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题名三种禽病毒抗原的串联表达、纯化及活性鉴定
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作者
张素玲
王孟月
王彦伟
吴芃
逄文强
田克恭
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机构
国家兽用药品工程技术研究中心
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出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期2066-2075,共10页
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基金
郑洛新国家自主创新示范区首批创新引领型产业集群专项(No.181200211700)
洛阳市河洛英才计划资助。
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文摘
为实现多个基因在同一菌株中均一可溶性表达,简化基因工程亚单位多联多价疫苗中抗原生产的工艺步骤,本研究选用Ⅰ群4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2蛋白、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2蛋白和减蛋综合征病毒(EDSV)Fiber蛋白3种来自不同禽病毒的抗原为研究对象,利用原核表达系统,通过密码子优化、载体启动子改造和基因串联顺序优化,获得单一载体/多重转录单元的共表达重组质粒。将共表达重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,进行3个基因的共表达。纯化后的蛋白进行Western blotting和蛋白活性检测。结果表明,目的基因经过密码子优化、载体启动子改造和基因串联顺序的优化后,获得均一可溶性共表达的3种蛋白,纯化后蛋白纯度大于80%,Western blotting分析和琼脂扩散试验表明串联表达的3种蛋白具有免疫反应性和抗原活性。文中通过目的基因密码子优化、表达载体启动子改造和基因串联等关键技术的突破,首次实现了3种不同禽病毒抗原的高效、均一、可溶性串联表达和纯化,为基因工程亚单位多联多价疫苗的研制奠定了基础。
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关键词
密码子优化
启动子改造
串联表达
Ⅰ群4型禽腺病毒fiber-2蛋白
鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白
减蛋综合征病毒fiber蛋白
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Keywords
codon optimization
promoter optimization
co-expression
FAdV-4 fiber-2 protein
IBDV VP2 protein
edsv fiber protein
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分类号
S859.797
[农业科学—临床兽医学]
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