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Dot-PPA-ELISA联合检测猪PRV.Brucella和Chlamydia抗体方法的建立和应用研究 被引量：5
1
作者 段亮 曹三杰 文心田 《四川农业大学学报》 CSCD 2000年第3期283-286,共4页
首次将Dot-PPA -ELISA用于联合检测猪衣原体、伪狂犬病毒和布氏杆菌抗体 ,并进行了较大规模的田间猪血清检测。实验对制作诊断膜片的工艺流程和关键材料做了细致研究 ,并进行同步监测、分析。确定了本方法的最佳反应条件和阳性标准。联... 首次将Dot-PPA -ELISA用于联合检测猪衣原体、伪狂犬病毒和布氏杆菌抗体 ,并进行了较大规模的田间猪血清检测。实验对制作诊断膜片的工艺流程和关键材料做了细致研究 ,并进行同步监测、分析。确定了本方法的最佳反应条件和阳性标准。联合诊断膜片 (简称膜片 )具有良好特异性、灵敏性和稳定性。诊断膜片在 4℃保存 8个月、室温 (15～ 2 5℃ )保存 2个月、37℃保存 1个月灵敏性 ,特异性不变。 1∶6 4、1∶12 8、1∶6 4为联合检测猪伪狂犬病、衣原体病和布氏杆菌病抗体的阳性标准。结果表明 ,Dot -PPA -ELISA联合检测法操作方便、快速 ,结果客观 ,易于判读 ,诊断膜片便于寄送、保存 ,性能稳定、可靠 ,并能同时检测多种疫病等优点 ,适宜应用于猪衣原体病。 展开更多
关键词 dot-ppa-elisa 联合检测 抗体 猪 病原
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Dot-PPA-ELISA检测猪血清伪狂犬病抗体的研究 被引量：7
2
作者 曹三杰 文心田 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期213-215,共3页
本研究建立了Dot＿PPA＿ELISA检测猪伪狂犬病抗体的方法。制备的诊断膜片PRV点样抗原含量为0 5μg,可以检测的最低猪IgG含量为1 398×10＿8g,灵敏性高。不与猪瘟、猪细小病毒病、猪衣原体病、布氏杆菌病、日本乙型脑炎、口蹄疫阳性... 本研究建立了Dot＿PPA＿ELISA检测猪伪狂犬病抗体的方法。制备的诊断膜片PRV点样抗原含量为0 5μg,可以检测的最低猪IgG含量为1 398×10＿8g,灵敏性高。不与猪瘟、猪细小病毒病、猪衣原体病、布氏杆菌病、日本乙型脑炎、口蹄疫阳性血清发生交叉反应,特异性好。研究初步确定检测猪伪狂犬病抗体的阳性标准为血清效价1∶64以上。试验结果表明:该法具有操作方便、快速,结果客观,易于判读等优点,可应用于猪场伪狂犬病的诊断和抗体检测。 展开更多
关键词 dot-ppa-elisa 伪狂犬病病毒 抗体
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Dot-PPA-ELISA检测仔猪副伤寒血清抗体方法的研究 被引量：2
3
作者 黄艳艳 曹三杰 文心田 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期63-66,共4页
以沙门氏菌的改良H E 抗原为膜载抗原 ,建立了检测仔猪副伤寒血清抗体的Dot_PPA_ELISA方法。研究选取了特异性良好的抗原 ,确定了Dot_PPA_ELISA的最佳工作条件 ,初步确定了感染仔猪副伤寒的Dot_PPA_ELISA抗体阳性标准为 1∶32。本研究... 以沙门氏菌的改良H E 抗原为膜载抗原 ,建立了检测仔猪副伤寒血清抗体的Dot_PPA_ELISA方法。研究选取了特异性良好的抗原 ,确定了Dot_PPA_ELISA的最佳工作条件 ,初步确定了感染仔猪副伤寒的Dot_PPA_ELISA抗体阳性标准为 1∶32。本研究制备的诊断膜片特异性强、敏感性高 ,能够检测到 1∶2 0 4 8稀释的动物试验阳性血清 ;该方法操作简便快捷、结果客观、易于判定、各种试剂材料均可做到标准化 ,适合规模化养猪场仔猪副伤寒的抗体监测以及流行病学调查之用。 展开更多
关键词 dot-ppa-elisa 仔猪副伤寒 抗体监测
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胸膜肺炎放线杆菌抗体ApxⅣ-Dot-PPA-ELISA检测方法的建立 被引量：2
4
作者 姜宏泽 李英 +6 位作者 文心田 黄小波 伍锐 文翼平 张俊 杨瑞晨 曹三杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期633-638,共6页
本研究构建了胸膜肺炎放线杆菌溶血外毒素ⅣA(ApxⅣA)的原核表达质粒pET-28a(+)-ApxⅣ,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出分子质量约为48ku的ApxⅣ蛋白,经Western-blot分析表明该重组ApxⅣ蛋白具有反应原性。试验进一步用纯化的重组Ap... 本研究构建了胸膜肺炎放线杆菌溶血外毒素ⅣA(ApxⅣA)的原核表达质粒pET-28a(+)-ApxⅣ,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出分子质量约为48ku的ApxⅣ蛋白,经Western-blot分析表明该重组ApxⅣ蛋白具有反应原性。试验进一步用纯化的重组ApxⅣ蛋白作为抗原,建立了胸膜肺炎放线杆菌抗体的Dot-PPA-ELISA检测方法,该方法诊断膜片上点样ApxⅣ抗原质量为0.737μg,该方法检测灵敏度高,可检测到胸膜肺炎放线杆菌标准阳性血清IgG的最低含量为8.374×10-9 g;检测特异性好,不与副猪嗜血杆菌、大肠杆菌、猪链球菌2型、多杀性巴氏杆菌、日本脑炎病毒的阳性血清发生交叉反应。应用建立的诊断方法对446份临床血清样品进行检测,胸膜肺炎放线杆菌抗体的阳性检出率为25.37%。结果表明,该方法具有操作方便、灵敏、结果易于判读等优点,可应用于猪场猪传染性胸膜肺炎的血清学诊断。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅣ 表达 dot-ppa-elisa
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Dot-PPA-ELISA对猪丹毒的免疫监测及抗体保护效价的测定
5
作者 肖国生 曹三杰 文心田 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第12期58-62,共5页
用猪瘟、猪肺疫、猪丹毒三联疫苗和猪丹毒 1a、2型氢氧化铝吸附甲醛灭活疫苗分别免疫断奶仔猪 ,采用Dot PPA ELISA监测免疫猪血清抗体变化。结果 ,弱毒疫苗免疫后第 7d猪丹毒血清抗体效价开始升高 ,第 2～ 3周达最高值 ;灭活疫苗免疫后... 用猪瘟、猪肺疫、猪丹毒三联疫苗和猪丹毒 1a、2型氢氧化铝吸附甲醛灭活疫苗分别免疫断奶仔猪 ,采用Dot PPA ELISA监测免疫猪血清抗体变化。结果 ,弱毒疫苗免疫后第 7d猪丹毒血清抗体效价开始升高 ,第 2～ 3周达最高值 ;灭活疫苗免疫后第 3～ 4周抗体效价达最高值 ,且灭活疫苗免疫猪的抗体水平明显高于三联疫苗免疫猪。免疫 6周后 ,用C4 30 0 4 (1a型 )、C4 3179(1b型 )和C4 3 12 (2型 ) 3株不同血清型的猪丹毒混合强毒同时对不同抗体效价的免疫猪和对照猪进行了皮肤内接种攻毒 ,并根据其皮肤和体温反应确定 1∶32为猪能抵抗混合强毒攻击的抗体保护效价。经对 4 4头 5 0～ 6 0日龄未免疫的断奶仔猪血清检测 ,其抗体效价在 1∶32以下的猪占88.36 % ,2 78头免疫猪血清的抗体效价在 1∶32或以上的猪占 92 .81%。表明Dot PPA ELISA适用于猪群猪丹毒的免疫监测和免疫力测定。 展开更多
关键词 dot-ppa-elisa 猪丹毒 免疫监测 抗体保护 测定技术
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间接Dot-PPA-ELISA检测猪细小病毒血清抗体 被引量：1
6
作者 付利芝 王红宁 +2 位作者 曹国文 周淑兰 翟少钦 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第6期12-15,共4页
猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起妊娠母猪繁殖障碍的主要病原之一.PPV还可引起仔猪的皮炎[3]和腹泻[2].我国各省市猪场猪细小病毒血清阳性率也很高.目前对该病的诊断准确率高的方法有间接荧光抗体技术、银加强胶体金技术、聚... 猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起妊娠母猪繁殖障碍的主要病原之一.PPV还可引起仔猪的皮炎[3]和腹泻[2].我国各省市猪场猪细小病毒血清阳性率也很高.目前对该病的诊断准确率高的方法有间接荧光抗体技术、银加强胶体金技术、聚合酶链式反应法等,这些方法技术条件要求高,难在基层推广应用.血清中和试验、血凝和血凝抑制试验等操作较为简便,但准确率不高. 展开更多
关键词 间接dot—ppa—elisa检测 猪 细小病毒 血清抗体 试验流程
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斑点酶联免疫吸附试验检测猪瘟血清抗体最佳条件的研究 被引量：1
7
作者 洪云平 曹三杰 文心田 《畜禽业（南方养猪）》 2006年第5期6-9,共4页
以硝酸纤维膜为固相载体,以猪瘟病毒为抗原,确定了Dot-PPA-ELISA检测猪瘟抗体的最佳反应条件。试验表明,猪瘟兔化弱毒经仔猪睾丸原代细胞培养纯化,以0.05mol/LpH9.5CBS缓冲液稀释至浓度为0.98～1.15mg/mL制备诊检抗原膜片;采用4%蛋清蛋... 以硝酸纤维膜为固相载体,以猪瘟病毒为抗原,确定了Dot-PPA-ELISA检测猪瘟抗体的最佳反应条件。试验表明,猪瘟兔化弱毒经仔猪睾丸原代细胞培养纯化,以0.05mol/LpH9.5CBS缓冲液稀释至浓度为0.98～1.15mg/mL制备诊检抗原膜片;采用4%蛋清蛋白0.05mol/LpH9.5CBS封闭;检测反应稀释液应用0.01MPPBST(含0.1%PEG、0.05Tween-20),酶结合物工作浓度以1∶30,底物选取4-氯1-萘酚等为检测猪瘟血清抗体的最佳反应条件。重复试验证明了其检测稳定性好。交叉试验、阻断试验证明了其特异性强。 展开更多
关键词 猪瘟 抗体dot—ppa—elisa 最佳条件
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斑点酶联A蛋白免疫吸附试验(Dot-PPA-ELISA)检测猪衣原体抗体方法的建立
8
作者 张焕容 文心田 曹三杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期637-640,共4页
本研究建立了斑点酶联A蛋白免疫吸附试验(Dot-PPA-ELISA),对猪衣原体IgG的最小检测量为1.21 ng。以间接血凝试验方法为对照,两种方法同时检测120头份猪血清样品,Dot-PPA-ELISA检出43头份(35.83%),效价≥256;间接血凝试验检出26头份(21.6... 本研究建立了斑点酶联A蛋白免疫吸附试验(Dot-PPA-ELISA),对猪衣原体IgG的最小检测量为1.21 ng。以间接血凝试验方法为对照,两种方法同时检测120头份猪血清样品,Dot-PPA-ELISA检出43头份(35.83%),效价≥256;间接血凝试验检出26头份(21.67%),效价≥64。诊断膜片与猪瘟、猪布氏杆菌病、猪口蹄疫和猪弓形体病标准阳性血清均不出现有意义的交叉反应。诊断膜片置室温、4℃和-20℃下至少保存3个月其抗原效价不变。试验表明本方法重复符合率为94.44%,且反应效果不受反应板质量和新旧的影响;试剂用量节省,各步骤均可做到严格定量,操作简便,3 h内可出结果,肉眼即可判断,不需要特殊检测仪器。由于辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌A蛋白(PPA)是一种广谱诊断试剂,因此Dot-PPA-ELISA还可以用于其它哺乳动物衣原体抗体的检测。 展开更多
关键词 斑点酶联A蛋白免疫吸附试验 猪衣原体病 检测 抗体
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仔猪副伤寒血清抗体水平与其保护力的相关性研究
9
作者 曹三杰 黄艳艳 文心田 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第6期56-58,共3页
用已经建立的检测仔猪副伤寒血清抗体的Dot PPA ELISA ,对不同仔猪副伤寒抗体水平试验组 14头仔猪和对照组 4头仔猪进行了血清抗体效价测定 ,并以沙门菌强毒攻击受试猪 ,测定血清抗体效价与保护力的关系。试验结果表明 ,以Dot PPA ELIS... 用已经建立的检测仔猪副伤寒血清抗体的Dot PPA ELISA ,对不同仔猪副伤寒抗体水平试验组 14头仔猪和对照组 4头仔猪进行了血清抗体效价测定 ,并以沙门菌强毒攻击受试猪 ,测定血清抗体效价与保护力的关系。试验结果表明 ,以Dot PPA ELISA检测的仔猪副伤寒血清抗体几何平均效价不低于 2 8.2 时 ,85 .7%的猪能够抵抗沙门菌强毒的攻击。试验初步确定以Dot PPA ELISA进行猪群免疫监测时 ,血清抗体的几何平均效价 2 8.0 为仔猪副伤寒的保护临界标准 ,该标准的确定为集约化猪场用Dot PPA ELISA检测仔猪副伤寒血清抗体 ,进行仔猪副伤寒的诊断。 展开更多
关键词 仔猪 副伤寒 血清抗体 免疫保护力 相关性 抗体效价 dot—ppa—elisa方法 检测
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应用DotPPAELISA检测猪布氏杆菌病抗体的研究 被引量：9
10
作者 曹三杰 文心田 李继祥 《四川农业大学学报》 CSCD 1999年第3期300-303,共4页
本试验以布氏杆菌ＳＡＴ 为对照试验，建立了ＤｏｔＰＰＡＥＬＩＳＡ 检测猪布氏杆菌病抗体的方法，该法检测的猪ＩｇＧ 含量可达６９９２×１０－ ９ｇ，灵敏性高，不同猪抗ＰＲＶ、ＰＰＶ、ＨＣＶ、ＪＥＶ、ＣＨＬ 等阳性... 本试验以布氏杆菌ＳＡＴ 为对照试验，建立了ＤｏｔＰＰＡＥＬＩＳＡ 检测猪布氏杆菌病抗体的方法，该法检测的猪ＩｇＧ 含量可达６９９２×１０－ ９ｇ，灵敏性高，不同猪抗ＰＲＶ、ＰＰＶ、ＨＣＶ、ＪＥＶ、ＣＨＬ 等阳性血清发生交叉反应，特异性强；此外该法还具有操作简便、快捷不需特殊试验条件、结果客观、肉眼易于判断、反应膜片可长期保存等优点。适宜在广大基层单位应用，对布病的快速诊检有着十分重要的意义。 展开更多
关键词 dotppaelisa 猪布氏杆菌病 抗体
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