干预乳腺癌MDA-MB-231细胞36 h后,与对照组对比,Bcl-2、EGFR、Akt、p-Akt蛋白表达水平明显下调(P<0.01),Bax、caspase-3蛋白表达水平明显上调(P<0.01),Akt激活剂胰岛素可以明显激活p-Akt(P<0.01),金雀异黄酮可以明显下调被激活的p-Akt(P<0.01)。结论金雀异黄酮能抑制三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞生长并诱导其凋亡,其机制可能与抑制EGFR/PI3K/Akt信号通路有关。 展开更多

关键词 金雀异黄酮 三阴乳腺癌 凋亡 增殖 人表皮生长因子受体 egfr/pi3k/akt信号通路

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黄芪-莪术影响HIF-1α/VEGF抑制肺癌血管生成相关信号通路的网络药理学研究 被引量：10

6

作者 杨倩宇 王茜 +1 位作者 赵森 窦永起 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期425-430,共6页

目的:运用网络药理学方法探索黄芪-莪术抑制肺癌血管生成可能的作用靶点,推测其与前期发现的目标通路缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)可能存在的相互关系,为进一步研究其作用机制确定方向。方法:通过TCMSP数据库收集... 目的:运用网络药理学方法探索黄芪-莪术抑制肺癌血管生成可能的作用靶点,推测其与前期发现的目标通路缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)可能存在的相互关系,为进一步研究其作用机制确定方向。方法:通过TCMSP数据库收集黄芪-莪术有效成分,通过DisGeNET数据库搜索人肺癌和肿瘤血管生成的相关靶点,利用Venny软件获得黄芪、莪术抑制肺癌血管生成的共同作用靶点,利用String数据库及Cytoscape 3.7.2构建黄芪-莪术抑制肺癌血管生成的靶点网络;再通过Cytoscape 3.7.2内置的Network Analyzer分析网络拓扑学参数得到核心作用靶点,最后利用DAVID数据库以及Cytoscape 3.7.2对相关核心靶点进行GO及KEGG生物通路富集分析。结果:通过TCMSP数据库及文献补充得到黄芪、莪术活性成分共28个(黄芪皂苷、黄芪多糖、山奈酚、槲皮素、莪术醇等具有抑制肺癌血管生成的作用),成分靶点共513个;通过Venny及Cytoscape 3.7.2软件分析,获得黄芪-莪术抑制肺癌血管生成的靶点20个,核心靶点为EGFR,其余关键靶点涉及VEGFA、HIF-1α、STAT3等;KEGG分析得到与这些抗肺癌血管生成靶点相关的主要信号通路有HIF-1信号通路、MAPK信号通路等,其中核心靶点EGFR、VEGFA、HIF-1α均在HIF-1信号通路中涉及。结论:黄芪-莪术配伍中以黄芪皂苷(包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)、莪术醇、黄芪多糖、槲皮素为主的活性成分与其抑制肺癌血管生成机制关系最为密切,推测其通过作用于EGFR/PI3K/Akt信号通路影响下游HIF-1α/VEGF相关蛋白表达,从而达到抑制肺癌血管生成的效果。 展开更多

关键词 黄芪 莪术 肺癌 肿瘤血管生成 网络药理学 egfr/pi3k/akt信号通路 缺氧诱导因子-1Α 血管内皮生长因子

原文传递

外源性硫化氢通过EGFR/PI3K/Akt信号通路促进人卵巢癌细胞增殖、侵袭和顺铂耐药 被引量：10

7

作者 葛顺娜 段峥峥 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期244-253,共10页

目的·探讨外源性硫化氢对人卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭和顺铂耐药的作用及其机制。方法·以人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和人顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP细胞为研究对象。采用CCK-8法、流式细胞术、Transwell侵袭小室实验,分... 目的·探讨外源性硫化氢对人卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭和顺铂耐药的作用及其机制。方法·以人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和人顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP细胞为研究对象。采用CCK-8法、流式细胞术、Transwell侵袭小室实验,分别检测NaHS对SKOV3细胞的增殖、凋亡、侵袭能力的影响;通过计算细胞半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)和细胞活性抑制率(inhibition rate,IR),检测NaHS对SKOV3和SKOV3/DDP细胞顺铂耐药的影响;Western blotting检测Na HS对SKOV3和SKOV3/DDP细胞中EGFR、PI3K和Akt磷酸化水平的影响;用EGFR的抑制剂erlotinib、PI3K的抑制剂LY294002和Akt的抑制剂MK-2206处理细胞,检测SKOV3和SKOV3/DDP细胞中EGFR、PI3K和Akt的磷酸化水平以及SKOV3细胞增殖、侵袭和SKOV3/DDP细胞顺铂耐药的变化。结果·与对照组相比,Na HS能显著促进SKOV3细胞增殖(P=0.000)和侵袭(P=0.033);显著提高SKOV3和SKOV3/DDP细胞对顺铂的IC50(P=0.027,P=0.009),降低顺铂对细胞的IR(P=0.001,P=0.009);激活SKOV3和SKOV3/DDP细胞的EGFR(P=0.000,P=0.037)、PI3K(P=0.009,P=0.013)、Akt(P=0.000,P=0.023);erlotinib、LY294002和MK-2206均能阻断Na HS对SKOV3细胞的增殖(均P=0.000)和侵袭(均P<0.01)作用,也能逆转NaHS促进SKOV3/DDP细胞对顺铂耐药的作用(均P=0.000)。结论·外源性硫化氢可促进SKOV3细胞的增殖和侵袭,以及SKOV3和SKOV3/DDP细胞的顺铂耐药,其机制与激活EGFR/PI3K/Akt信号通路有关。 展开更多

关键词 硫化氢 卵巢癌 细胞增殖 细胞侵袭 顺铂耐药 egfr/pi3k/akt信号通路

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肺岩宁方联合吉非替尼抑制肺癌裸鼠移植瘤细胞H1975生长及其作用机制 被引量：10

8

作者 康小红 王立芳 +3 位作者 王中奇 邓海滨 赵晓珍 徐振晔 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期1-4,共4页

目的观察肺岩宁方联合吉非替尼对肺腺癌裸鼠移植瘤细胞H1975生长的影响并探讨其可能的作用机制。方法成功建立H1975细胞裸鼠皮下移植瘤模型后,随机分为模型组、吉非替尼组、肺岩宁方组及联合用药组,每组10只,分别用相应药物干预4周,检... 目的观察肺岩宁方联合吉非替尼对肺腺癌裸鼠移植瘤细胞H1975生长的影响并探讨其可能的作用机制。方法成功建立H1975细胞裸鼠皮下移植瘤模型后,随机分为模型组、吉非替尼组、肺岩宁方组及联合用药组,每组10只,分别用相应药物干预4周,检测肿瘤体积、瘤重、体重等,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤抑制率;应用TNUEL法检测移植瘤细胞凋亡;应用Western blot法检测EGFR-PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。结果各组的抑瘤率模型组为0,吉非替尼组21.91%,肺岩宁方组25.11%,联合用药组53.28%;各组移植瘤组织中肿瘤细胞的凋亡率分别为模型组(15.11±1.6)%,吉非替尼组(26.64±0.69)%,肺岩宁方组(28.88±1.61)%,联合用药组(55.06±2.39)%。联合用药组与模型组及单用吉非替尼、肺岩宁方相比差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果显示肺岩宁方联合吉非替尼在不影响EGFR、AKT、mTOR总蛋白表达的情况下,可显著下调p-EGFR、p-AKT、p-mTOR水平。结论肺岩宁方联合吉非替尼可显著抑制H1975肺癌裸鼠移植瘤的生长,促进肿瘤细胞凋亡,其作用机制可能与阻断EGFR-PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多

关键词 肺岩宁 吉非替尼 酪氨酸酶抑制剂 肺癌 egfr-pi3k/akt信号通路

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黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

9

作者 穆培娟 赵哲 张冬 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期40-46,共7页

目的:探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)和高通量基因表达(GEO)数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达... 目的:探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)和高通量基因表达(GEO)数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果:MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达(均P<0.01),选取表达水平较高的A549细胞进行后续实验。敲低MUC13后,A549细胞的增殖能力显著降低,G0/G1期的细胞数量显著增多、G2/M期及S期的细胞数量显著减少,细胞凋亡率显著升高,细胞迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.01);A549细胞中E-cadherin表达显著上调,N-cadherin、vimentin表达显著下调,p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著降低(均P<0.01);再加入IGF-1处理后,A549细胞中p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著升高(均P<0.01)。结论:MUC13在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达,其可能通过激活EGFR/PI3K/AKT信号通路促进A549细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。 展开更多

关键词 黏蛋白13 肺腺癌 A549细胞 增殖 凋亡 迁移 侵袭 上皮间质转化 egfr/pi3k/akt信号通路

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基于EGFR/PI3K/AKT/mTOR通路探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯调控非小细胞肺癌细胞周期和凋亡的机制

10

作者 任闪闪 刘燕 +3 位作者 尚艺婉 吴耀松 刘俊 陈玉龙 《中医学报》 CAS 2024年第6期1280-1288,共9页

目的:基于表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/磷脂酰肌醇激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路探讨表没食... 目的:基于表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/磷脂酰肌醇激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)调控非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞周期和凋亡的作用机制。方法:将A549细胞随机分为空白对照组、模型组、EGCG组、吉非替尼组、EGCG+吉非替尼组。采用MTT法检测A549细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。通过分子对接和细胞热力学迁移实验(cellular thermal shift assay,CETSA)检测EGCG与EGFR的靶向结合情况。采用Western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、B-细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR表达水平。结果:与模型组比较,EGCG和吉非替尼均对细胞表现出显著的抑制作用。与空白对照组比较,模型组在G1/G0期细胞百分比降低,在G2/M期细胞百分比升高(P<0.01);与模型组比较,EGCG组、吉非替尼组和EGCG+吉非替尼组在G1/G0期细胞百分比升高(P<0.01),吉非替尼组和EGCG+吉非替尼组在G2/M期细胞百分比降低(P<0.01)。与空白对照组比较,模型组细胞凋亡率降低(P<0.01);与模型组比较,EGCG组、吉非替尼组和EGCG+吉非替尼组的细胞凋亡率升高(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组细胞CDK4、Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达水平升高(P<0.01),Bax蛋白表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,EGCG组、吉非替尼组和EGCG+吉非替尼组细胞CDK4、Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达水平降低(P<0.01),Bax蛋白表达水平增加(P<0.05)。分子对接结果显示,EGCG和吉非替尼与EGFR的结合能均小于-5.0 kcal·mol^(-1)。CETSA结果显示,与RPMI 1640组比较,EGCG组细胞EGFR蛋白的CETSA曲线向右漂移 展开更多

关键词 表没食子儿茶素-3-没食子酸酯 非小细胞肺癌 A549细胞 egfr/pi3k/akt/mTOR通路 细胞周期 细胞凋亡

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山苍子油对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其可能机制的研究 被引量：5

11

作者 周恩正 郭贵明 +2 位作者 苏旭 吴春凯 左丽(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期571-576,共6页

目的:研究山苍子油对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及可能机制。方法:CCK-8比色法和流式细胞术(FCM)分别检测山苍子油对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响;Western blot方法检测经山苍子油作用后MDA-MB-231细胞凋亡... 目的:研究山苍子油对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及可能机制。方法:CCK-8比色法和流式细胞术(FCM)分别检测山苍子油对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响;Western blot方法检测经山苍子油作用后MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、EGFR、p-Akt、Akt蛋白的表达水平;山苍子油、Akt激活剂以及山苍子油联合Akt激活剂作用于MDA-MB-231细胞后Akt、p-Akt蛋白的表达水平。结果:山苍子油对MDA-MB-231细胞的增殖具有明显的抑制作用,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05),且其抑制作用呈现浓度和时间依赖性;山苍子油使细胞阻滞于S期并能够诱导细胞凋亡(P<0.01);与对照组比较,随着药物浓度的增加及作用时间的延长,可上调MDA-MB-231细胞促凋亡蛋白Bax、caspase-3的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.01);与对照组比较,随着山苍子油浓度的增加EGFR、Akt、p-Akt蛋白的表达量均随之下降(P<0.01)。Akt激活剂可以明显上调Akt、p-Akt的表达。山苍子油可明显下调被激活的Akt、p-Akt(P<0.01)。结论:山苍子油可显著抑制体外条件下人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖,呈浓度和时间依赖性;可阻滞MDA-MB-231细胞分裂周期于S期并能诱导细胞凋亡,可能与抑制EGFR/PI3K/Akt信号通路有关。 展开更多

关键词 山苍子油 乳腺癌 凋亡 egfr/pi3k/akt信号通路

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GTPBP4基因沉默介导EGFR/PI3K/AKT信号通路对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡的调控机制 被引量：5

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作者 邓淑文 夏红星 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第22期2747-2752,共6页

目的:探讨GTP结合蛋白4(GTPBP4)基因介导EGFR/PI3K/AKT信号通路对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡的调控机制。方法:选取人胃癌细胞株MGC-803、NCI-N87、SGC-7901、MKN-45及人胃黏膜上皮细胞株GES-1,筛选癌细胞中GTPBP4表达最高的细胞株并分为6... 目的:探讨GTP结合蛋白4(GTPBP4)基因介导EGFR/PI3K/AKT信号通路对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡的调控机制。方法:选取人胃癌细胞株MGC-803、NCI-N87、SGC-7901、MKN-45及人胃黏膜上皮细胞株GES-1,筛选癌细胞中GTPBP4表达最高的细胞株并分为6组:Blank组(胃癌细胞不做处理)、阴性对照组(转染含有无关序列的重组质粒)、GTPBP4 shRNA组(转染含有GTPBP4 shRNA的重组质粒)、GTPBP4过表达组(转染含有GTPBP4片段的重组质粒)、EGFR/PI3K/AKT inhibitor组(EGFR/PI3K/AKT通路抑制剂处理细胞)、Combined treatment组(EGFR/PI3K/AKT通路抑制剂联合GTPBP4 shRNA处理细胞),分别给予顺铂处理。qRT-PCR和Western blot检测EGFR/PI3K/AKT信号通路和凋亡相关基因的mRNA和蛋白表达水平。MTT法检测各组细胞的增殖活力。Transwell检测各组细胞侵袭情况。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:与人胃黏膜上皮细胞相比,胃癌细胞株中GTPBP4表达显著上调(P<0.05)。给予顺铂处理后,胃癌细胞GTPBP4表达下调。与Blank组相比,GTPBP4 shRNA组及EGFR/PI3K/AKT inhibitor组Bax表达上调,Bcl-2、EGFR、PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT表达均下调,细胞增殖、侵袭能力降低,凋亡率上升(P<0.05),且Combined treatment组各指标变化趋势更为明显(P<0.05)。GTPBP4过表达组与GTPBP4 shRNA组、EGFR/PI3K/AKT inhibitor组及Combined treatment组变化呈相反趋势(P<0.05)。Blank组和NC组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GTPBP4基因沉默可抑制EGFR/PI3K/AKT信号通路激活,抑制胃癌细胞的增殖、侵袭能力,促进顺铂诱导的胃癌细胞凋亡。 展开更多

关键词 胃癌 GTP结合蛋白4 egfr/pi3k/akt信号通路 顺铂 凋亡

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当归六黄汤含药血清对去势抵抗性前列腺癌PC-3细胞EGFR/PI3K/AKT信号通路的影响

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作者 崔洪泉 孙自学 +3 位作者 潘世杰 白洋洋 韩艳丽 屈颖伟 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期840-844,共5页

目的探讨当归六黄汤含药血清对去势抵抗性前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭、凋亡及EGFR/PI3K/AKT信号通路的影响。方法按照血清药理学方法,根据SD大鼠体质量,采用不同剂量当归六黄汤连续灌胃,低剂量组12.5g·kg^(-1)·d^(-1),中剂量... 目的探讨当归六黄汤含药血清对去势抵抗性前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭、凋亡及EGFR/PI3K/AKT信号通路的影响。方法按照血清药理学方法,根据SD大鼠体质量,采用不同剂量当归六黄汤连续灌胃,低剂量组12.5g·kg^(-1)·d^(-1),中剂量组25g·kg^(-1)·d^(-1),高剂量组50g·kg^(-1)·d^(-1),空白组应用生理盐水10ml·kg^(-1)·d^(-1),连续灌胃7d取血制备空白血清和当归六黄汤含药血清,以去势抵抗性前列腺癌PC-3细胞为研究对象,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测对细胞增殖的影响;采用Transwell小室实验检测PC-3细胞的侵袭情况并计算侵袭率;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PC-3细胞内EGFR/PI3K/AKT蛋白水平表达情况。结果与空白组相比较,当归六黄汤含药血清低、中、高剂量组均可显著抑制PC-3细胞增殖(P<0.05),对PC-3细胞的侵袭均有明显抑制作用,穿膜细胞数明显减少(P<0.05),细胞总凋亡率均上升(P<0.05),均呈浓度依赖性;PC-3细胞内EGFR/PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达总体均呈下降趋势(P<0.05),以上均呈现浓度依赖性。结论当归六黄汤含药血清对人前列腺癌PC-3细胞具有抑制增殖并能诱导其凋亡,作用机制可能与EGFR/PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多

关键词 当归六黄汤 前列腺癌 增殖 凋亡 egfr/pi3k/akt信号通路

原文传递

敲除Brg1基因对小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞数量和功能的影响及其机制研究 被引量：3

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作者 阮玲瑛 薛坤娇 +2 位作者 应林燕 符州 邹文静 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期656-663,共8页

目的研究染色质重构复合物核心催化亚基(Brahma-related gene 1,Brg1)对C57BL/6小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞数量和功能的影响及其可能的机制。方法取6~8周龄雌性野生型C57BL/6小鼠(Wild type,WT)及Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cell ... 目的研究染色质重构复合物核心催化亚基(Brahma-related gene 1,Brg1)对C57BL/6小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞数量和功能的影响及其可能的机制。方法取6~8周龄雌性野生型C57BL/6小鼠(Wild type,WT)及Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cell Ⅱ,AECⅡs)上特异性敲除Brg1的C57BL/6小鼠(Brg1fl/fl)作为实验对象,每组选取8只小鼠,收取标本,利用免疫组化及免疫荧光分析肺组织中表面活性物质相关蛋白C(surfactant-associated protein C,SFTPC)阳性的细胞率,流式细胞术分析小鼠肺组织中表面活性物质蛋白C前体蛋白(prosurfactant protein C,pro SP-C)阳性的细胞(即AECⅡs)数量。Western blot检测各组小鼠肺组织中pro SP-C、SFTPC、表面活性物质相关蛋白A(surfactant-associated protein A,SFTPA)、表面活性物质相关蛋白D(surfactant-associated protein D,SFTPD)的表达水平。Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达及增殖相关信号转导途径中关键蛋白EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT及NF-κB p65的活化水平。结果抗SFTPC免疫组化、免疫荧光显示其在肺泡上皮表达较WT小鼠增多(P<0.05);流式细胞术显示Brg1fl/fl组小鼠肺组织中pro SP-C+的细胞百分比较WT小鼠明显增高(P<0.05),Western blot检测结果显示AECⅡs的功能性蛋白pro SP-C、SFTPC、SFTPA及SFTPD在Brg1^fl/fl小鼠中明显增多;Brg1^fl/fl组小鼠肺组织中NF-κB p65及周期蛋白CyclinD1的表达增加,且p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT百分比显著提高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论特异性敲除C57BL/6小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞中的Brg1可促使AECⅡs数量和分泌功能的增加,其可能机制与敲除Brg1促进EGFR/PI3K/AKT/NF-κB信号通路的激活,且与增殖周期蛋白CyclinD1表达的增加有关。 展开更多

关键词 Brg1 AECⅡ egfr/pi3k/akt信号通路 NF-ΚB P65 细胞周期蛋白1

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芥子碱硫氰酸盐对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖、上皮间质转化、转移的影响及其机制研究 被引量：2

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作者 苏羽屾 曾智锐 +6 位作者 荣冬芸 王叶 李丹 唐姗姗 汪涛 龙雪梅 曹煜 《中国药房》 CAS 北大核心 2021年第8期952-960,共9页

目的:研究芥子碱硫氰酸盐(ST)对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖、上皮间质转化(EMT)和转移的影响,并考察其可能的作用机制。方法:将人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞分为空白对照组(0.1%二甲基亚砜)和ST不同浓度组(5、10、20μmol/L),分别通过... 目的:研究芥子碱硫氰酸盐(ST)对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖、上皮间质转化(EMT)和转移的影响,并考察其可能的作用机制。方法:将人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞分为空白对照组(0.1%二甲基亚砜)和ST不同浓度组(5、10、20μmol/L),分别通过CCK-8实验、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷染色实验、细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验测定各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过Western blot实验和免疫荧光实验分别测定各组细胞中EMT相关指标N-钙黏着蛋白(N-cadherin)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)的表达水平。另将SCL-1细胞分为空白对照组(0.1%二甲基亚砜)、ST单用组(20μmol/L)、ST+NSC228155组[20μmol/L ST+100μmol/L NSC228155(EGFR激动剂)]和ST+SC79组[20μmol/L ST+20μmol/L SC79(PI3K/Akt激动剂)],分别通过CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验测定各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并通过Western blot实验测定空白对照组(0.1%二甲基亚砜)和ST不同浓度组(5、10、20μmol/L)组细胞中表皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达水平,以验证ST的作用与EGFR/PI3K/Akt信号通路的关系。另将SCL-1细胞和人正常皮肤成纤维细胞WS1分别分为空白对照组(0.1%二甲基亚砜)、ST组(20μmol/L)、ZD1839组(阳性对照,20μmol/L,EGFR抑制剂)和LY294002组(阳性对照,20μmol/L,PI3K/Akt抑制剂),采用CCK-8实验测定各组细胞的增殖能力,以评价ST的细胞毒性。结果:与空白对照组比较,5、10、20μmol/L ST组SCL-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著减弱(P<0.05);Western blot和免疫荧光实验结果显示,5、10、20μmol/L ST组SCL-1细胞中N-cadherin蛋白的表达均显著下调(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达均显著上调(P<0.05),并且细胞中EGFR、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05)。与ST单用组比较,ST+NSC2 展开更多

关键词 芥子碱硫氰酸盐 人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞 增殖 上皮间质转化 转移 egfr/pi3k/akt信号通路

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