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基于CRISPRi的贝氏柯克斯体dotB基因沉默
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作者 周春雨 赵明亮 +7 位作者 程如熹 张珊 李娜娜 于永慧 欧阳譞 焦俊 熊小路 张家宁 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2024年第1期6-11,共6页
目的更简便快捷地研究贝氏柯克斯体基因功能。方法基于CRISPRi原理构建携带化脓链球菌dCas9的重组质粒,将靶向贝氏柯克斯体dotB基因的sgRNA序列插入重组质粒中并将质粒经电转化导入贝氏柯克斯体,利用脱水四环素(aTC)诱导dCas9表达以抑... 目的更简便快捷地研究贝氏柯克斯体基因功能。方法基于CRISPRi原理构建携带化脓链球菌dCas9的重组质粒,将靶向贝氏柯克斯体dotB基因的sgRNA序列插入重组质粒中并将质粒经电转化导入贝氏柯克斯体,利用脱水四环素(aTC)诱导dCas9表达以抑制贝氏柯克斯体dotB基因的转录,从而建立基于CRISPRi系统的贝氏柯克斯体基因沉默技术。结果在aTC诱导下,该CRISPRi系统中dCas9可正常表达,dotB在转录水平和蛋白水平均被抑制,dotB表达抑制后贝氏柯克斯体胞内生长繁殖水平降低。结论成功建立起基于CRISPRi的贝氏柯克斯体的基因沉默技术,为研究贝氏柯克斯体特定基因的生物学功能研究提供了技术支撑。 展开更多
关键词 贝氏柯克斯体 沉默 CRISPRi dCas9 dotb
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