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狂犬病病毒和犬2型腺病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用
1
作者 刘健 桂亚萍 +8 位作者 白艺兰 夏炉明 朱晓英 杨显超 陶田谷晟 唐聪圣 张玉杰 王建 赵洪进 《公共卫生与预防医学》 2023年第3期33-37,共5页
目的为了解CAV2-ΔE3-CGS口服疫苗免疫后排毒情况和掌握犬腺病毒(CAV)感染本底情况,研究建立狂犬病病毒和犬2型腺病毒双重荧光定量PCR检测方法。方法针对CAV2-ΔE3-CGS中犬2型腺病毒E1基因和狂犬病病毒G基因设计特异性引物和探针,建立检... 目的为了解CAV2-ΔE3-CGS口服疫苗免疫后排毒情况和掌握犬腺病毒(CAV)感染本底情况,研究建立狂犬病病毒和犬2型腺病毒双重荧光定量PCR检测方法。方法针对CAV2-ΔE3-CGS中犬2型腺病毒E1基因和狂犬病病毒G基因设计特异性引物和探针,建立检测CAV2-ΔE3-CGS的双重荧光定量PCR检测方法,并对实验动物场和犬类留验场流浪犬口鼻拭子和环境样本进行了检测。结果该方法生成的标准曲线分别为Y=-3.351×logX+44.895,R^(2)为0.999和Y=-3.413×logX+45.192,R^(2)为0.996,线性关系良好,最低检测线都为102拷贝/μL。在实验动物场流浪犬和环境中未检测到CAV2-ΔE3-CGS;在犬类留验场流浪犬中检测到CAV感染,其中口鼻拭子阳性率为5.88%(5/85),肛拭子阳性率为8.24%(7/85),环境样本阳性率为4.00%(1/25)。结论研究建立的双重荧光定量PCR检测方法适用于CAV2-ΔE3-CGS排毒情况排查和CAV感染调查。研究表明CAV2-ΔE3-CGS免疫后未检测到排毒,上海市流浪犬CAV感染率较低,因此符合CAV2-ΔE3-CGS的口服免疫要求。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 犬2型腺病毒 双重荧光定量pcr CAV2-ΔE3-CGS
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沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型双重荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 卓永光 田龙 +1 位作者 樊祖茜 胡天 《国际检验医学杂志》 CAS 2017年第A02期11-14,共4页
目的建立双重实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体和单纯疱疹病毒2型的方法。方法针对沙眼衣原体和单纯疱疹病毒2型基因组保守序列,设计引物和探针,建立双重荧光定量PCR检测方法,评价其敏感性、特异性,并与常规单重荧光PCR方法比较。结果成... 目的建立双重实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体和单纯疱疹病毒2型的方法。方法针对沙眼衣原体和单纯疱疹病毒2型基因组保守序列,设计引物和探针,建立双重荧光定量PCR检测方法,评价其敏感性、特异性,并与常规单重荧光PCR方法比较。结果成功建立了双重实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体和单纯疱疹病毒2型的方法,检测限均为1000copies/μL,敏感性和特异性均为100%。应用该方法检测了50份患者标本,与试剂公司提供的单重荧光PCR试剂检测结果一致性为100%。结论该研究建立的快速、准确,可同时检测沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型的双重实时荧光定量PCR法,具有较高的敏感性、特异性和稳定型,操作简单,可用于沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型的临床筛查和诊断。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 单纯疱疹病毒2型 双重荧光定量pcr
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双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α mRNA表达水平 被引量：2
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作者 姚霜 郑璐 +5 位作者 于洋 喻妙梅 潘丽莉 张俊 冯悦华 罗光华 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2015年第6期524-527,共4页
目的:建立单管检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和内参GAPDH mRNA表达水平的双重荧光实时定量PCR方法。方法:脂多糖刺激小鼠巨噬细胞Ana-1后提取细胞RNA,经反转录合成c DNA,应用自行设计的不同荧光标记的TNF-α和GAPDH引物探针,经PCR扩增后,... 目的:建立单管检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和内参GAPDH mRNA表达水平的双重荧光实时定量PCR方法。方法:脂多糖刺激小鼠巨噬细胞Ana-1后提取细胞RNA,经反转录合成c DNA,应用自行设计的不同荧光标记的TNF-α和GAPDH引物探针,经PCR扩增后,在FAM通道和CY5通道分别读取Ct值,同时应用基因测序技术对结果进行验证,并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性。结果:双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α的灵敏度达4×101拷贝/μL,检测线性范围可达6个数量级,批内和批间重复性好。结论:新方法消除了目的基因与内参的加样误差,节约成本,快速准确,适用于TNF-αmRNA的定量检测。 展开更多
关键词 双重荧光定量pcr 肿瘤坏死因子-Α GAPDH
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