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利用双荧光报告基因可视化鉴定胚特异启动子的功能
1
作者 卜小兰 夏玉梅 +4 位作者 詹祎捷 余木兰 淡俊豪 唐宁 曹孟良 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2022年第11期3587-3594,共8页
胚特异启动子对于外源基因在种子中特异表达、改良水稻品质有重要理论和实际意义。为高效鉴定水稻胚特异启动子功能和表达情况,本实验筛选了三个胚特异启动子OsESP1、pEMB1和Ole18,分别连接到含红色荧光蛋白(RFP)报告基因的载体pLJ02上... 胚特异启动子对于外源基因在种子中特异表达、改良水稻品质有重要理论和实际意义。为高效鉴定水稻胚特异启动子功能和表达情况,本实验筛选了三个胚特异启动子OsESP1、pEMB1和Ole18,分别连接到含红色荧光蛋白(RFP)报告基因的载体pLJ02上构建双荧光表达载体。利用基因枪介导的瞬时表达结合农杆菌介导的稳定表达,通过荧光观察,鉴定三个胚特异启动子的特异表达模式。结果表明:GFP/RFP双荧光载体是一个可以用于可视化筛选组织特异启动子的高效表达载体;相较于成熟胚,幼胚更适宜用于胚特异表达启动子的瞬时表达验证,为研究组织特异性启动子驱动外源基因在水稻中表达及水稻品种遗传改良拓展新思路。 展开更多
关键词 胚特异启动子 基因克隆 基因枪 双荧光报告基因
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4ARE强化的双荧光蛋白报告基因载体的构建及鉴定
2
作者 徐海荣 任雪迪 +3 位作者 翟达 马瑶 李晶 戴尔珣 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第3期325-328,共4页
目的:构建4ARE强化的红、绿双荧光蛋白报告基因载体。方法:人工合成3对ARE序列,经退火和磷酸化后插入pARE-TK-GFP载体,构建成p4ARE-TK-GFP载体。以质粒pDsRed2-N1为模板,PCR扩增红色荧光蛋白及其启动子序列与pMD18-T载体连接,构建成pMD-... 目的:构建4ARE强化的红、绿双荧光蛋白报告基因载体。方法:人工合成3对ARE序列,经退火和磷酸化后插入pARE-TK-GFP载体,构建成p4ARE-TK-GFP载体。以质粒pDsRed2-N1为模板,PCR扩增红色荧光蛋白及其启动子序列与pMD18-T载体连接,构建成pMD-DsRed载体。用Ade Ⅰ酶和BspT Ⅰ酶对载体pMD-DsRed和p4ARE-TK-GFP进行双酶切,连接产物转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提酶切及测序鉴定。结果:经酶切及DNA测序证实,目的片段ARE及DsRed的序列完全正确,重组双荧光蛋白报告基因载体成功转入DH5α。结论:成功构建4ARE强化的双荧光蛋白报告基因载体并在DH5α内表达,为进一步研究ARE的调控作用奠定了基础。 展开更多
关键词 抗氧化反应元件(ARE) 双荧光蛋白 报告基因 载体构建
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探讨嵌合内含子对非小细胞肺癌细胞系PC-9上皮间质转化的影响 被引量：1
3
作者 廖亮 杨国辉 《海南医学院学报》 CAS 2021年第2期81-87,共7页
目的:探讨嵌合内含子(chimeric intron)对人非小细胞肺癌PC-9细胞株上皮间质转化(EMT)的影响和作用。方法:以psiCHECK-2质粒为基本框架,插入嵌合内含子构建出psiCHECK-2-Intron双荧光素酶报告基因重组质粒载体,再将psiCHECK-2-Intron和p... 目的:探讨嵌合内含子(chimeric intron)对人非小细胞肺癌PC-9细胞株上皮间质转化(EMT)的影响和作用。方法:以psiCHECK-2质粒为基本框架,插入嵌合内含子构建出psiCHECK-2-Intron双荧光素酶报告基因重组质粒载体,再将psiCHECK-2-Intron和psiCHECK-2分别转染至PC-9细胞中,通过双荧光素酶活性快速检测该重组质粒载体在真核细胞中的表达情况,然后分别应用细胞划痕实验和Matrigel侵袭实验观察PC-9细胞迁移和侵袭能力的变化,再通过qRT-PCR以及Western-Blotting检测EMT相关分子标志物:N-钙黏蛋白(N-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)以及转录因子Snail表达水平的改变。结果:与对照组相比,Intron组PC-9细胞的侵袭能力明显降低(P<0.001),N-cadherin、β-catenin和Snail等相关分子标志物的表达量明显下调(P<0.001)。结论:嵌合内含子能够抑制非小细胞肺癌PC-9细胞株的EMT转化,其作用机制可能与N-cadherin、β-catenin和Snail表达量下调有关。 展开更多
关键词 psiCHECK-2 嵌合内含子 PC-9 双荧光素酶报告基因 非小细胞肺癌(NSCLC) 上皮间质转化(EMT)
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