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猪瘟病毒E2基因真核表达质粒的构建及基因疫苗的研究 被引量：50
1
作者 余兴龙 涂长春 +5 位作者 李红卫 陈创夫 李作生 马正海 孙明 殷震 《中国病毒学》 CSCD 2000年第3期264-271,共8页
构建了猪瘟病毒 (classicalswinefevervirus,CSFV)主要保护性抗原E2基因 4种不同的真核表达质粒。小鼠免疫试验表明 ,E2基因上不同的功能区对基因疫苗的免疫应答有很大影响 ,有信号肽序列的E2基因可诱导产生特异性免疫反应 ,且无跨膜区... 构建了猪瘟病毒 (classicalswinefevervirus,CSFV)主要保护性抗原E2基因 4种不同的真核表达质粒。小鼠免疫试验表明 ,E2基因上不同的功能区对基因疫苗的免疫应答有很大影响 ,有信号肽序列的E2基因可诱导产生特异性免疫反应 ,且无跨膜区序列的E2基因所诱导的免疫应答反应比有跨膜区序列的强 ,而无信号肽序列的E2基因则不能诱导产生CSFV特异性的免疫反应。攻毒保护试验表明 ,免疫家兔最少可抵抗 10个最小感染剂量 (MID)的猪瘟兔化弱毒苗 (Hogcholeralap inizedvirus,HCLV)的攻击 ;免疫猪可抵抗致死剂量的CSFV石门株强毒的攻击。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 真核表达质粒 基因疫苗
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猪瘟病毒强弱毒株和野毒株E2全基因序列测定及比较分析 被引量：19
2
作者 王琴 李博 +2 位作者 王在时 丘惠深 郎洪武 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期320-328,共9页
为了比较猪瘟病毒 (HCV)野毒株、疫苗株及标准株之间E2基因抗原区域的差异 ,采用RT PCR扩增了HCV石门株、兔化弱毒疫苗株、野毒 0 3及 0 7株的囊膜糖蛋白E2 (gp55)全基因的cDNA片段 ,分别克隆于pGEM T载体中并对其进行了核苷酸序列测定... 为了比较猪瘟病毒 (HCV)野毒株、疫苗株及标准株之间E2基因抗原区域的差异 ,采用RT PCR扩增了HCV石门株、兔化弱毒疫苗株、野毒 0 3及 0 7株的囊膜糖蛋白E2 (gp55)全基因的cDNA片段 ,分别克隆于pGEM T载体中并对其进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列的推导 ,同时进行了同源性比较及E2结构与功能的分析。所测 4株HCVE2基因的长度均为1 2 73bp,所编码的氨基酸序列均包括部分信号肽序列和完整的跨膜区序列 ,共由 381个氨基酸组成 ;4个毒株E2蛋白N末端的 683位至 690位信号肽序列 (WLLLVTGA)和C末端 1 0 30～1 0 63位跨膜区均为保守序列 ,而且具疏水性 ;N末端抗原功能区中 ,4个E2蛋白与其它所比较序列在位于第 753位至 759位氨基酸处 ,均有一段保守序列RYLASLH ,无一氨基酸发生变异 ,为亲水性 ,在整个E2蛋白抗原谱中抗原性峰值为最高 ,推测对抗原性产生起重要作用 ;4个E2蛋白的氨基酸序列中均含有 1 5个半胱氨酸 (Cys)残基 ,其数量及位置与国外五株HCV(Brescia ,C ,Alfort.ALD和GPE)完全一致。表明该 4株HCVE2抗原具有相同的构型 ,尤其是N末端的 6个Cys残基对E2蛋白结构的正确折叠及特异抗原决定簇的形成至关重要。同时对主要抗原区域氨基酸位点变异进行分析 ,发现疫苗株与野毒株之间抗原决定簇未发生明显变? 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 序列分析 强毒株 弱毒株 野毒株
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12株猪瘟病毒E2基因主要抗原区域的序列差异分析 被引量：23
3
作者 王琴 王在时 +2 位作者 赵耘 李博 丘惠深 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期614-621,共8页
用RT PCR扩增了 1 2个不同时期分离的HCV毒株E2基因主要抗原区域的cDNA片段并对其进行了序列测定。应用DNAstar序列分析软件对所测的 1 2个HCV毒株与国内外已知的 6个毒株Alfort株、Ald株、Brescia株、Gpe株、C株、CW株及早期已测定的H... 用RT PCR扩增了 1 2个不同时期分离的HCV毒株E2基因主要抗原区域的cDNA片段并对其进行了序列测定。应用DNAstar序列分析软件对所测的 1 2个HCV毒株与国内外已知的 6个毒株Alfort株、Ald株、Brescia株、Gpe株、C株、CW株及早期已测定的HCLV株、HCVSM株和北京顺义株 (BJSY2 /96) 3个毒株的相应片段进行了同源性比较分析。E2基因主要区域长度均为 2 2 4bp ,包括从HCV 2 4 85到 2 70 8位的E2基因B、C区域。所测的疫苗株HCLV与国外测得的疫苗株C株核苷酸及氨基酸同源性分别为 99 1 %和 1 0 0 % ,表明目前应用的疫苗株是稳定的 ;用目前我国流行的部分野毒株对HCLV株免疫猪的攻击试验表明 ,HCLV对野毒株均具有很好的免疫力 ,这与序列分析结果相吻合。根据系统树分析 ,可将HCV分为两大群 ,5株 90年代的野毒株及 1株 80年代的野毒株 (其中北京 3株、河南 2株、广东 1株 )均与国内外C株、标准株属同一群 (即第一群 ) ,其核苷酸及氨基酸的同源性分别为85 7%～ 1 0 0 %和 83 8%～ 1 0 0 % ;与Alfort株同属第二群的有 6个野毒株 (广西北海、辽宁、河北黄骅、吉林、深圳光明、四川成都 ) ,其中 80年代与 90年代的野毒株各有三株 ,核苷酸及氨基酸的同源性分别为 84 3%～ 1 0 0 %和 85 1 %～ 1 0 0 % ;2 1株HCV的核苷酸? 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 序列分析
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猪瘟病毒E2(gp55)基因的克隆表达及其DNA疫苗的初步研究 被引量：13
4
作者 周鹏程 陆宇 +2 位作者 陈建国 翟中和 丁明孝 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期243-251,共9页
用RT PCR方法从中国标准强毒株石门毒的细胞培养物中扩增获得了其结构蛋白E2基因cDNA ,将之克隆到 pGEM 5ZT载体 ,用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列 ,并推导出其对应氨基酸序列 ,与几个代表毒株Alfort株、Brescia株和C株相应序列进行比... 用RT PCR方法从中国标准强毒株石门毒的细胞培养物中扩增获得了其结构蛋白E2基因cDNA ,将之克隆到 pGEM 5ZT载体 ,用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列 ,并推导出其对应氨基酸序列 ,与几个代表毒株Alfort株、Brescia株和C株相应序列进行比较 ,所测核苷酸序列与各株的同源性分别为 84 7%、92 6%和 95 2 % ,氨基酸序列的同源性分别为89 4% ,92 6%和 94 6% ;将此E2片段亚克隆至真核表达载体 pcDNA3 1 ,构建表达CSFVE2蛋白的重组质粒 pcE2 ,用脂质体转染法将 pcE2导入cos 7细胞进行瞬时表达 ,用针对E2蛋白的特异性单抗以间接免疫荧光法检测 ,结果E2蛋白在cos 7细胞中获得了正确表达 ,随之将pcE2质粒DNA进行小鼠肌内接种免疫 ,ELISA法检测证实在免疫后 2周和 4周的小鼠体内可诱导出较为明显的阳性血清 ,并高于E2单抗的阳性对照 ,病毒中和试验也表明DNA免疫后小鼠体内可诱导产生CSFV中和抗体 ;同时构建了能在昆虫细胞Sf9中表达GST E2和GST GFP E2融合蛋白的重组杆状病毒 ;上述研究结果为研制针对CSFV的DNA疫苗 ,亚单位疫苗及其诊断试剂打下了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 DNA疫苗 e2基因 基因表达 免疫防制
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23株猪瘟病毒E2基因主要抗原编码区序列差异分析 被引量：17
5
作者 赵耘 王在时 +2 位作者 王琴 李博 丘惠深 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2002年第3期3-7,共5页
用RT PCR及测序获得了 17株猪瘟病毒 (HCV) 2 5 1bp的E2基因主要抗原编码区序列 ,经DNAstar软件对获得的 17株HCV及已发表的 6株HCV毒株序列进行了比较和分析 ,并构建了HCV遗传发生树。结果 ,这 2 3株与石门株的序列相比 ,所有毒株的碱... 用RT PCR及测序获得了 17株猪瘟病毒 (HCV) 2 5 1bp的E2基因主要抗原编码区序列 ,经DNAstar软件对获得的 17株HCV及已发表的 6株HCV毒株序列进行了比较和分析 ,并构建了HCV遗传发生树。结果 ,这 2 3株与石门株的序列相比 ,所有毒株的碱基变化随机地分布于整个序列 ,无缺失和插入 ,其中变化较大的区域位于序列的 3′端。 2 3株HCVE2基因主要抗原编码区核苷酸及氨基酸同源性分别为 74.1%～ 10 0 %、79.7%～ 10 0 % ,其中 4株 2 0世纪 70～ 80年代分离毒株的核苷酸及氨基酸同源性分别为 76.3 %～ 86.2 %、81.1%～ 87.8% ,10株 2 0世纪 90年代分离毒株的核苷酸及氨基酸同源性分别为 75 .4%～ 10 0 %、79.7%～ 10 0 %。所绘制的遗传发生树分为 2个组群 (group) ,每个组群分为 2个亚组群 (subgroup) ,14株猪瘟 (HC)流行毒株在 2个组群中均有分布 ,2 0世纪 70～ 80年代分离的 3株 (75 % )在组 群 2 ,2 0世纪 90年代分离的 5株 (5 0 % )在组群 展开更多
关键词 e2基因 抗原编码区序列 差异分析 猪瘟病毒 遗传发生树 基因组群 进化关系
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异源猪瘟病毒C株E2基因保护性抗原编码区的序列分析与比较 被引量：13
6
作者 李红卫 涂长春 +4 位作者 吕宗吉 孙明 金扩世 余兴龙 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期112-114,共3页
应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增了我国南京、成都、吉林３个兽医生物制品厂提供的猪瘟病毒兔化弱毒株（Ｃ株）的Ｅ２基因保护性抗原编码区，然后将其克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体中，用Ｓａｎｇｅｒ′ｓ双脱氧法对重组质粒中的插入片段进行了序列分析... 应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增了我国南京、成都、吉林３个兽医生物制品厂提供的猪瘟病毒兔化弱毒株（Ｃ株）的Ｅ２基因保护性抗原编码区，然后将其克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体中，用Ｓａｎｇｅｒ′ｓ双脱氧法对重组质粒中的插入片段进行了序列分析。将测得的这３个厂生产的Ｃ株的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与作者实验室测得的国内石门株和国外测得的Ｃ株相同区域进行同源性比较，发现不同来源的Ｃ株及石门株之间存在不同程度的差异，核苷酸同源性为９３．６％～９９．６％，氨基酸同源性为９０．６％～９８．９％。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 免化弱毒株 e2基因 序列分析
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猪瘟病毒E2基因的定点突变、在大肠杆菌中的高效表达及表达产物的免疫原性 被引量：14
7
作者 余兴龙 涂长春 +3 位作者 徐兴然 张茂林 陈义祥 刘伯华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期439-443,共5页
用重组PCR技术对猪瘟病毒石门株E2基因进行了定点突变 ,然后将突变后的基因克隆至表达载体质粒pET 2 8a(+ )中 ,构建成重组质粒pETE2。将pETE2转入受体菌BL2 1(DE3 )plysS中 ,在IPTG的诱导下 ,重组转化菌可高效表达目的基因 ,表达量平... 用重组PCR技术对猪瘟病毒石门株E2基因进行了定点突变 ,然后将突变后的基因克隆至表达载体质粒pET 2 8a(+ )中 ,构建成重组质粒pETE2。将pETE2转入受体菌BL2 1(DE3 )plysS中 ,在IPTG的诱导下 ,重组转化菌可高效表达目的基因 ,表达量平均可达菌体蛋白总量的 2 8%。免疫印迹和间接ELISA表明所表达的蛋白是CSFV特异性的。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 定点突变 大肠杆菌 表达产物 免疫原性
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急、慢性猪瘟病毒分离株和疫苗株E2基因的序列分析 被引量：10
8
作者 刘伯华 刘湘涛 +3 位作者 韩雪清 赵启祖 李明晖 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期568-575,共8页
利用反转录 (RT)及套式PCR(N -PCR)扩增并测定了 6株具有不同表症近期甘肃省猪瘟流行野毒及C -株细胞疫苗毒的主要免疫原E2基因的核苷酸序列。序列分析比较结果表明 ,6株流行野毒与C -株疫苗毒的核苷酸同源性为 82 %～ 84 % ,流行野毒... 利用反转录 (RT)及套式PCR(N -PCR)扩增并测定了 6株具有不同表症近期甘肃省猪瘟流行野毒及C -株细胞疫苗毒的主要免疫原E2基因的核苷酸序列。序列分析比较结果表明 ,6株流行野毒与C -株疫苗毒的核苷酸同源性为 82 %～ 84 % ,流行野毒之间的核苷酸同源性在 89%～99%之间 ,并且明显可分为二个组群 ,病毒株所属组群与其临床症状有一定的相关性。流行野毒与C -株毒在中和抗原决定簇上有部分氨基酸存在性质差异 ,可能影响C -株毒对流行野毒的中和滴度。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 序列分析 分离株 疫苗株
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表达猪瘟病毒E2基因和gfp报道基因的伪狂犬病病毒双基因转移载体的构建 被引量：9
9
作者 潘兹书 张楚瑜 +1 位作者 陈玉栋 闵平 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期466-470,共5页
将以PRVgG为启动子 ,SV4 0polyA为加尾信号的CSFVE2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒 (PRV)tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2 .5 ,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列 ,构建了携带CSFVE2基因的转移载体pTKE2 免疫荧光检测证... 将以PRVgG为启动子 ,SV4 0polyA为加尾信号的CSFVE2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒 (PRV)tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2 .5 ,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列 ,构建了携带CSFVE2基因的转移载体pTKE2 免疫荧光检测证实 ,转染BHK2 1细胞的pTKE2在感染PRV的情况下 ,能表达E2蛋白 采用特异性引物PCR方法扩增gfp表达盒 ,对酶切位点进行改造 ,将其克隆到pTKE2的SalⅠ位点 ,构建了用PRVgG启动子和HCMVIE启动子分别控制E2基因和gfp基因表达、两基因取向相反的双基因转移载体pTKE2 .GFP 将双基因转移载体pTKE2 .GFP转染BHK2 1细胞中 ,12h后在荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的GFP表达 。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 转移载体 绿色荧光蛋白 e2基因
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猪瘟病毒流行毒株E2基因密码子优化及在酵母中的高效表达 被引量：13
10
作者 韩雪清 刘湘涛 +2 位作者 张永国 张涌 谢庆阁 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期560-568,共9页
密码子的偏嗜性是影响基因异源表达的重要参数之一 ,优化密码子序列能够提高外源基因的表达水平。野生型猪瘟病毒E2基因在毕赤酵母中的表达量较低 ,为了提高E2基因在毕赤酵母中的表达水平 ,利用PCR基础上的定点突变技术将E2基因上的毕... 密码子的偏嗜性是影响基因异源表达的重要参数之一 ,优化密码子序列能够提高外源基因的表达水平。野生型猪瘟病毒E2基因在毕赤酵母中的表达量较低 ,为了提高E2基因在毕赤酵母中的表达水平 ,利用PCR基础上的定点突变技术将E2基因上的毕赤酵母低利用密码子突变为其高利用率的简并密码子。结果表明 ,替换野生型E2基因上 2 4个酵母低利用密码子后 ,E2基因在酵母中表达水平有较显著提高 。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 密码子优化 酵母中 表达
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细胞因子与猪瘟病毒E_2基因真核双表达载体的构建及其免疫增强作用 被引量：8
11
作者 陈创夫 余兴龙 +4 位作者 马正海 李作生 李红卫 涂长春 殷震 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1406-1410,共5页
构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2、IL 3基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果表明 ,构建了 2种猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2、3的真核表达质粒pIRSTIL 2 ,pIRSTIL 3。将 2种质粒转染BHK 2 1细... 构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2、IL 3基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果表明 ,构建了 2种猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2、3的真核表达质粒pIRSTIL 2 ,pIRSTIL 3。将 2种质粒转染BHK 2 1细胞 ,均可在体外表达E2 抗原和有生物活性的IL 2、IL 3两种质粒能诱导产生CSFV的特异性免疫反应。pIRSTIL 2 ,pIRSTIL 3所诱导的免疫应答反应比使用单表达质粒 pIRST强。试验表明 ,细胞因子与目的基因构建的双表达基因疫苗能有效提高基因疫苗的免疫效果。 展开更多
关键词 细胞因子 猪瘟病毒 e2基因 免疫增强作用 双表达载体 猪瘟 基因疫苗 真核表达
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应用DNA疫苗制备猪瘟病毒单克隆抗体的研究 被引量：13
12
作者 李作生 余兴龙 +5 位作者 李敏 马刚 马丛林 李红卫 涂长春 殷震 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期76-77,共2页
关键词 DNA疫苗 CSFV e2基因 单克隆抗体 猪瘟病毒 制备
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猪瘟病毒云南毒株E2基因片段序列测定及分析 被引量：9
13
作者 尹革芬 朱建波 +3 位作者 姚俊 高华峰 信爱国 张念祖 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期167-169,共3页
用RT_nPCR方法 ,选择猪瘟病毒 2 0 0 0年云南部分地方流行毒株E2基因主要保护性抗原决定簇编码区片段进行扩增和cDNA序列分析 ,并与中国标准强毒石门株进行比较。结果显示 ,云南地方毒株之间核苷酸及氨基酸序列同源性均大于90 % ;但与... 用RT_nPCR方法 ,选择猪瘟病毒 2 0 0 0年云南部分地方流行毒株E2基因主要保护性抗原决定簇编码区片段进行扩增和cDNA序列分析 ,并与中国标准强毒石门株进行比较。结果显示 ,云南地方毒株之间核苷酸及氨基酸序列同源性均大于90 % ;但与中国标准强毒石门株差异较大 ,其核苷酸及氨基酸同源性均小于 80 %。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 序列分析
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表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒的构建及其在兔体内的免疫原性分析 被引量：13
14
作者 孙元 祁巧芬 +7 位作者 梁冰冰 成丹 李娜 于墨洋 王宇飞 刘霓虹 朱庆虎 仇华吉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1734-1739,共6页
为了构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗,通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2。测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blotting检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用猪瘟兔化弱... 为了构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗,通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2。测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blotting检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用猪瘟兔化弱毒疫苗株(C株)进行攻击,攻毒后3 d取其脾脏,用实时荧光定量RT-PCR检测C株病毒RNA。结果表明,该重组腺病毒传至第10代时,毒价可达1.0×1010 TCID50/mL;外源基因可在其中得到稳定表达;rAdV-E2接种兔免疫后2周产生猪瘟特异性抗体,免疫后5 w抗体达到峰值,攻毒后rAdV-E2接种兔和C株接种兔均未出现定型热反应,从其脾脏也未检测到C株病毒RNA,而野生型腺病毒接种兔均出现了定型热反应,并且从其脾脏检测大量C株病毒RNA,其含量达到了103拷贝/μL以上。由此表明,rAdV-E2可望开发为猪瘟候选疫苗。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 重组腺病毒 免疫原性 家兔
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猪瘟病毒石门株不同代次E2基因主要抗原编码区序列差异分析 被引量：7
15
作者 赵耘 王在时 +2 位作者 王琴 李博 丘惠深 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2002年第7期7-10,共4页
利用 RT- PCR及序列测定对猪瘟病毒石门株不同代次毒株 E2基因主要抗原编码区及同一代次不同年代主要抗原编码区序列进行了分析 ,结果所有毒株 E2基因主要抗原编码区序列呈现较高的同源性 ,石门株不同代次毒株 E2基因主要抗原编码区核... 利用 RT- PCR及序列测定对猪瘟病毒石门株不同代次毒株 E2基因主要抗原编码区及同一代次不同年代主要抗原编码区序列进行了分析 ,结果所有毒株 E2基因主要抗原编码区序列呈现较高的同源性 ,石门株不同代次毒株 E2基因主要抗原编码区核苷酸及氨基酸同源性分别为 97.7%～ 10 0 %、97.3%～ 10 0 % ;同一代次不同年代主要抗原编码区序列核苷酸及氨基酸同源性均为 98.6 %～ 10 0 %。只有 3个代次毒株发生较小的变异 ,核苷酸及氨基酸呈现 1～ 3个碱基或氨基酸的变异 ,其他代次的毒株序列完全一致。初步证实了猪瘟病毒分子结构的遗传稳定性 。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 石门株 代次 e2基因 抗原编码区 序列差异分析 同源性 遗传稳定性
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猪瘟病毒E2基因在Pichia pastoris中的表达及其免疫活性的初步研究 被引量：9
16
作者 韩雪清 刘湘涛 +2 位作者 张涌 谢庆阁 田波 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期208-211,共4页
将猪瘟病毒的E2基因克隆入酵母分泌型表达载体pPIC9K中 ,酶切线性化后电穿孔导入Pichiapastoris进行整合 ,经G418筛选得到高拷贝转化子 ,甲醇诱导表达。SDS PAGE和Westernblot结果证实了酵母培养上清液中含有E2蛋白。免疫活性研究证明P .
关键词 猪瘟病毒 e2基因 毕赤酵母 表达 免疫活性
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猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆及在原核细胞中的表达 被引量：7
17
作者 李红卫 涂长春 +5 位作者 余兴龙 金扩世 吕宗吉 李茂祥 章金钢 殷震 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期146-152,共7页
应用ＲＴＰＣＲ分两段扩增猪瘟病毒（ＨＣＶ）石门株Ｅ２基因，然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一ＢｇｌⅡ位点，将它们连接成为完整的Ｅ２基因，并克隆到ｐＵＣ１９质粒中，获得重组质粒ｐＨＣＥ２。另设计一对引物，... 应用ＲＴＰＣＲ分两段扩增猪瘟病毒（ＨＣＶ）石门株Ｅ２基因，然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一ＢｇｌⅡ位点，将它们连接成为完整的Ｅ２基因，并克隆到ｐＵＣ１９质粒中，获得重组质粒ｐＨＣＥ２。另设计一对引物，以ｐＨＣＥ２为模板扩增出不含信号肽的Ｅ２基因，然后将其克隆到表达载体质粒ｐＢＶ２２０和ｐＥＴ２８ａ（＋）中，获得重组质粒ｐＢＶＥ２和ｐＥＴＥ２，用酶切、ＰＣＲ和序列分析鉴定Ｅ２基因插入位置、方向和读码框架的正确性。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和直接ＥＬＩＳＡ检测表明重组质粒ｐＢＶＥ２和ｐＥＴＥ２转化、诱导的受体菌均能表达Ｅ２抗原。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 克隆 表达 原核细胞 猪瘟 诊断
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广西流行的猪瘟病毒株E2基因序列测定及分析 被引量：8
18
作者 廖素环 罗廷荣 +6 位作者 吴显实 刘芳 陆芹章 黄伟坚 温荣辉 秦爱珍 余克伦 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期196-199,共4页
目的对广西流行的猪瘟病毒E2基因进行序列测定及分析。方法应用PCR对15株猪瘟病毒E2基因进行扩增、克隆及测序,利用DNAstar分析软件对所测定的15株毒株与兔化弱毒(HCLV)、石门(Shimen)毒株的相应基因片段进行同源性分析。结果得到长度为... 目的对广西流行的猪瘟病毒E2基因进行序列测定及分析。方法应用PCR对15株猪瘟病毒E2基因进行扩增、克隆及测序,利用DNAstar分析软件对所测定的15株毒株与兔化弱毒(HCLV)、石门(Shimen)毒株的相应基因片段进行同源性分析。结果得到长度为1092nt猪瘟病毒E2基因,编码364个氨基酸残基的目的基因片段。广西株与HCLV、Shimen株的核苷酸同源性分别为81.5%～82.8%和82.8%～84.3%,推导的氨基酸同源性分别为87.1%～88.8%和88.5%～89.9%,广西毒株之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为92.3%～99.9%和94.8%～100%。广西15株猪瘟病毒E2蛋白上的全部半胱氨酸(Cys)位点均未改变,推测其E2蛋白的抗原结构保持很高的稳定性。但广西毒株中与特定单克隆抗体结合的724、725、729、734和738位的氨基酸发生了变异,这些变异可能导致不完全免疫保护。把所测定的广西15株与国内外已发表的19株病毒相应序列进行比较,建立系统发育树,所比较的34株猪瘟病毒被分为两个群,广西毒株皆属于基因群Ⅱ。结论成功进行了广西流行猪瘟病毒E2基因序列分析,为进一步探讨猪瘟病毒E2蛋白的抗原结构提供了依据。 展开更多
关键词 基因序列测定 流行 病毒株 氨基酸同源性 猪瘟病毒 e2基因 核苷酸同源性 e2蛋白 基因序列分析 基因片段 抗原结构 同源性分析 氨基酸残基 单克隆抗体 系统发育树 方法应用 兔化弱毒 分析软件 HCLV 半胱氨酸 免疫保护 PCR
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共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒的构建及其免疫原性研究 被引量：10
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作者 何雷 张彦明 +7 位作者 徐彦召 唐青海 王静 杨小云 代晨 向华 常鹏祥 林鸷 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期385-391,共7页
为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-E2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增E2基因和pIL-2基因,将扩增的全长E2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性... 为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-E2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增E2基因和pIL-2基因,将扩增的全长E2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性接头序列(5个甘氨酸密码子)串联,插入腺病毒穿梭载体AdTrack中,在受体菌中与骨架载体AdEasy同源重组。重组质粒AdEasy-E2-pIL-2转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒rAd-E2-pIL-2。用rAd-E2-pIL-2免疫家兔,经兔体交互免疫试验评定其免疫效果。结果显示,经RT-PCR和West-ern blot检测,成功构建了rAd-E2-pIL-2,重组病毒滴度达108.12PFU/mL。rAd-E2-pIL-2接种家兔后刺激接种兔产生猪瘟病毒特异性抗体,淋巴细胞转化试验结果显示猪瘟病毒诱导兔淋巴细胞特异性增殖,攻毒后rAd-E2-pIL-2接种兔和猪瘟病毒C株接种兔均未出现定型热反应。研究结果表明,rAd-E2-pIL-2免疫兔可以预防猪瘟病毒C株接种引发的体温反应,rAd-E2-pIL-2可望成为猪瘟候选疫苗。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 猪白细胞介素2 重组腺病毒 细胞因子佐剂
原文传递
广西猪瘟流行毒与C-株疫苗毒gp55(E_2)主要抗原区DNA序列差异的比较 被引量：8
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作者 张永国 刘湘涛 +2 位作者 韩雪清 张彦明 薛青红 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第1期79-84,共6页
采用反转录 PCR(RT- PCR)和套式 PCR(nest Polym erase Chain Reaction,n PCR)扩增出 3株广西省近期 (1999～ 2 0 0 0年 )猪瘟流行野毒的 E2 基因 ,将其分别克隆于 PMD- 18T载体上并进行了核苷酸序列测定 ,根据 C株及 Brescia和 Alfort... 采用反转录 PCR(RT- PCR)和套式 PCR(nest Polym erase Chain Reaction,n PCR)扩增出 3株广西省近期 (1999～ 2 0 0 0年 )猪瘟流行野毒的 E2 基因 ,将其分别克隆于 PMD- 18T载体上并进行了核苷酸序列测定 ,根据 C株及 Brescia和 Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行氨基酸序列推导 ,同时进行了同源性比较及 E2 糖蛋白结构的分析。结果表明 ,所测 3株 HCV E2 基因的长度均为 1170 bp,编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和部分跨膜序列 ,共由 384个氨基酸组成。3株流行毒的 E2 基因核苷酸序列同源性为 90 .10 %～ 98.5 4%,相应的氨基酸序列同源性为 89.5 9%～ 97.92 %。这 3株流行毒与 C-株兔脾组织毒 (疫苗种毒 ) E2 基因的核苷酸序列同源性为 82 .87%～ 83.99%,相应的氨基酸序列同源性为 86 .98%～ 90 .10 %,表明近期猪瘟流行毒与 C-株疫苗毒的 gp5 5蛋白之间存在一定的差异。 展开更多
关键词 猪瘟 e2基因 糖蛋白 流行毒 疫苗毒 抗原 DNA序列分析 比较研究 广西
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