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题名双重荧光RT-RAA检测5种蚊媒病毒方法的建立
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作者
周冬根
许恒毅
罗洁
胡群
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机构
宁波国际旅行卫生保健中心
南昌大学食品科学与技术国家重点实验室
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出处
《中国国境卫生检疫杂志》
CAS
2022年第5期337-341,共5页
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基金
国家重点研发计划项目(2019YFF0302505,2019YFF0302501)
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文摘
目的建立快速筛查登革病毒(DENV)、乙型脑炎病毒(JEV)、寨卡病毒(ZIKV)、黄热病毒(YFV)以及基孔肯雅病毒(CHIKV)5种蚊媒病毒的重组酶介导等温扩增(RAA)方法。方法分析上述5种病毒的保守基因作为靶标区域并引入人核糖核酸酶P(RNaseP)基因作为内对照,设计6组特异性引物和探针,并根据引物二聚体和错配等生物信息学分析将6组引物和探针组合成3组双重荧光RT-RAA检测体系,在相同反应条件下进行检测。用5种病毒的体外转录RNA验证3组荧光RT-RAA检测体系的灵敏度,用疟原虫、汉坦病毒、汉城病毒以及流感病毒核酸验证方法的特异性;分别用中浓度(10^(4)拷贝/μl)、低浓度(10^(2)拷贝/μl)5种病毒的体外转录RNA验证3组双重荧光RT-RAA检测体系的重复性。结果通过生物信息学分析,将5种病毒和RNaseP组合为3组双重荧光RT-RAA检测体系,分别为DENV与ZIKV、JEV与YFV以及CHIKV与RNaseP,均在39℃反应15 min。3组双重荧光RT-RAA检测体系检测5种病毒体外转录RNA的灵敏度介于1~10^(2)拷贝/μl,其中检测DENV、ZIKV和YFV的灵敏度均为1拷贝/μl,JEV灵敏度为10拷贝/μl,CHIKV灵敏度为10^(2)拷贝/μl;3组荧光RT-RAA检测体系均与其他病毒无交叉反应。5种病毒的中浓度体外转录RNA的检出率均达到100.0%,低浓度体外转录RNA也能达到83.3%。结论本研究建立的检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于人体及蚊类样本中5种蚊媒病毒的筛查。
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关键词
重组酶介导等温扩增
蚊媒病毒
双重检测
登革病毒
乙型脑炎病毒
寨卡病毒
黄热病毒
基孔肯雅病毒
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Keywords
Recombinase aided amplification
Mosquito-borne virus
dutiplex detection
Dengue virus
Japanese encephalitis virus
Zika virus
Yellow fever virus
Chikungunya virus
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分类号
R373.3
[医药卫生—病原生物学]
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