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柔嫩艾美尔球虫EGF-like结构域基因的克隆及原核表达 被引量:2
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作者 杨拓 李新 +2 位作者 宫鹏涛 张西臣 李建华 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第1期51-55,共5页
目的克隆并原核表达柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)微线蛋白4(EtMIC4)的EGF-like结构域。方法收集并纯化柔嫩艾美尔球虫子孢子,用Trizol法提取总RNA,并反转录成cDNA,利用RT-PCR技术扩增EtMIC4EGFlike基因;回收PCR产物,与pMD18-T载体连... 目的克隆并原核表达柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)微线蛋白4(EtMIC4)的EGF-like结构域。方法收集并纯化柔嫩艾美尔球虫子孢子,用Trizol法提取总RNA,并反转录成cDNA,利用RT-PCR技术扩增EtMIC4EGFlike基因;回收PCR产物,与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-EGF-like,然后亚克隆至原核表达载体pET-30a中,构建重组表达质粒pET-30a-EGF-like并转化至Transetta感受态,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果成功克隆了EtMIC4EGF-like(390bp)基因,双酶切鉴定重组表达质粒pET-30a-EGF-like构建正确。SDS-PAGE分析重组EGF-like蛋白的分子质量单位约为30ku,Western blot显示该蛋白能被鸡抗柔嫩艾美尔球虫血清识别。结论成功构建了pET-30a-EGF-like原核表达质粒,并证明其原核表达产物EGF-like蛋白具有反应原性,为该蛋白的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美尔球虫 egf-like 原核表达
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肾细胞癌中Egfl7表达与血管生成的相关性研究 被引量:1
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作者 许韩峰 刘学锋 +2 位作者 殷晓鸣 刘先东 吴斌 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第5期903-905,共3页
目的:探讨肾细胞癌组织中Egfl7的表达对肾细胞癌血管生成的作用和意义。方法:应用SP法对82例肾癌及6例正常肾组织标本进行Egfl7和CD34免疫组化染色,检测其Egfl7表达和CD34标记的微血管密度(MVD)值,分析Egfl7表达和MVD之间,及其与肾癌临... 目的:探讨肾细胞癌组织中Egfl7的表达对肾细胞癌血管生成的作用和意义。方法:应用SP法对82例肾癌及6例正常肾组织标本进行Egfl7和CD34免疫组化染色,检测其Egfl7表达和CD34标记的微血管密度(MVD)值,分析Egfl7表达和MVD之间,及其与肾癌临床病理之间的关系。结果:82例肾癌病例中,57例Egfl7表达阳性,总阳性率为69.5%。Egfl7表达与肾癌组织学分类、分期、分级和静脉浸润有关(P<0.05)。Egfl7阳性表达和阴性表达组织中MVD值分别为127.3±31.3和79.4±27.2,差别有显著性(P=0.001),且MVD和Egfl7的表达呈正相关(r=0.875,P<0.05)。结论:Egfl7可能在促进肾细胞癌血管生成中起重要作用。 展开更多
关键词 egf-like domain7 微血管密度 肾细胞癌
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The expression of TGF-β_1,ADAM12 and HB-EGF in primary hepatic carcinoma 被引量:1
3
作者 Hailin Cheng De'an Tian +5 位作者 Xudong Hu Mei Liu Zili Dan Bo Wang Peiyuan Li Xiaoping Chen 《The Chinese-German Journal of Clinical Oncology》 CAS 2008年第12期686-689,共4页
Objective: To detect the expression and location of TGF-β1, ADAM12 and HB-EGF in primary hepatic carcinoma and study their effect on the growth and metastasis of hepatoma carcinoma cell. Methods: TGF-β1, ADAM12 and ... Objective: To detect the expression and location of TGF-β1, ADAM12 and HB-EGF in primary hepatic carcinoma and study their effect on the growth and metastasis of hepatoma carcinoma cell. Methods: TGF-β1, ADAM12 and HB-EGF were detected by RT-PCR and immunohistochemistry in 30 cases of hepatic carcinoma tissues, 30 cases of adjacent carci- noma tissues and 5 cases of normal hepatic tissues. Results: RT-PCR analyses showed that the mRNA expression of TGF-β1, ADAM12 and HB-EGF were markedly increased in each hepatic carcinoma tissue compared with its adjacent tissue (P < 0.01), but no signal was detected in normal hepatic tissue. Immunohistochemistry showed the same outcome on the expression of above three factors in hepatic tissues as RT-PCR. Proteins location analyses showed the proteins of TGF-β1, ADAM12 and HB-EGF all distributed in the stroma of hepatic carcinoma tissues. The positive correlation was found between TGF-β1 and ADAM12 (r = 0.6137, P < 0.05), as well as ADAM12 and HB-EGF (r = 0.5763, P < 0.05). The protein expression of TGF-β1, ADAM12 and HB-EGF were correlated with the size of tumors, degree of differentiation of hepatoma carcinoma cells, portal vein thrombus and the metastasis of absorbent glands, especially with hepatic cirrhosis caused by hepatitis B virus. Conclu- sion: TGF-β1, ADAM12 and HB-EGF possibly play an important role in the process of growth, invasion and metastasis of hepatoma carcinoma cell, meanwhile, the above three factors may collectively participate in the transition from hepatic cirrhosis caused by hepatitis B virus to hepatocellular carcinoma. 展开更多
关键词 transforming growth factor-beta1 a disintegrin and metalloprotease-12 heparin-binding egf-like growth factor hepatic carcinoma metastasis
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Proteomics identifies EGF-like domain multiple 7 as a potential therapeutic target for epidermal growth factor receptor-positive glioma 被引量:1
4
作者 Fei-yi-fan Wang Si-yi Wang-gou +5 位作者 Hang Cao Nian Jiang Qi Yang Qi Huang Chun-hai Huang Xue-jun Li 《Cancer Communications》 SCIE 2020年第10期518-530,共13页
Background:Glioma,the most frequent primary tumor of the central nervous system,has poor prognosis.The epidermal growth factor receptor(EGFR)pathway and angiogenesis play important roles in glioma growth,invasion,and ... Background:Glioma,the most frequent primary tumor of the central nervous system,has poor prognosis.The epidermal growth factor receptor(EGFR)pathway and angiogenesis play important roles in glioma growth,invasion,and recurrence.The present study aimed to use proteomic methods to probe into the role of the EGF-EGFR-angiogenesis axis in the tumorigenesis of glioma and access the therapeutic efficacy of selumetinib on glioma.Methods:Proteomic profiling was used to characterize 200 paired EGFRpositive and EGFR-negative glioma tissues of all pathological types.The quantitative mass spectrometry data were used for systematic analysis of the proteomic profiles of 10 EGFR-positive and 10 EGFR-negative glioma cases.Consensusclustering analysis was used to screen target proteins.Immunofluorescence analysis,cell growth assay,and intracranial xenograft experiments were used to verify and test the therapeutic effect of selumetinib on glioma.Results:Advanced proteomic screening demonstrated that the expression of EGF-like domain multiple 7(EGFL7)was higher in EGFR-positive tumor tissues than in EGFR-negative tumor tissues.In addition,EGFL7 could act as an activatorin vitro and in vivo to promote glioma cell proliferation.EGFL7 was associated strongly with EGFR and prognosis.EGFL7 knockdown effectively suppressed glioma cell proliferation.Selumetinib treatment showed tumor reduction effect in EGFR-positive glioblastoma xenograft mouse model.Conclusions:EGFL7 is a potential diagnostic biomarker and therapeutic target of glioma.Selumetinib could target the EGFR pathway and possibly improve the prognosis of EGFR-positive glioma. 展开更多
关键词 GLIOMA PROTEOMICS Epidermal growth factor receptor egf-like domain multiple 7 Targeted therapy SELUMETINIB
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自然流产患者滋养细胞肝素表皮生长因子的表达及意义 被引量:15
5
作者 胡昌东 归绥琪 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期491-493,F003,共4页
目的 探讨自然流产患者滋养细胞肝素表皮生长因子 (HB EGF)的表达及其与滋养细胞增殖细胞核抗原 (PCNA)的关系。方法 选择自然流产患者和正常妊娠者各 2 0例 ,采用免疫组织化学法分析滋养细胞HB EGF和PCNA的表达。结果 HB EGF主要存... 目的 探讨自然流产患者滋养细胞肝素表皮生长因子 (HB EGF)的表达及其与滋养细胞增殖细胞核抗原 (PCNA)的关系。方法 选择自然流产患者和正常妊娠者各 2 0例 ,采用免疫组织化学法分析滋养细胞HB EGF和PCNA的表达。结果 HB EGF主要存在于细胞质 ,合体滋养层和细胞滋养层均有表达 ,部分流产滋养细胞不表达。自然流产患者滋养细胞HB EGF和PCNA的表达显著低于正常妊娠者 (P <0 .0 1) ,成正相关 (r =0 .4 5 4 ,P <0 .0 1)。结论 HB EGF的表达和滋养细胞增殖相关 ,HB 展开更多
关键词 自然流产 滋养细胞肝素表皮生长因子 表达 免疫组织化学法 增殖细胞核抗原
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颗粒细胞EGF类因子信号通路在调控卵母细胞成熟和发育中的作用 被引量:10
6
作者 杨鑫宇 贾振伟 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期137-145,共9页
动物体内卵泡排卵前促黄体素(luteinizing hormone, LH)诱导了卵丘颗粒细胞扩散,并启动卵母细胞恢复减数分裂。普遍认为,卵泡壁层颗粒细胞表达LH受体,卵母细胞及其周围卵丘细胞不表达LH受体,LH通过作用于卵泡壁层颗粒细胞产生信号分子,... 动物体内卵泡排卵前促黄体素(luteinizing hormone, LH)诱导了卵丘颗粒细胞扩散,并启动卵母细胞恢复减数分裂。普遍认为,卵泡壁层颗粒细胞表达LH受体,卵母细胞及其周围卵丘细胞不表达LH受体,LH通过作用于卵泡壁层颗粒细胞产生信号分子,这些信号分子作用于卵丘颗粒细胞介导了LH生物作用。然而,一直以来,关于排卵前介导LH作用而诱导卵母细胞成熟的机制一直存在争议。目前研究认为,LH作用于卵泡壁层颗粒细胞后产生了EGF类因子,并与颗粒细胞的受体结合,促进了卵母细胞的成熟和发育。由于体外成熟的卵丘卵母细胞复合体来源于生长卵泡,其卵丘颗粒细胞EGF类因子信号系统不完善,目前的体外成熟培养体系难以模拟卵泡内的生理环境,导致卵母细胞体外发育能力较差,限制了这些卵母细胞的利用效率。本文综述了颗粒细胞EGF类因子信号系统、EGF类因子在调控卵母细胞成熟中的作用及对卵母细胞发育能力的影响,为优化卵母细胞体外成熟培养体系,完善卵丘颗粒细胞的EGF类因子的信号系统,进而提高卵母细胞体外成熟效率提供理论依据。 展开更多
关键词 颗粒细胞 egf类因子 卵母细胞成熟 卵母细胞发育能力
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艾叶提取物对凝血因子Ⅻ的作用机制和药效物质研究 被引量:9
7
作者 王珊珊 徐昊 +3 位作者 陈青 谭开云 凌云 葛金文 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1152-1157,共6页
目的观察艾叶提取物对FⅫ的作用位点并检测其所含物质,阐明其抗凝、促凝机制及药效物质基础。方法检测艾叶提取物干预下脑缺血病人血浆凝血4项、FⅫ活性;FⅫ、FⅫ-2含量;检测艾叶LODB1-6干预下血浆凝血3项、连续血浆凝固时间、FⅫ激活... 目的观察艾叶提取物对FⅫ的作用位点并检测其所含物质,阐明其抗凝、促凝机制及药效物质基础。方法检测艾叶提取物干预下脑缺血病人血浆凝血4项、FⅫ活性;FⅫ、FⅫ-2含量;检测艾叶LODB1-6干预下血浆凝血3项、连续血浆凝固时间、FⅫ激活。液质联用分析LODB5。结果艾叶提取物延长了血浆APTT、PT、TT,降低高岭土对FⅫ的激活作用;各剂量组降低了FⅫ含量,但只有中、高剂量组FⅫ-2的含量降低。相比于LODB1-3,LODB5、6可延长APTT,LODB5还使TT延长;LODB5高剂量组和LODB6各剂量组FⅫ含量降低。液质联用分析LODB5,得到6种含量较高物质。结论艾叶提取物激活FⅫ产生促凝活性与EGF-Like2结构域有关。但艾叶提取物对脑缺血病人血浆整体表现出抗凝活性。其药效物质基础可能是异戊酸冰片酯、紫花牡荆素、棕矢车菊素、伞形花内酯、5,6,4′-三羟基-7,3′-二甲氧基黄酮、丁香酚。 展开更多
关键词 凝血因子Ⅻ 艾叶提取物 egf-like2结构域 脑缺血 血液凝固 抗凝血
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猪HB-EGF基因多态性与产仔数的关联性分析 被引量:8
8
作者 马喜山 王爱国 +1 位作者 刘桂芬 傅金恋 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期274-282,共9页
【目的】研究猪HB-EGF基因的多态性及其与产仔数的关系,寻找与猪产仔数相关的分子遗传标记,以加快猪育种进程。【方法】利用PCR-SSCP技术研究HB-EGF基因外显子多态性,利用最小二乘均数法对其与产仔数的关系进行分析,同时对两个多态位点... 【目的】研究猪HB-EGF基因的多态性及其与产仔数的关系,寻找与猪产仔数相关的分子遗传标记,以加快猪育种进程。【方法】利用PCR-SSCP技术研究HB-EGF基因外显子多态性,利用最小二乘均数法对其与产仔数的关系进行分析,同时对两个多态位点的方差组分进行了分析。【结果】在两对引物(E5和E7)中各检测到一个多态位点,均出现3种基因型(AA、BB、AB)。E5位点:对于大白猪,在3~8胎中,BB型个体的TNB和NBA均显著高于AA型个体(P<0.05),在所有胎次中,BB型个体的TNB显著高于AA型个体(P<0.05),NBA极显著高于AA型个体(P<0.01),TNB和NBA的遗传主要受基因加性效应的影响;对于长白猪,在4个阶段中3种基因型个体的TNB和NBA之间差异不显著(P>0.05)。E7位点:对于大白猪,在3~8胎和所有胎次中,AA型个体的TNB均显著高于BB型个体(P<0.05),TNB的遗传主要受基因加性效应的影响;对于长白猪,在3~8胎和所有胎次中,AB型个体的NBA均显著高于BB型个体。【结论】对于大白猪,E5位点BB基因型可作为在TNB和NBA性状上的标记基因型,E7位点BB基因型可以作为TNB性状的标记基因型。 展开更多
关键词 肝素结合性表皮生长因子 多态性 产仔数
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髋关节发育不良合并骨关节炎患者血清标志物表达
9
作者 孙智 张方青 《中华关节外科杂志(电子版)》 CAS CSCD 2024年第1期24-29,共6页
目的探讨血清肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)、CC类趋化因子配体5(CCL5)在髋关节发育不良(DDH)并发骨关节炎患者中表达情况及临床意义。方法本研究纳入邢台市第三医院收治的180例DDH患者设为研究组,排除合并血液系统疾病、代谢性疾病... 目的探讨血清肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)、CC类趋化因子配体5(CCL5)在髋关节发育不良(DDH)并发骨关节炎患者中表达情况及临床意义。方法本研究纳入邢台市第三医院收治的180例DDH患者设为研究组,排除合并血液系统疾病、代谢性疾病、风湿性免疫疾病、重要脏器功能衰竭、恶性肿瘤、全身炎性疾病以及长期使用免疫抑制剂、糖皮质激素、非甾体类抗炎药的患者,根据有无并发骨关节炎将其分为并发组(72例)和未并发组(108例)。另同期选取180例健康体检者设为对照组。所有受试者均检测血清HB-EGF、CCL5水平。根据Tonnis分级标准判定骨关节炎严重程度,对比骨关节炎不同严重程度DDH患者的血清HB-EGF、CCL5水平,采用多因素logistic回归分析DDH患者并发骨关节炎的影响因素,并采用Spearman相关性分析法分析血清HB-EGF、CCL5表达水平与DDH患者骨关节炎严重程度的关系。结果研究组血清HB-EGF、CCL5水平高于对照组(t=29.933、14.021,均为P<0.001);并发组年龄、Crowe分型Ⅲ~Ⅳ型患者占比及血清HB-EGF、CCL5水平均高于未并发组(t=8.857、χ^(2)=7.018、t=12.025、t=8.536,均为P<0.05);年龄[比值比(OR)=1.504,95%置信区间(CI)(1.132,2.457),P=0.014]、Crowe分型[OR=2.347,95%CI(1.568,3.742),P<0.001]、血清HB-EGF水平[OR=1.994,95%CI(1.472,2.993),P<0.001]、血清CCL5水平[OR=1.548,95%CI(1.055,2.602),P=0.007]均是DDH患者并发骨关节炎的独立影响因素;骨关节炎不同严重程度DDH患者血清HB-EGF、CCL5水平差异有统计学意义(F=27.255、12.855,均为P<0.05),2级和3级均高于1级(2级t=5.599、5.749,3级t=3.669、3.803,均为P<0.05),3级高于2级(t=2.157、2.232,均为P<0.05);血清HB-EGF、CCL5表达水平与DDH患者骨关节炎严重程度呈正相关(r=0.628、0.497,均为P<0.05)。结论血清HB-EGF、CCL5在DDH患者中表达上调,在DDH并发骨关节炎中表达水平更高,与骨关节炎严重程度呈正相关,且是DDH患者并� 展开更多
关键词 发育性髋关节发育不良 骨关节炎 肝素结合egf样生长因子 趋化因子CCL5 数据相关性
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HEG1在心血管生成和肿瘤发生发展中的研究进展 被引量:1
10
作者 王瑶瑶 于新娟 +2 位作者 王家卉 李庆海 韩伟 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期136-140,共5页
具有表皮生长因子样结构域的心脏发育蛋白1(heart development protein with EGF-like domains 1,HEG1)是一种新型的黏蛋白样膜蛋白,具有较长的O-糖基化区域和EGF结构域。近年来研究发现,HEG1在胚胎发育和心血管生成中起关键作用,也与... 具有表皮生长因子样结构域的心脏发育蛋白1(heart development protein with EGF-like domains 1,HEG1)是一种新型的黏蛋白样膜蛋白,具有较长的O-糖基化区域和EGF结构域。近年来研究发现,HEG1在胚胎发育和心血管生成中起关键作用,也与一系列肿瘤的发生发展密切相关。本文介绍HEG1在心血管形成和肿瘤发生发展中的研究进展,为相关疾病的发病机制和诊疗提供思路。 展开更多
关键词 具有表皮生长因子样结构域的心脏发育蛋白1 心血管系统 肿瘤 诊断
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TMEFF1对神经母细胞瘤细胞系增殖的调控
11
作者 贾安娜 郭金鑫 +4 位作者 张璇 战世佳 于永波 郭永丽 常艳 《基础医学与临床》 CAS 2024年第5期637-644,共8页
目的探究具有表皮生长因子结构域和两个卵泡抑素样结构域的跨膜蛋白1(TMEFF1/tomoregulin1)对神经母细胞瘤(NB)细胞系SN-K-BE(2)增殖和迁移的调控效应。方法RT-qPCR检测神经母细胞瘤细胞系SN-K-BE(2)、IMR32、SK-N-SH、SK-N-AS和正常细... 目的探究具有表皮生长因子结构域和两个卵泡抑素样结构域的跨膜蛋白1(TMEFF1/tomoregulin1)对神经母细胞瘤(NB)细胞系SN-K-BE(2)增殖和迁移的调控效应。方法RT-qPCR检测神经母细胞瘤细胞系SN-K-BE(2)、IMR32、SK-N-SH、SK-N-AS和正常细胞系MCF 10A、hTERT RPE-1中TMEFF1 mRNA表达量。利用小分子干扰RNA(siRNA)瞬时敲低MCF 10A、hTERT RPE-1细胞和SN-K-BE(2)NB细胞中TMEFF1表达,RT-qPCR检测TMEFF1 mRNA瞬时敲低效果后,结晶紫染色、实时无标记细胞分析(RTCA)检测细胞增殖;CellTiter-Glo(CTG)检测细胞活性。利用短发夹RNA(shRNA)稳定敲低正常细胞系和NB细胞系中TMEFF1表达,进一步通过集落形成实验、RTCA、CTG检测细胞增殖和活性,此外,通过免疫荧光检测Ki-67细胞阳性率,细胞划痕实验检测细胞迁移率。结果与正常细胞系相比,NB细胞系中TMEFF1 mRNA表达量显著较高(P<0.001)。敲低TMEFF1对正常细胞系增殖影响无统计学意义,但在SN-K-BE(2)细胞中敲低TMEFF1,RTCA和集落形成实验结果显示细胞增殖能力减弱(P<0.05),免疫荧光结果显示Ki-67阳性细胞率减少(P<0.001),CTG结果显示细胞活性降低(P<0.01),细胞划痕实验结果显示敲低组细胞迁移率显著低于对照组(P<0.01)。结论TMEFF1是一种特异在NB细胞中高表达的膜蛋白,TMEFF1敲低后不影响正常细胞系的增殖,但显著抑制NB细胞系的增殖、迁移,提示TMEFF1可能在NB发生发展中发挥重要作用,可能成为NB靶向治疗的潜在新靶点。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 表皮生长因子结构域和两个卵泡抑素样结构域的跨膜蛋白1(TMEFF1/tomoregulin1) 增殖 迁移
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肝素结合性表皮生长因子在生殖医学中的研究进展 被引量:6
12
作者 周一鸣 汤小晗 卢美松 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2017年第2期156-159,共4页
肝素结合性表皮生长因子(heparin-binding epithelial growth factor,HB-EGF)是表皮生长因子家族中的一员,是一种跨膜蛋白膜固定型HB-EGF(pro HB-EGF)。proHB-EGF在特殊的金属蛋白酶作用下可水解产生可溶性HB-EGF(s HB-EGF)。proHB-EGF... 肝素结合性表皮生长因子(heparin-binding epithelial growth factor,HB-EGF)是表皮生长因子家族中的一员,是一种跨膜蛋白膜固定型HB-EGF(pro HB-EGF)。proHB-EGF在特殊的金属蛋白酶作用下可水解产生可溶性HB-EGF(s HB-EGF)。proHB-EGF不仅是sHB-EGF的前体,而且本身也是生物活性分子。proHB-EGF与膜蛋白形成复合体,此复合体定位于细胞间连接区,暗示proHB-EGF可能是通过近分泌机制实现其在细胞间的信号传导功能。在一个试管模型中,proHB-EGF表达为生长抑制活性,而sHB-EGF表达为生长激活活性。这些特性指出pro HB-EGF和sHB-EGF是通过不同的通路发挥作用。proHB-EGF和sHB-EGF在人体内的功能尚不明确,但他们在许多生理过程中起重要作用,HB-EGF在生殖内分泌领域的研究受到极大关注,如黄体细胞的分裂与凋亡、卵泡发育、胚胎移植等。 展开更多
关键词 肝素结合性表皮生长因子 表皮生长因子 肝素 黄体细胞 卵泡 胚胎移植 生殖医学
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人EGFL7基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定 被引量:4
13
作者 黄纯海 李学军 +2 位作者 罗勇 黄军 袁贤瑞 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2009年第6期513-516,共4页
目的构建人类表皮生长因子域7(EGFL7)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体。方法将靶向EGFL7基因的短发夹结构RNA(shRNA)表达序列连接到包含U6启动子及绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的慢病毒载体pGCL-GFP中,获得重组质粒,命名为pGCL-GFP-vshEGFL7... 目的构建人类表皮生长因子域7(EGFL7)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体。方法将靶向EGFL7基因的短发夹结构RNA(shRNA)表达序列连接到包含U6启动子及绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的慢病毒载体pGCL-GFP中,获得重组质粒,命名为pGCL-GFP-vshEGFL7,经多聚酶链反应(PCR)和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒pHelper 1.0及pHelper 2.0通过lipofectamine 2000共转染至包装细胞293T,包装产生病毒液,测定其滴度。结果PCR扩增和测序结果证实EGFL7shRNA核苷酸链序列插入正确,包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为4.8×107TU/ml。结论成功构建人EGFL7基因shRNA慢病毒载体。 展开更多
关键词 类表皮生长因子域7 RNA干扰 短发夹结构RNA 慢病毒
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肝素结合表皮生长因子对肝癌细胞迁移、侵袭以及上皮间质转化的影响 被引量:4
14
作者 马丽萍 张小莲 +2 位作者 劳显钧 李山 秦雪 《广西医科大学学报》 CAS 2015年第3期353-356,共4页
目的:探讨肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)对肝癌细胞转移能力的影响。方法:划痕法观察HB-EGF对肝癌Huh7细胞的迁移能力的影响,Transwell侵袭实验检测HB-EGF作用48h后肝癌Huh7细胞的侵袭情况,RT-PCR检测上皮间质转化(EMT)分子标记物基因... 目的:探讨肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)对肝癌细胞转移能力的影响。方法:划痕法观察HB-EGF对肝癌Huh7细胞的迁移能力的影响,Transwell侵袭实验检测HB-EGF作用48h后肝癌Huh7细胞的侵袭情况,RT-PCR检测上皮间质转化(EMT)分子标记物基因表达。结果:10μg/L的HB-EGF可以促进肝癌Huh7细胞的迁移,1μg/L和10μg/L的HB-EGF均可以促进肝癌Huh7细胞的侵袭。并且HB-EGF可以抑制E-钙黏蛋白表达同时促进Slug的表达。结论:HB-EGF可以促进肝癌Huh7细胞的迁移、侵袭以及EMT。 展开更多
关键词 肝癌 肝素结合表皮生长因子 转移 上皮间质转化
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肝素结合表皮生长因子抑制剂对卵巢上皮性癌紫杉醇耐药的逆转作用及其机制 被引量:3
15
作者 汤小晗 卢美松 +1 位作者 邓锁 李萌 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期110-115,共6页
目的 探讨肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)抑制剂CRM197对卵巢上皮性癌(卵巢癌)紫杉醇耐药的逆转作用及可能机制.方法 (1)四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测CRM197作用后卵巢癌紫杉醇耐药细胞系A2780/Taxol细胞对紫杉醇的50%抑制浓度... 目的 探讨肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)抑制剂CRM197对卵巢上皮性癌(卵巢癌)紫杉醇耐药的逆转作用及可能机制.方法 (1)四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测CRM197作用后卵巢癌紫杉醇耐药细胞系A2780/Taxol细胞对紫杉醇的50%抑制浓度(IC50);蛋白印迹法及实时PCR技术分别检测CRM197作用后A2780/Taxol细胞中HB-EGF、表皮生长因子受体(EGFR)、P糖蛋白(P-gp)蛋白及多药耐药基因(MDR1)mRNA的表达.(2)构建MDR1小分子RNA(siRNA)质粒并转染A2780/Taxol细胞,实验分为4组,即空载体组、MDR1 siRNA组、空载体+CRM197组、MDR1 siRNA+CRM197组,检测4组A2780/Taxol细胞中P-gp功能[以P-gp的底物若丹明123(Rh123)的荧光强度表示]和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白活性[以4硝基苯胺(pNA)浓度表示].(3)建立卵巢癌A2780/Taxol细胞的裸鼠移植瘤模型,免疫组化SP法检测CRM197作用后裸鼠移植瘤组织中EGFR和P-gp蛋白的表达.结果 (1)MTT比色法检测显示,CRM197作用后A2780/Taxol细胞对紫杉醇的IC50为(6.4±0.3)μmol/L,明显低于未经CRM197作用的A2780/Taxol细胞[(34.1±0.5)μmol/L;P〈0.01],CRM197对紫杉醇的耐药逆转倍数为5.3.蛋白印迹法检测显示,CRM197作用后A2780/Taxol细胞中HB-EGF、EGFR、P-gp蛋白的表达水平(分别为1.44±0.29、0.71±0.25、0.82±0.19)均明显低于未经CRM197作用的A2780/Taxol细胞(分别为2.72±0.32、1.87±0.31、1.84±0.27,P均〈0.05);实时PCR技术检测显示,CRM197作用后A2780/Taxol细胞中MDR1 mRNA的表达水平(0.79±0.13)也明显低于未经CRM197作用的A2780/Taxol细胞(1.78±0.27,P〈0.05).(2)空载体组、MDR1 siRNA组、空载体+CRM197组、MDR1 siRNA+CRM197组A2780/Taxol细胞中的Rh123平均荧光强度分别为33.4±1.6、56.3±3.3、43.5±3.1、100.4±7.4,细胞中pNA浓度分别为(11.4±1.2)、(52.8±0.9)、(71.2±3.6)、(82.7±3.8)μmol/L,上述指标均 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 肝素结合性egf样生长因子 细菌蛋白质类 紫杉酚 抗药性 细菌
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毛蕊异黄酮对大鼠呼吸机相关性肺损伤的影响及其与HB-EGF的关系 被引量:3
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作者 岳琳莹 赵永忠 +2 位作者 杨晓金 何斌 王敏 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1142-1146,共5页
目的评价毛蕊异黄酮对大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)的影响及其与肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)的关系。方法清洁级雄性Wistar大鼠25只,6周龄,体重250~300 g,采用随机数字表法分为5组(n=5):假手术组(Sham组)、VILI组、毛蕊异黄酮5 mg... 目的评价毛蕊异黄酮对大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)的影响及其与肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)的关系。方法清洁级雄性Wistar大鼠25只,6周龄,体重250~300 g,采用随机数字表法分为5组(n=5):假手术组(Sham组)、VILI组、毛蕊异黄酮5 mg/kg组(M1组)、毛蕊异黄酮10 mg/kg组(M2组)、毛蕊异黄酮20 mg/kg组(M3组)。于机械通气前7 d开始口饲药物,Sham组和VILI组口饲玉米油1 ml/d;M1组-M3组分别口饲毛蕊异黄酮溶液5、10、30 mg/kg,共7 d。之后禁食8 h,制备VILI模型。机械通气4 h后,行左肺肺泡支气管灌洗术,回收支气管肺泡灌洗液(BALF),采用BCA法检测总蛋白浓度,采用ELISA法测定IL-1β、TNF-α和IL-10浓度,瑞氏染色后计算中性粒细胞比例;随后处死大鼠,取肺组织,计算湿重/干重(W/D)比值,采用Western blot法检测Bax、Bcl-2及HB-EGF表达,免疫组化法检测HB-EGF染色面积,HE染色法观察肺病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡情况,计算TUNEL阳性细胞密度。结果与Sham组比较,VILI组W/D比值、BALF中性粒细胞比例、总蛋白、TNF-α和IL-10浓度升高,HB-EGF表达下调,免疫组化染色面积增加,Bax和Bcl-2表达上调,TUNEL阳性细胞密度升高(P<0.05),肺组织病理学损伤加重。与VILI组比较,M1组BALF总蛋白、TNF-α和IL-1β浓度降低,HB-EGF表达上调,TUNEL阳性细胞密度降低;M2组W/D比值、BALF总蛋白、TNF-α和IL-1β浓度降低,M3组W/D比值、BALF中性粒细胞比例、总蛋白、TNF-α、IL-1β和IL-10浓度降低,M2组和M3组HB-EGF表达上调,免疫组化染色面积增加,Bax表达下调,Bcl-2表达上调,TUNEL阳性细胞密度降低(P<0.05),肺组织病理学损伤减轻。结论毛蕊异黄酮可减轻大鼠VILI,机制可能与促进肺组织HB-EGF的表达,减轻炎症反应及细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 中草药 呼吸机相关性肺损伤 肝素结合egf样生长因子
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人类新基因cegl cDNA的克隆及表达研究 被引量:1
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作者 付佳琪 王峦 +2 位作者 陈微 慈宏亮 李亦平 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2004年第5期409-417,共9页
CLECT and EGF-like domain contained Gene l(cegl)基因是用电子克隆的方法获得的人类新基因。该基因定位在人类的第14号染色体上,是一个单一外显子的基因。cegl基因的cDNA长度为2050bp,通过生物信息学方法预测它包含一个1340bp的完整... CLECT and EGF-like domain contained Gene l(cegl)基因是用电子克隆的方法获得的人类新基因。该基因定位在人类的第14号染色体上,是一个单一外显子的基因。cegl基因的cDNA长度为2050bp,通过生物信息学方法预测它包含一个1340bp的完整阅读框架,编码一个490个氨基酸的蛋白,含有CLECT、EGF-like结构域各一个。以cegl基因全长编码区为探针的整体原位杂交结果显示该基因的小鼠和鸡的同源基因在各自早期胚胎头部中特异表达,并且在不同时期胚胎神经系统增殖迅速的部位中有大量的表达。RT-PCR结果显示该同源基因在小鼠成体各组织中广泛分布。这提示cegl基因可能与头部生长发育有密切关系,并且对维持成体各组织的正常功能起到重要的作用。对cegl基因在胚胎发育的时间和空间表达模式的研究将有助于进一步深入地揭示它在人脑的正常生长发育中的作用。 展开更多
关键词 正常 egf 表达 小鼠 新基因 头部 人类 l基因 成体 生长发育
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类表皮生长因子域7促进颅脑损伤模型大鼠脑微循环的修复与重建 被引量:3
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作者 徐鹏翔 李强 +4 位作者 许琼冠 罗孟亚男 成凯 谢镇明 付宙锋 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第35期5619-5625,共7页
背景:研究表明血管内皮细胞受损与创伤性脑损伤的血脑屏障功能障碍密切相关,类表皮生长因子域7(EGF-likedomain7,EGFL7)是促进血管生成的重要因子,尚不可知EGFL7能否通过激活脑血管新生从而促进大脑创伤修复。目的:探讨EGFL7促进脑损伤... 背景:研究表明血管内皮细胞受损与创伤性脑损伤的血脑屏障功能障碍密切相关,类表皮生长因子域7(EGF-likedomain7,EGFL7)是促进血管生成的重要因子,尚不可知EGFL7能否通过激活脑血管新生从而促进大脑创伤修复。目的:探讨EGFL7促进脑损伤后大鼠损伤脑组织中血管新生的具体机制。方法:健康成年雄性SD大鼠42只,随机分为2组,颅脑损伤组(n=36)运用改良Feeney法撞击大鼠脑硬膜建立颅脑损伤模型,假手术组(n=6)仅暴露完整脑硬膜;依照损伤后取标本时间分为颅脑损伤1,6,24h以及3,7,14d共6个亚组,每亚组各6只。经过神经功能损伤评分可用后,取挫伤灶及周围脑组织进行后续实验。另取18只SD大鼠随机分为3组,建立颅脑损伤模型,颅脑损伤1h后运用立体定向注射仪分别向大鼠脑室内注射腺病毒rAd-vector、rAd-EGFL7及rAd-EGFL7+PI3K/Akt通路抑制剂LY294002,每组6只。干预12h后取材检测。结果与结论:①RT-PCR、Westernblot及免疫组织化学染色检测显示:颅脑损伤大鼠脑组织中EGFL7、CD34表达显著上调,且随损伤后时间的增加而上调,EGFL7在颅脑损伤3d达到最大(P<0.05),EGFL7与CD34两者的表达趋势相一致,微血管生成数目在颅脑损伤7d到达最高;②大鼠颅脑损伤后1h颅内rAd-EGFL7微量注射12h后,损伤脑组织中EGFL7、CD34表达显著上调(P<0.05),同时pAkt、cyclinD1显著增加,FOXO1显著下降(P<0.05);③大鼠颅脑损伤后颅内同时注射rAd-EGFL7和PI3K/Akt信号通路抑制剂12h后,EGFL7表达变化不明显,但CD34表达显著受抑制(P<0.05),同时微血管生成数目显著减少(P<0.05);④结果证实,EGFL7在脑损伤组织中表达上调,其高表达可能与损伤脑组织中血管生成相关。EGFL7过表达激活PI3K/Akt信号通路从而促进损伤脑组织中的血管新生。 展开更多
关键词 类表皮生长因子域7 CD34 颅脑损伤 PI3K/Akt信号 血管新生 改良Feeney法 脑损伤修复 神经功能障碍
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血清HB-EGF、HIF-1α水平与狼疮性肾炎患儿预后的相关性 被引量:1
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作者 刘艳 孙彩霞 《医学临床研究》 CAS 2022年第6期925-928,共4页
【目的】探讨狼疮性肾炎患儿血清肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平与患儿预后的相关性。【方法】选取2016年7月至2018年7月榆林市第一医院收治的70例狼疮性肾炎患儿(观察组),对其进行随访观察,随访时间18... 【目的】探讨狼疮性肾炎患儿血清肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平与患儿预后的相关性。【方法】选取2016年7月至2018年7月榆林市第一医院收治的70例狼疮性肾炎患儿(观察组),对其进行随访观察,随访时间18~36个月。根据随访终止时患儿是否发生复合肾脏终点事件将其分为预后良好组(n=55)和预后不良组(n=15)。选择同期于本院体检的50例健康儿童为对照组,测定入院时不同组别受试者血清HB-EGF、HIF-1α水平,应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)及曲线下面积(AUC)评估二者表达水平对狼疮性肾炎患儿预后的预测价值,并对影响患儿预后的相关因素进行Logistic回归分析。【结果】观察组患儿血清HB-EGF、HIF-1α水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组患儿血肌酐、血尿素氮及血清HB-EGF、HIF-1α水平均高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清HB-EGF、HIF-1α表达水平的曲线下面积(AUC)分别为0.869、0.822,截断值分别为39.692pg/mL、97.448ng/L,敏感度分别为86.70%、66.70%,特异度分别为76.40%、92.70%;二者联合的AUC为0.937,敏感度和特异性为80.00%、96.40%。Logistic分析结果显示:高血清HB-EGF、HIF-1α水平均是影响狼疮性肾炎患儿预后的独立危险因素。【结论】狼疮性肾炎患儿血清HB-EGF、HIF-1α水平明显升高,且其表达水平对患儿预后具有一定的预测价值,二者水平升高是影响狼疮性肾炎患儿预后的危险因素。 展开更多
关键词 狼疮肾炎 缺氧诱导因子1 α亚基/血液 肝素结合egf样生长因子/血液 预后
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EDIL3在肿瘤中的研究进展 被引量:2
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作者 柯彬 李斌 梁寒 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2019年第11期678-681,共4页
表皮生长因子样重复盘状结构Ⅰ样域蛋白3(EDIL3)是一种内皮细胞合成分泌的细胞外基质蛋白,在胚胎发育、血管生成和抑制炎症反应等方面起关键作用。近年来研究发现EDIL3在胰腺癌、肝癌、结直肠癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤中异常表达,并... 表皮生长因子样重复盘状结构Ⅰ样域蛋白3(EDIL3)是一种内皮细胞合成分泌的细胞外基质蛋白,在胚胎发育、血管生成和抑制炎症反应等方面起关键作用。近年来研究发现EDIL3在胰腺癌、肝癌、结直肠癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤中异常表达,并通过影响肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭转移和血管生成等,广泛参与肿瘤的发生、进展和转移过程,EDIL3的异常表达有望为肿瘤的诊断和治疗提供新的方法。 展开更多
关键词 肿瘤 血管生成 细胞凋亡 表皮生长因子样重复盘状结构Ⅰ样域蛋白3
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