金莲花中荭草苷对人食管癌EC-109肿瘤细胞生长及凋亡的影响 被引量：7

1

作者 朱登祥 安芳 王书华 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期2055-2059,共5页

目的观察金莲花中荭草苷对EC-109细胞体外生长增殖抑制以及诱导EC-109细胞凋亡的作用。方法用不同浓度荭草苷作用于对数生长期的EC-109细胞,通过CCK-8法检验其对EC-109细胞体外生长、增殖的抑制作用,通过凋亡试剂盒Hoechest33258荧光染... 目的观察金莲花中荭草苷对EC-109细胞体外生长增殖抑制以及诱导EC-109细胞凋亡的作用。方法用不同浓度荭草苷作用于对数生长期的EC-109细胞,通过CCK-8法检验其对EC-109细胞体外生长、增殖的抑制作用,通过凋亡试剂盒Hoechest33258荧光染色细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳检测DNA Ladder、AnnexinⅤ-FITC/PI双标法流式细胞术,观察荭草苷诱导EC-109细胞凋亡情况。结果荭草苷对EC-109细胞体外生长、增殖具有明显的抑制作用,能够诱导EC-109细胞凋亡,作用随着药物浓度的增高而增加、随着作用时间的延长而显著增高。结论金莲花中荭草苷可剂量依赖性抑制EC-109细胞生长增殖并可诱导肿瘤细胞凋亡。 展开更多

关键词 荭草苷 ec-109细胞 凋亡

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大蒜素诱导人食管癌EC-109细胞凋亡 被引量：4

2

作者 季洪涛 邵淑丽 +4 位作者 张文波 赵彬 张伟伟 何孟奇 李铁 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期1432-1437,共6页

为寻找毒副作用小并且治疗效果好的抗癌药物,研究大蒜素对人食管癌EC-109细胞凋亡的影响,同时探讨了大蒜素引发细胞凋亡的可能机制。通过激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化情况,流式细胞术检测细胞凋亡率... 为寻找毒副作用小并且治疗效果好的抗癌药物,研究大蒜素对人食管癌EC-109细胞凋亡的影响,同时探讨了大蒜素引发细胞凋亡的可能机制。通过激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,qRT-PCR和Western blotting检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,大蒜素作用人食管癌EC-109细胞48 h后,线粒体膜电位显著降低,并且早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞所占百分比均显著增加。同时,与对照组相比,Bax mRNA和蛋白水平均显著升高(p<0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白水平均显著降低(p<0.05)。据此,本研究得出大蒜素可诱导人食管癌EC-109细胞凋亡,并呈剂量依赖性,有潜在的药用价值。 展开更多

关键词 ec-109细胞 大蒜素 细胞凋亡 BAX BCL-2

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RNA干扰技术抑制EC-109细胞survivin基因表达及其促凋亡研究 被引量：1

3

作者 程碧珍 李瑶琛 +1 位作者 林树勇 李康生 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第1期75-78,共4页

目的:应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对survivin基因的siRNA,抑制survivin基因的表达并诱导食管癌细胞系EC-109细胞的凋亡.方法:构建针对survivin的siRNA表达质粒,转染至EC-109细胞,荧光显微镜判断转染效率,蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测s... 目的:应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对survivin基因的siRNA,抑制survivin基因的表达并诱导食管癌细胞系EC-109细胞的凋亡.方法:构建针对survivin的siRNA表达质粒,转染至EC-109细胞,荧光显微镜判断转染效率,蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及基因转录水平的变化,并在不同时间点收集转染细胞,利用流式细胞术及基因组DNA凋亡检测试剂盒,观察siRNA抑制survivin基因表达后诱导细胞凋亡的情况.结果:荧光显微镜结果表明,重组质粒转染效率达46.70%.半定量RT-PCR检测到pSIREN/S质粒在EC-109细胞内对survivin基因的转录抑制率为74.04%;蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pSIREN/S的EC-109细胞survivin蛋白表达量仅为正常组的41.64%,而对照质粒pSIREN/CN对survivin基因的蛋白表达及转录均没有抑制作用.经pSIREN/S转染的EC-109细胞基因组DNA出现明显的DNAladder,流式细胞仪分析结果也显示凋亡细胞为60.78%.结论:survivin特异性siRNA可明显抑制survivin基因的转录和表达,并能有效地诱导EC-109细胞的凋亡,为下一步在体内利用pSIREN/S重组质粒沉寂survivin基因,促肿瘤细胞的凋亡提供实验基础. 展开更多

关键词 RNA干扰技术 食管肿瘤 SURVIVIN基因 ec-109细胞

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牡荆苷对人食管癌EC-109细胞生长及凋亡的影响 被引量：16

4

作者 朱登祥 安芳 王书华 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1781-1784,共4页

目的观察金莲花中提取的牡荆苷体外对人食管癌EC-109细胞生长及诱导EC-109细胞凋亡的作用,探讨p53及bcl-2蛋白表达在牡荆苷抗肿瘤细胞机制中的作用。方法用不同浓度牡荆苷作用于对数生长期的EC-109细胞,通过CCK-8法检测其对EC-109细胞... 目的观察金莲花中提取的牡荆苷体外对人食管癌EC-109细胞生长及诱导EC-109细胞凋亡的作用,探讨p53及bcl-2蛋白表达在牡荆苷抗肿瘤细胞机制中的作用。方法用不同浓度牡荆苷作用于对数生长期的EC-109细胞,通过CCK-8法检测其对EC-109细胞体外生长、增殖的抑制作用;Hoechst33258荧光染色观察细胞形态的变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带;AnnexinV-FITC/PI双标法流式细胞术观察牡荆苷对EC-109细胞凋亡的诱导作用;流式细胞术检测EC-109细胞中抑癌基因p53和促癌基因bcl-2蛋白的表达。结果牡荆苷对EC-109细胞生长、增殖具有明显的抑制作用,能够诱导EC-109细胞凋亡,且作用与牡荆苷浓度、作用时间呈正相关,可上调p53蛋白表达,下调bcl-2蛋白表达。结论牡荆苷可能通过上调p53蛋白和下调bcl-2蛋白的表达,促进EC-109细胞凋亡,抑制EC-109细胞生长。 展开更多

关键词 金莲花 牡荆苷 人食管癌ec-109细胞 细胞凋亡 P53 BCL-2

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姜黄素对食管癌EC-109细胞增殖抑制的研究 被引量：11

5

作者 胡辉 荆绪斌 +1 位作者 蔡先彬 王钦加 《实用癌症杂志》 2011年第3期230-233,共4页

目的检测姜黄素对食管癌EC-109细胞的增殖抑制作用,并从细胞周期角度探讨其分子机制。方法以体外培养的食管癌EC-109细胞株作为研究对象,分为实验组和对照组,实验组给予不同浓度姜黄素,对照组给予等剂量生理盐水。20、40、80μmol/L姜... 目的检测姜黄素对食管癌EC-109细胞的增殖抑制作用,并从细胞周期角度探讨其分子机制。方法以体外培养的食管癌EC-109细胞株作为研究对象,分为实验组和对照组,实验组给予不同浓度姜黄素,对照组给予等剂量生理盐水。20、40、80μmol/L姜黄素分别作用于食管癌Ec-109细胞,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞仪检测细胞周期各时相分布情况及计算细胞增殖指数,Western-blot检测细胞周期蛋白D1、E(cyclin D1、cyclin E)表达情况。结果 20、40、80μmol/L姜黄素分别作用食管癌EC-109细胞12、24、48 h后,与对照组比较,细胞增殖抑制率随着药物作用时间延长及剂量加大而增高,有统计学意义(F=71.40,P<0.00)。相同时间点不同浓度组间比较及相同浓度不同时间组间比较均有统计学意义(P<0.01),说明姜黄素呈现时间-剂量依赖性抑制细胞增殖。上述浓度姜黄素干预24 h后,G0/G1期细胞比例逐步增大,有统计学意义(P=6.27,P<0.05),不同浓度组间比较均有统计学意义(P<0.05),说明姜黄素阻滞EC-109细胞于G0/G1期呈剂量依赖关系。同样条件下,Western-blot检测到cyclin D1、cyclin E蛋白条带逐渐变窄,说明姜黄素能抑制周期蛋白表达。结论姜黄素通过下调食管癌EC-109细胞表达cyclin D1、cyclin E,使细胞阻滞于G/G期,起到抑制细胞增殖的作用。 展开更多

关键词 姜黄素 细胞周期蛋白 细胞增殖 食管癌ec-109细胞

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活性氧在顺铂诱导食管癌细胞EC-109凋亡中的作用 被引量：10

6

作者 蔡先彬 荆绪斌 +2 位作者 胡辉 陈素钻 李映华 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第4期427-431,共5页

背景与目的:活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)是体内氧化代谢产物,是重要的信号分子,在细胞凋亡过程中担当着重要角色。本研究旨在探讨活性氧在顺铂(cisplatin,DDP)诱导食管癌细胞EC-109凋亡过程中的作用及其可能机制。方法:不同浓度D... 背景与目的:活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)是体内氧化代谢产物,是重要的信号分子,在细胞凋亡过程中担当着重要角色。本研究旨在探讨活性氧在顺铂(cisplatin,DDP)诱导食管癌细胞EC-109凋亡过程中的作用及其可能机制。方法:不同浓度DDP(0、1、5、10、15μg/ml)处理EC-109细胞,应用MTT法检测DDP对EC-109细胞增殖的影响;流式细胞仪检测活性氧、线粒体膜电位(Δψm)和细胞亚二倍体凋亡峰变化情况;并观察加入抗氧化剂-过氧化氢酶(CAT)后细胞凋亡的变化。结果:DDP可明显抑制EC-109细胞增殖;0、1、5、10、15μg/ml的DDP作用于EC-109细胞2h后,细胞内活性氧分别为(3.3±1.0)%、(21.6±2.0)%、(32.6±3.2)%、(44.7±2.2)%、(53.1±3.6)%,12h后Δψm分别为(97.2±1.9)%、(90.6±1.9)%、(85.5±1.4)%、(67.8±2.0)%、(62.4±3.0)%,24h后可见细胞凋亡率分别为(3.4±1.2)%、(16.2±2.3)%、(28.1±1.5)%、(33.2±3.9)%、(45.5±3.8)%;CAT能明显抑制DDP诱导的EC-109细胞凋亡。结论:DDP能够通过刺激EC-109细胞内活性氧的产生、损伤线粒体,使其膜电位下降,引起EC-109细胞凋亡。 展开更多

关键词 活性氧 线粒体膜电位 凋亡 食管肿瘤 ec-109细胞株 顺铂

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人Kiss-1真核表达荧光载体的构建

7

作者 刘涛 宋慧 +1 位作者 文卉 李胜保 《临床消化病杂志》 2017年第1期1-3,共3页

[目的]构建并鉴定人Kiss-1真核表达荧光质粒。[方法]按照Genebank中人Kiss-1序列设计引物,以EC109细胞cDNA为模板,扩增基因片段与载体pIRES2-EGFP连接,得到人Kiss-1真核表达荧光载体并测序鉴定,通过脂质体体外转染至EC-109细胞,根据转... [目的]构建并鉴定人Kiss-1真核表达荧光质粒。[方法]按照Genebank中人Kiss-1序列设计引物,以EC109细胞cDNA为模板,扩增基因片段与载体pIRES2-EGFP连接,得到人Kiss-1真核表达荧光载体并测序鉴定,通过脂质体体外转染至EC-109细胞,根据转染情况分为2组:空载体组(转染pIRES2-EGFP空载体)、转染组(转染pIRES2-EGFP-Kiss-1重组质粒)。裂解细胞分别提取RNA和蛋白样品用于检测Kiss-1表达水平。[结果]构建的pIRES2-EGFP-Kiss-1荧光重组质粒,经PCR、酶切、测序结果完全达到预期设计,转染组细胞中Kiss-1mRNA和蛋白表达水平均显著高于空载体组。[结论]成功重组质粒pIRES2-EGFP-Kiss-1和瞬时表达Kiss-1基因的食管癌细胞,为后续建立Kiss-1高表达阳性细胞克隆奠定了基础,为研究Kiss-1对人食管癌细胞增殖、侵袭和转移能力提供了实验基础。 展开更多

关键词 KISS-1基因 食管肿瘤 荧光表达载体 ec-109细胞系

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大蒜素对人食管癌EC-109细胞形态结构的影响

8

作者 张文波 邵淑丽 +6 位作者 张伟伟 赵彬 隋文静 徐兴军 邱增成 王春明 吕建伟 《高师理科学刊》 2013年第3期67-70,共4页

以人食管癌EC-109细胞为研究对象,探讨大蒜素对人食管癌EC-109细胞生长抑制及对形态结构的影响.采用台盼蓝拒染法测定人食管癌EC-109细胞生长抑制率,通过倒置显微镜、荧光显微镜观察不同质量分数的大蒜素作用于人食管癌EC-109细胞的形... 以人食管癌EC-109细胞为研究对象,探讨大蒜素对人食管癌EC-109细胞生长抑制及对形态结构的影响.采用台盼蓝拒染法测定人食管癌EC-109细胞生长抑制率,通过倒置显微镜、荧光显微镜观察不同质量分数的大蒜素作用于人食管癌EC-109细胞的形态变化.结果表明,大蒜素能抑制人食管癌EC-109细胞增殖,诱导EC-109细胞凋亡,在一定范围呈时间、剂量依赖性,作用48 h的IC50为(28±1.54)μg/mL.经大蒜素诱导后,人食管癌EC-109细胞形态结构出现典型的凋亡特征. 展开更多

关键词 大蒜素 人食管癌ec-109细胞 细胞凋亡

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苦瓜多糖对人食管癌EC-109细胞形态结构的影响

9

作者 徐君懿 邵淑丽 车加祥 《高师理科学刊》 2014年第6期48-50,共3页

以人食管癌EC-109细胞为研究对象,探讨苦瓜多糖组分MCP2对人食管癌EC-109细胞生长的抑制,以及对其形态、结构的影响.采用台盼蓝拒染法测定人食管癌EC-109细胞生长抑制曲线,通过倒置显微镜观察不同质量分数的苦瓜多糖组分MCP2作用于人食... 以人食管癌EC-109细胞为研究对象,探讨苦瓜多糖组分MCP2对人食管癌EC-109细胞生长的抑制,以及对其形态、结构的影响.采用台盼蓝拒染法测定人食管癌EC-109细胞生长抑制曲线,通过倒置显微镜观察不同质量分数的苦瓜多糖组分MCP2作用于人食管癌EC-109细胞导致的形态变化.结果表明,苦瓜多糖组分MCP2能抑制人食管癌EC-109细胞增殖,诱导人食管癌EC-109细胞凋亡,在一定范围内呈时间、剂量依赖性,作用48 h的IC50为(285.45±36.64)μg/m L.经苦瓜多糖组分MCP2诱导后,人食管癌EC-109细胞形态结构出现典型的凋亡特征. 展开更多

关键词 苦瓜多糖组分MCP2 人食管癌ec-109细胞 细胞凋亡

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三氧化二砷诱导人食管癌Ec109细胞凋亡伴随c-myc基因的降调节 被引量：26

10

作者 邓友平 林晨 +3 位作者 张雪艳 陈德权 肖培根 吴旻 《中国医学科学院学报》 CSCD 北大核心 2000年第1期67-70,共4页

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3)对食管癌 Ec10 9细胞系的生物学效应及细胞和分子机制。方法　通过四氮唑 (MTT)还原法检测三氧化二砷 (As2 O3)对食管癌 Ec10 9细胞系存活率的影响 ,从形态观察、流式细胞仪分析、DNA凝胶电泳、细胞凋亡... 目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3)对食管癌 Ec10 9细胞系的生物学效应及细胞和分子机制。方法　通过四氮唑 (MTT)还原法检测三氧化二砷 (As2 O3)对食管癌 Ec10 9细胞系存活率的影响 ,从形态观察、流式细胞仪分析、DNA凝胶电泳、细胞凋亡原位检测 (TU NEL)研究三氧化二砷诱导食管癌 Ec10 9细胞凋亡的情况 ,并以 Western blot检测基因表达。结果　 Ec10 9细胞经 As2 O3处理后 ,存活率明显降低。光学显微镜下可见到明显的凋亡细胞 ,在细胞周期 G1期前有低于 2倍体的凋亡峰 ;DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征 :DNA有规律断裂形成的梯状图谱 ,细胞凋亡原位检测发现 DNA断裂 ,Western blot检测表明 c- myc基因的表达下降。结论　 As2 O3能诱导人食管癌Ec10 9细胞凋亡 ,并伴随 c- m yc基因的降调节。 展开更多

关键词 三氧化二砷 食管癌 ec109细胞 细胞凋亡

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硒-甲基硒代半胱氨酸对人食管癌EC109细胞Ki-67及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响 被引量：7

11

作者 裴小娟 苏敏 田东萍 《汕头大学医学院学报》 2004年第2期65-67,F002,共4页

目的 :探讨硒 甲基硒代半胱氨酸 (MSC)对人食管癌细胞系EC10 9细胞增殖及Bcl 2 Bax蛋白表达的影响。方法 :用荧光染色、免疫组化及免疫蛋白印迹等技术 ,在MSC的不同浓度 (0、 1、 2、 4、 8、 16 μg mL)与时间 (6、 12、 2 4、 4 8h)... 目的 :探讨硒 甲基硒代半胱氨酸 (MSC)对人食管癌细胞系EC10 9细胞增殖及Bcl 2 Bax蛋白表达的影响。方法 :用荧光染色、免疫组化及免疫蛋白印迹等技术 ,在MSC的不同浓度 (0、 1、 2、 4、 8、 16 μg mL)与时间 (6、 12、 2 4、 4 8h)的作用下 ,观察其对EC10 9细胞形态的影响以及细胞核增殖抗原Ki 6 7及凋亡相关蛋白Bcl 2 Bax的表达。结果 :细胞主要表现出固缩 ,生长密度降低 ,凋亡小体形成并被吞噬等形态改变 ,未见明显细胞毒性作用。各实验组的Ki 6 7标记指数均明显低于对照组 (P <0 0 1) ,Bcl 2 Bax表达比值降低 ,并呈明显的时间和浓度依赖性。结论 :MSC有抑制EC10 9细胞系增殖及下调Bcl 2 展开更多

关键词 硒-甲基硒代半胱氨酸 食管癌 ec109细胞 KI-67 BCL-2 BAX

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通幽汤及其拆方对食管鳞癌细胞的抑制作用及其机理研究 被引量：8

12

作者 刘忠昌 贾永森 包巨太 《江苏中医药》 CAS 2011年第7期86-88,共3页

目的:从细胞凋亡信号通路角度揭示通幽汤对食管鳞癌细胞抑制作用的机理,确定从功效分类的有效药物群。方法:体外培养食管鳞癌EC109细胞,通幽汤全方及活血行气、滋阴养血拆方分别作用于细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测定细胞存... 目的:从细胞凋亡信号通路角度揭示通幽汤对食管鳞癌细胞抑制作用的机理,确定从功效分类的有效药物群。方法:体外培养食管鳞癌EC109细胞,通幽汤全方及活血行气、滋阴养血拆方分别作用于细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测定细胞存活率,免疫印迹法观察Caspase-3凋亡信号通路蛋白表达变化情况。结果:全方组IC50=798μg/mL,活血行气拆方组IC50=1413μg/mL,滋阴养血拆方组IC50=1709μg/mL,3组方均可促进p53、cyto-C、Caspase-3、Bax凋亡蛋白表达,作用强弱依次为全方>活血行气拆方>滋阴养血拆方。结论:通幽汤抑制食管鳞癌细胞增殖与促Caspase-3凋亡信号通路有关,其药效在于活血行气、滋阴养血类药物的协同作用。 展开更多

关键词 食管癌 ec109细胞 通幽汤 病理学 CASPASE-3 细胞凋亡

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肿瘤转移抑制基因-1在食管鳞癌组织及食管癌EC109细胞中的表达及意义 被引量：6

13

作者 刘博 吕洋 +3 位作者 林媛媛 刘军超 李秀娟 乔海霞 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期536-539,548,共5页

目的探讨肿瘤转移抑制基因-1(TMSG-1)在食管鳞癌(ESCC)组织及食管癌EC109细胞中的表达及意义。方法采用SP免疫组织化学染色法检测136例ESCC及37例正常食管黏膜组织中TMSG-1蛋白的表达情况,分析TMSG-1与ESCC患者临床病理指标的关系;培养... 目的探讨肿瘤转移抑制基因-1(TMSG-1)在食管鳞癌(ESCC)组织及食管癌EC109细胞中的表达及意义。方法采用SP免疫组织化学染色法检测136例ESCC及37例正常食管黏膜组织中TMSG-1蛋白的表达情况,分析TMSG-1与ESCC患者临床病理指标的关系;培养人食管癌EC109细胞并用常用化疗药物顺铂(CDDP)干预,同时设对照组,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,半定量RT-PCR法检测细胞TMSG-1的表达情况。结果 TMSG-1在ESCC和正常食管黏膜的阳性率分别为52.2%(71/136)、94.6%(35/37),差异具有统计学意义(P<0.05)。TMSG-1的异常表达与ESCC组织学分级、患者的TNM分期、淋巴结转移情况相关。顺铂干预组EC109细胞的增殖抑制率较对照组显著增高,差异具有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR结果显示,干预组EC109细胞TMSG-1的mRNA表达明显高于对照组(P<0.01)。结论 TMSG-1的异常表达与ESCC的发展及转移相关,可作为较为理想的肿瘤标志物辅助诊断并指导临床治疗。 展开更多

关键词 食管鳞状细胞癌 肿瘤转移抑制基因-1(TMSG-1) ec109细胞 免疫组织化学 RT-PCR 细胞增殖 顺铂(CDDP)

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食管癌EC109细胞属人类乳头状瘤病毒18型阳性细胞株 被引量：7

14

作者 齐宗利 霍霞 +5 位作者 张宝 杨海伟 丘波 彭琳 沈忠英 徐锡金 《汕头大学医学院学报》 2006年第3期136-138,153,共4页

目的:探究食管癌细胞系EC109是否为人类乳头状瘤病毒(HPV)感染。方法:以HeLa细胞为阳性对照,以细胞DNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增HPV基因保守序列GP5/GP6基因片段;PCR扩增HPV18 E6和HPV18 E6/E7基因片段;对HPV18 E6/E7 PCR扩增产物... 目的:探究食管癌细胞系EC109是否为人类乳头状瘤病毒(HPV)感染。方法:以HeLa细胞为阳性对照,以细胞DNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增HPV基因保守序列GP5/GP6基因片段;PCR扩增HPV18 E6和HPV18 E6/E7基因片段;对HPV18 E6/E7 PCR扩增产物片段进行测序;采用逆转录(RT)-PCR扩增HPV18 E6和E7基因片段;利用HPV基因分型芯片对EC109和HeLa细胞进行HPV分型。结果:PCR、RT-PCR和测序结果证明EC109细胞为HPV18阳性细胞;HPV分型芯片结果显示EC109也为HPV18阳性细胞。结论:EC109细胞是属于HPV18亚型感染型细胞。 展开更多

关键词 食管癌 ec109细胞株 人类乳头状瘤病毒 聚合酶链反应

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靶向GRP78的miRNA表达载体对人食管癌EC109细胞增殖的抑制作用 被引量：5

15

作者 李洪标 郭益添 +3 位作者 黄官友 冯家琳 蒲泽锦 吴灵飞 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期75-81,共7页

目的:探讨靶向葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)基因的miRNA真核表达质粒,对人食管癌EC109细胞增殖的影响。方法:设计合成4对针对GRP78的特异性miRNA干扰序列和1对阴性对照序列,定向克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-mi... 目的:探讨靶向葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)基因的miRNA真核表达质粒,对人食管癌EC109细胞增殖的影响。方法:设计合成4对针对GRP78的特异性miRNA干扰序列和1对阴性对照序列,定向克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体上,构建靶向GRP78的miRNA重组质粒:pcDNATM6.2-miR78-1、pcDNATM6.2-miR78-2、pcDNATM6.2-miR78-3、pcDNATM6.2-miR78-4,并通过脂质体法转染至HEK293细胞;杀稻瘟菌素筛选2周形成稳定转染细胞系;荧光显微镜检测转染效率。将筛选出的最佳干扰质粒转染至EC109细胞,采用RT-PCR法检测GRP78 mRNA的表达,CCK8法检测其对EC109细胞增殖的影响。结果:测序结果表明成功构建4种靶向GRP78的miRNA重组质粒,经转染和筛选,所有转染后HEK293细胞均有GFP的表达;与未转染组及阴性对照组(pcDNATM6.2-Ctrl)相比,4种干扰质粒组HEK293细胞中GRP78 mRNA的表达均下降(P<0.05);干扰效率以转染pcDNATM6.2-miR78-1为最高。pcDNATM6.2-miR78-1转染EC109细胞,与未转染组、pcDNATM6.2-Ctrl组相比,EC109细胞中GRP78 mRNA的表达明显下降[(0.38±0.02)vs(1.03±0.04)、(1.00±0.03),均P<0.05]。CCK8法检测结果显示,转染pcDNATM6.2-miR78-1干扰质粒12、24、48、72 h后,EC109细胞的增殖被显著抑制[(0.028±0.001)vs(0.086±0.010),(0.035±0.003)vs(0.155±0.011),(0.112±0.009)vs(0.389±0.008)、(0.169±0.013)vs(0.433±0.009);均P<0.05]。结论:4对靶向GRP78的miRNA表达载体构建成功,其中pcDNATM6.2-miR78-1干扰质粒沉默效果最佳,能有效抑制EC109细胞的增殖。 展开更多

关键词 食管癌 ec109细胞 葡萄糖调节蛋白78(GRP78) miRNA RNA干扰 HEK293细胞

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毛兰素通过TNF-α信号通路抑制食管癌细胞增殖

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作者 张新杰 冯靖雄 +3 位作者 赵淑芹 向君 柏云飞 金李 《现代免疫学》 CAS 2024年第3期234-242,共9页

为探究毛兰素介导TNF-α信号通路对食管癌细胞增殖的影响,应用网络药理学分析毛兰素抗食管癌作用靶点,以不同浓度毛兰素(0、15、30、45和60 nmol/L)处理食管癌EC109、KYSE510细胞,采用CCK-8试验、克隆形成试验检测细胞增殖能力;构建食... 为探究毛兰素介导TNF-α信号通路对食管癌细胞增殖的影响,应用网络药理学分析毛兰素抗食管癌作用靶点,以不同浓度毛兰素(0、15、30、45和60 nmol/L)处理食管癌EC109、KYSE510细胞,采用CCK-8试验、克隆形成试验检测细胞增殖能力;构建食管癌裸鼠模型,检测瘤体组织Ki67蛋白表达;采用Western blotting检测TNF-α及其下游通路相关蛋白表达;应用生物信息学方法分析TNF-α在食管癌中的表达情况及其对细胞增殖的影响。结果显示,TNF-α是毛兰素抗食管癌作用靶点中的Top1基因;与0 nmol/L毛兰素比较,经15、30、45和60 nmol/L毛兰素处理后,EC109、KYSE510细胞增殖率,克隆形成率,磷酸化(phosphorylated,p)-NF-κB p65、p-MAPK、p-JNK及TNF-α蛋白表达水平显著下降(P<0.05);与对照组比较,毛兰素组小鼠瘤体体积、质量及瘤体组织中Ki67蛋白表达显著下降(P<0.05);TNF-α在食管癌高表达,与细胞增殖和周期相关的基因集均明显富集在TNF-α高表达组,与细胞凋亡相关的基因集均明显富集在TNF-α低表达组;加入TNF-α后,EC109、KYSE510细胞的活力、增殖能力显著上升(P<0.05),毛兰素抑制NF-κB信号通路激活的现象明显被逆转。该研究提示,毛兰素可抑制食管癌细胞增殖,抑制移植瘤生长,其机制可能与抑制TNF-α及其下游信号通路有关。 展开更多

关键词 食管癌 ec109细胞 KYSE510细胞 毛兰素 肿瘤坏死因子α信号通路 增殖

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自杀基因联合放射对食管癌细胞株的实验研究 被引量：3

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作者 潘建基 王捷忠 +1 位作者 郑天荣 郑秋红 《中华放射肿瘤学杂志》 CSCD 北大核心 2005年第5期443-446,共4页

目的自杀基因具有能将无细胞毒性的前体药物转化为有细胞毒性作用的药物而使细胞死亡,通过观察大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶/氟胞嘧啶(CD/5-FC)自杀基因系统对食管癌EC109细胞杀伤效应及与放射联合应用对食管癌肿瘤细胞协同杀伤效应。方法采用... 目的自杀基因具有能将无细胞毒性的前体药物转化为有细胞毒性作用的药物而使细胞死亡,通过观察大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶/氟胞嘧啶(CD/5-FC)自杀基因系统对食管癌EC109细胞杀伤效应及与放射联合应用对食管癌肿瘤细胞协同杀伤效应。方法采用PCR方法从大肠杆菌基因组DNA中扩增出CD基因;构建重组真核载体pcDNA3.1-CD;用脂质体转染法转染EC109细胞;观察CD/5-FC体系对EC109细胞的杀伤效应和旁观者效应及对放射的增敏效应。结果RT-PCR分析结果表明CD基因已转入EC109细胞并表达。离体实验证实5-FC对转CD基因后的食管癌细胞株有明显的细胞毒作用,含5%的转基因食管癌细胞加入5-FC后的细胞存活比率为41.8%±14.2%,低于对照组的94.6%±4.3%结果(t=3.14,P<0.05);加入10%的转基因细胞的存活比率为37.8%±4.4%,低于对照组的95.6%±5.4%结果(t=9.75,P<0.01)。CD/5-FC体系对肿瘤细胞放射增敏效果明显,加前药5-FC及放射组细胞存活曲线低于单纯加前药5-FC对照组或单纯放射对照组,重复测量数据方差分析结果显示F=11.50,P<0.01;治疗组分别与5-FC对照组及单纯放射对照组相比F值分别为4.11、10.53,P值分别<0.05、0.01。结论CD/5-FC体系的旁观者效应和放射增敏效果明显。 展开更多

关键词 大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶/氟胞嘧啶 基因疗法 照射 食管癌细胞株 自杀基因系统 放射增敏 CD/5-FC ec109细胞 联合 实验研

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Notch1通路活化抑制EC109细胞的增殖及机制探讨 被引量：4

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作者 张永利 张可杰 +2 位作者 闵祥辉 鹿全意 刘文励 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期597-601,共5页

背景与目的:Notch1的活化可以通过下调人类乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)早期蛋白E6和E7基因的表达抑制HPV阳性HeLa细胞系的增殖。人食管鳞状细胞癌细胞系EC109细胞为HPV18阳性细胞。本研究将Notch1胞内段(intracellular doma... 背景与目的:Notch1的活化可以通过下调人类乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)早期蛋白E6和E7基因的表达抑制HPV阳性HeLa细胞系的增殖。人食管鳞状细胞癌细胞系EC109细胞为HPV18阳性细胞。本研究将Notch1胞内段(intracellular domain of Notch,ICN)转入EC109细胞,导致EC109细胞中Notch通路的组成性活化,从而探讨Notch通路活化与EC109细胞增殖的关系及机制。方法:用脂质体转染法将ICN转入体外培养的EC109细胞,用MTT法检测细胞增殖率;用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-PCR检测HPV18E6/E7基因的表达;用Western印迹法检测周期蛋白激酶抑制因子p53的表达。结果:ICN转染入EC109细胞后,EC109细胞增殖受抑;细胞周期阻滞在G2/M期,转目的基因组G2/M期细胞所占比例[(42.57±1.57)%]与未转染组[(1.88±0.66)%]及转空质粒组[(1.99±1.02)%]相比差异均有显著性(P<0.01)。E6/E7基因表达降低;p53表达升高,转ICN组(2.15±0.23)与未转染组(0.45±0.07)及转空质粒组(0.46±0.02)相比差异均有显著性(P<0.01)。结论:Notch1通路活化可以抑制HPV18E6/E7基因的表达,导致p53通路的活化,使HPV18阳性EC109细胞增殖周期阻滞于G2/M期,抑制EC109细胞的生长。 展开更多

关键词 NOTCH信号 ESCC ec109细胞 增殖抑制 HPV18 E6/E7 p53

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PI3K/Akt信号通路抑制剂对食管癌细胞EC109中FR和hnRNP-E1表达的影响 被引量：4

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作者 左丽萍 陈素钻 +3 位作者 俞晶 梁晓松 刘朝晖 郭光华 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第19期2871-2873,共3页

目的研究PI3K/Akt信号通路靶向抑制剂LY294002对人食管癌细胞EC109中叶酸受体(FR)和核内不均一核糖核蛋白E1(hnRNP-E1)表达的影响。方法不同浓度LY294002作用于人食管癌细胞株EC109不同时间段后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制... 目的研究PI3K/Akt信号通路靶向抑制剂LY294002对人食管癌细胞EC109中叶酸受体(FR)和核内不均一核糖核蛋白E1(hnRNP-E1)表达的影响。方法不同浓度LY294002作用于人食管癌细胞株EC109不同时间段后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,免疫印迹法(Westorn blot)检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(P-Akt)、FR和hnRNP-E1的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关趋势,P-Akt和FR蛋白表达明显下降,hnRNP-E1蛋白表达无显著变化。结论阻断PI3K/Akt信号通路可以改变人食管癌细胞EC109中FR的表达,并明显抑制细胞增殖,其机制可能与抑制Akt磷酸化有关。 展开更多

关键词 PI3K/Akt信号通路 LY294002 ec109细胞 叶酸受体

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水飞蓟宾通过抑制Notch1信号通路发挥抗食管癌EC109细胞的作用 被引量：4

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作者 叶福林 冯英备 +3 位作者 张玉景 尹苏芹 周峰 冯英同 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第24期4620-4623,4609,共5页

目的:探讨水飞蓟宾(silybin,SIL)对人食管癌EC109细胞系的作用,并探求Notch1以及凋亡通路在其中的角色。方法:实验分为对照组和SIL处理组(75、150、300μM),各组细胞分别处理12、24、36小时。Cell Counting Kit-8(CCK-8)测细胞活力;粘... 目的:探讨水飞蓟宾(silybin,SIL)对人食管癌EC109细胞系的作用,并探求Notch1以及凋亡通路在其中的角色。方法:实验分为对照组和SIL处理组(75、150、300μM),各组细胞分别处理12、24、36小时。Cell Counting Kit-8(CCK-8)测细胞活力;粘附实验测细胞粘附能力;Caspase-Glo誖3/7定量试剂盒测细胞Caspase3/7的表达;Western-blot测Notch1、Bcl2和Bax蛋白表达。结果:CCK-8检测结果示SIL可有效抑制EC109细胞的活力(P<0.01),并呈浓度时间依赖性;粘附实验结果示SIL可以降低EC109细胞粘附能力(P<0.01);Caspase3/7检测结果示SIL可以使EC109细胞Caspase3/7活性升高(P<0.01);Western-blot检测结果显示SIL可以使EC109细胞Notch1和Bcl2表达下降,Bax表达上升(P<0.01)。结论:SIL可有效抑制食管癌EC109细胞活力,其作用机制可能与抑制Notch1通路,激活凋亡通路相关,SIL可能是食管癌药物治疗领域具有开发前景的药物。 展开更多

关键词 水飞蓟宾 食管癌 ec109细胞系 凋亡 Notch1信号通路

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