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单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.Ⅰ. 被引量：38
1
作者 严自助 王文 +1 位作者 吕再婴 吴缨 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第3期161-164,共4页
将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳... 将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳性率及抗原水平高于EPG<100。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗后一年,粪检阴性者大部分血清抗原转为阴性;粪检阳性者血清检查仍为阳性。结果表明,肠相关阴极抗原单克隆抗体3D8A能用于Dot-ELISA检测各期病人血清中循环抗原,并能反映病人感染度与药物治疗效果。 展开更多
关键词 单克隆抗体 血吸虫病 dot-elisa
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重庆辣椒病毒病病原初步鉴定和分析 被引量：41
2
作者 郭思瑶 童艳 +2 位作者 黄娅 罗信福 青玲 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期263-270,共8页
利用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和RT-PCR法对重庆地区发生的辣椒病毒病的病原进行了鉴定和优势病毒分析。利用5种常见蔬菜病毒的血清对采自重庆8个区县的152份辣椒病毒病样品进行Dot-ELISA检测,结果表明,共有118份辣椒样品检测呈阳性,其... 利用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和RT-PCR法对重庆地区发生的辣椒病毒病的病原进行了鉴定和优势病毒分析。利用5种常见蔬菜病毒的血清对采自重庆8个区县的152份辣椒病毒病样品进行Dot-ELISA检测,结果表明,共有118份辣椒样品检测呈阳性,其中,黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的侵染最普遍,总检出率高达57.89%;番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,To MV)的总检出率最低,为22.52%;烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,Tu MV)和蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus 2,BBWV-2)的总检出率分别为30.26%、36.18%和24.34%。在118份阳性样品中,有66.10%的样品受两种及以上病毒复合侵染,其中33.33%的样品受到CMV和Tu MV复合侵染,有26.27%的样品受3种病毒复合侵染。设计5种病毒的特异性引物,随机选取16份阳性样品进行RT-PCR扩增,克隆测序结果表明扩增片段确实是5种病毒的相应序列,且RT-PCR与ELISA检测结果基本吻合。检测结果表明CMV是重庆地区辣椒上的优势病毒种类,且该地区辣椒上病毒复合侵染现象普遍。本文首次报道了To MV和Tu MV侵染辣椒。 展开更多
关键词 辣椒 辣椒病毒病 dot-elisa RT-PCR 病原鉴定
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应用Dot－ELISA技术检测草鱼出血病病毒的研究 被引量：22
3
作者 邵健忠 项黎新 +1 位作者 李亚南 毛树坚 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期6-12,共7页
报道了斑点免疫吸附ＥＬＩＳＡ（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）快速检测草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）的方法以及对提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织的检测结果，并对该方法的灵敏度与ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法进行了系统的比较。结果... 报道了斑点免疫吸附ＥＬＩＳＡ（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）快速检测草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）的方法以及对提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织的检测结果，并对该方法的灵敏度与ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法进行了系统的比较。结果表明，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出ＧＣＨＶ的最低含量为３ｐｇ，该灵敏度比ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法分别提高１０倍和２０倍，而且快速易行，是目前检测ＧＣＨＶ最为有效的方法，并可在草鱼出血病临床诊断和病毒疫苗质量鉴定等方面得到应用。 展开更多
关键词 草鱼 出血病 病毒 诊断 dot-elisa
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间接酶联免疫法测定植物内源激素 被引量：28
4
作者 唐尚格 夏玉先 裴炎 《西南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 1991年第2期183-186,共4页
采用间接酶联免疫法(ELISA)对棉花胚、花药和小麦旗叶的内源IAA、ABA、Z+ZR 含量测定,表明用ELISA 测定植物内源激素是可靠的。ELISA 能简化分离提取植物材料的步骤,节省供测材料的数量,提高被测物激素的收率,真实反映植物内源激素的水平。
关键词 植物激素 内源激素 elisa 测定
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猪附红细胞体Dot-ELISA检测方法的建立 被引量：16
5
作者 张守发 张国宏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期96-98,共3页
本试验建立了一种检测猪附红细胞体抗体的Dot-ELISA方法,并确定了试验程序中最适抗原包被浓度、被检血清最适稀释度等工作条件。特异性和重复性试验结果表明,所建立的Dot-ELISA不与猪瘟等常见猪病阳性血清发生交叉反应,且稳定性高;用所... 本试验建立了一种检测猪附红细胞体抗体的Dot-ELISA方法,并确定了试验程序中最适抗原包被浓度、被检血清最适稀释度等工作条件。特异性和重复性试验结果表明,所建立的Dot-ELISA不与猪瘟等常见猪病阳性血清发生交叉反应,且稳定性高;用所建立的Dot-ELISA与IHA对70头份被检血清进行平行检测,阳性率分别为90%和60%;对20份阳性血清进行检测,Dot-ELISA和IHA平均抗体滴度分别为1∶1 012和1∶160。表明所建立的Dot-ELISA是一种比较敏感、特异和稳定的血清学检测方法,能用于猪附红细胞体的抗体检测和疾病诊断。 展开更多
关键词 猪附红细胞体 dot-elisa 血清学试验
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植物组织粗汁液中的番木瓜环斑病毒的ELISA检测技术 被引量：23
6
作者 肖火根 范怀忠 《中国病毒学》 CAS CSCD 1994年第3期249-255,共7页
本研究建立和改进了检测番木瓜和西葫芦组织粗汁液里的番木瓜环斑病毒（ＰＲＶ）的ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法。用不同的ＥＬＩＳＡ方法来检测不同寄主植物粗汁液里的ＰＲＶ，其所用的合适的制备粗汁液的缓冲液是不同... 本研究建立和改进了检测番木瓜和西葫芦组织粗汁液里的番木瓜环斑病毒（ＰＲＶ）的ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法。用不同的ＥＬＩＳＡ方法来检测不同寄主植物粗汁液里的ＰＲＶ，其所用的合适的制备粗汁液的缓冲液是不同的。用ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法检测西葫芦粗汁液时，以０．５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ７．５，内含０．１ｍｏｌ／Ｌ乙二胺四乙酸二钠）为宜；而检测番木瓜粗汁液时，则还要加入０．２５ｍｏｌ／Ｌ脲。用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测时，在上述磷酸盐缓冲液中加入２％聚乙烯吡咯烷铜能提高对西葫芦粗汁液的检测效果。应用合适的制备粗汁液的缓冲液，ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法的灵敏度分别提高到１／４０９６和１／１０２４（稀释度）。本研究还表明，影响ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法的定过测定的主要因素是粗汁液的稀释度和包被液（０．０５ｍｏｌ／Ｌ碳酸盐缓冲液，ｐＨ９．６）的用过。在较高粗汁液稀释度和包被液的用量相同时，粗汁液里的病毒含量与ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法的ＯＤ４９２ｎｍ值呈真实的线性关系。 展开更多
关键词 番木瓜 环斑病毒 elisa 检测
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单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究Ⅱ 被引量：23
7
作者 严自助 吕再婴 +1 位作者 王文 吴缨 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 1990年第2期39-42,共4页
将血吸虫肠相关阳极抗原单克隆抗体1B10A标记过氧化物酶后用于Dot-ELISA检测了急、慢性血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90％、80.8％,除肺吸虫外,对其他主要的寄生虫病感染、非寄生虫感染性疾病及正常人无阳性反应。检测EPG>8... 将血吸虫肠相关阳极抗原单克隆抗体1B10A标记过氧化物酶后用于Dot-ELISA检测了急、慢性血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90％、80.8％,除肺吸虫外,对其他主要的寄生虫病感染、非寄生虫感染性疾病及正常人无阳性反应。检测EPG>80病人血清中的抗原水平高于EPG<80者;病人经有效药物治疗后,粪检阳性者,大部分抗原检测转为阴性,其余抗原滴度呈不同程度下降。将该单克隆抗体与肠相关阴极抗原的单克隆抗体,分别检测同批血清,结果基本一致。将肠相关阳极抗原与阴极抗原的单克隆抗体联合应用,能增强某些弱反应。 展开更多
关键词 循环抗原 dot-elisa 抗原检测 单克隆抗体 病人血清 阳性反应 肠相 关阳 感染性疾病 关阴
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Dot-ELISA用于雏鸭病毒性肝炎的诊断 被引量：15
8
作者 马秀丽 宋敏训 +2 位作者 李峰 王春玲 刘玉山 《山东家禽》 2004年第9期6-8,共3页
本实验采用过碘酸钠法用辣根过氧化物酶标记纯化的I型鸭肝炎病毒单克隆抗体,建立了检测DHV(鸭病毒性肝炎)的Dot-ELISA方法。该方法简便易行,特异性好,与鸭瘟病毒、小鹅瘟病毒、鸡传染性法氏囊病毒、鸡新城疫病毒等无交叉反应,重复性高,... 本实验采用过碘酸钠法用辣根过氧化物酶标记纯化的I型鸭肝炎病毒单克隆抗体,建立了检测DHV(鸭病毒性肝炎)的Dot-ELISA方法。该方法简便易行,特异性好,与鸭瘟病毒、小鹅瘟病毒、鸡传染性法氏囊病毒、鸡新城疫病毒等无交叉反应,重复性高,对病毒尿囊液的最低检出范围为116,而对肝脏病料的最低检出范围为1160。该方法可用于临床发病鸭的检测。 展开更多
关键词 dot—ELlSA 雏鸭 病毒性肝炎 诊断
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Dot-ELISA检测犬瘟热病毒抗原的研究 被引量：15
9
作者 金鑫 鲁承 +3 位作者 吕相哲 金吉东 金允浩 金杰 《中国兽医科技》 CAS CSCD 2000年第6期21-23,共3页
用建立的三抗体夹心法Dot ELISA检测犬瘟热病毒 (CDV )抗原 ,其抗原最低检出量为 1.15 μg/mL ( 0 .5 762 5ng/点 ) ,经与常规ELISA对 10 4份自然感染犬的血液白细胞样本 ,60份眼结膜分泌物样本 ,73份脾、肝、淋巴结等脏器样本进行检测 ... 用建立的三抗体夹心法Dot ELISA检测犬瘟热病毒 (CDV )抗原 ,其抗原最低检出量为 1.15 μg/mL ( 0 .5 762 5ng/点 ) ,经与常规ELISA对 10 4份自然感染犬的血液白细胞样本 ,60份眼结膜分泌物样本 ,73份脾、肝、淋巴结等脏器样本进行检测 ,检出的阳性率分别为 92 .3 1%、66.67%、83 .5 6%和 90 .72 %、63 .2 9%、81.86% ;两种方法检出的总阳性率分别为 83 .5 4% ( 198/ 2 3 7)和 80 .17% ( 190 / 2 3 7) ,总阳性符合率为 95 .96% ,表明两者呈高度正相关 (r =0 .92 ,P <0 .0 1)。Dot ELISA和AGID对样本检测总阳性符合率为 2 4.89% ,呈差异极显著 (X2 =3 4 0 .89,P <0 .0 1)。经电子显微镜观察验证比较 ,三抗体夹心法Dot ELISA检测的可信度为 94.74%。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 dot-elisa 免疫检测
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嗜水气单胞菌HEC毒素单克隆抗体的研究 被引量：15
10
作者 陈琼 陆承平 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第S1期81-84,共4页
以福尔马林灭活的嗜水气单胞菌 HEC 毒素免疫 Balb/C 小鼠,取其脾细胞与 SP2/O 细胞融合,用间接ELISA 筛选,获得9株分泌 HEC 毒素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,腹水 ELISA 效价为1∶640～1∶20 480。其中8株能特异性抑制 HEC 毒素的溶... 以福尔马林灭活的嗜水气单胞菌 HEC 毒素免疫 Balb/C 小鼠,取其脾细胞与 SP2/O 细胞融合,用间接ELISA 筛选,获得9株分泌 HEC 毒素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,腹水 ELISA 效价为1∶640～1∶20 480。其中8株能特异性抑制 HEC 毒素的溶血活性,溶血抑制效价为1∶32～1∶256。用1B4和5E3两株细胞制备的腹水混合,建立了检测嗜水气单胞菌 HEC 毒素的点酶法。用单抗点酶法对95株临床病鱼分离菌进行检测,有72例阳性,敏感性较多抗点酶法高。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 HEC 毒素 单克隆抗体 点酶法
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应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究 被引量：16
11
作者 布日额 李宝臣 +2 位作者 马波 王君伟 Ulrich Neumann 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期199-203,共5页
利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅Ig... 利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1：200，检测血清的最适稀释度是1：400，阳性判定标准为OD492≥0．20，且P／N≥2．0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清，其抗体滴度在1：400～1：51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 VP3基因重组原核表达产物 间接-elisa dot—elisa
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应用Dot-ELISA检测PVX、PVY和PVS 被引量：15
12
作者 孟清 张鹤龄 宋伯符 《中国病毒学》 CAS CSCD 1993年第4期366-372,共7页
以NCM为固相载体、应用间接ELISA法测定了纯化的PVX、PVY和PVS;对接种的烟草,马铃薯块茎的芽、休眠块茎顶端的PVX、PVY和PVS也分别进行了测定。结果表明检测纯病毒PVX、PVY和PVS的灵敏度分别为2.76pg、2.835pg和5.831pg。检测感病烟草... 以NCM为固相载体、应用间接ELISA法测定了纯化的PVX、PVY和PVS;对接种的烟草,马铃薯块茎的芽、休眠块茎顶端的PVX、PVY和PVS也分别进行了测定。结果表明检测纯病毒PVX、PVY和PVS的灵敏度分别为2.76pg、2.835pg和5.831pg。检测感病烟草汁液马铃薯块茎芽、休眠块茎顶端的稀释度PVX分别为:1/20480～1/81920、1/20480和1/5120;PVY分别为1/81920、1/20480和1/5120;PVS分别为1/81920～1/327680、1/20480～1/81920和1/5120～1/20480。和Cocktail-ELLSA相比,检测PVX和PVY的灵敏度提高至少16倍。实验结果表明,Dot-ELISA是检测PVX、PVY和PVS灵敏而有效的方法。 展开更多
关键词 马铃薯病毒 elisa 硝酸纤维素膜
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应用斑点ELISA技术检测副溶血弧菌 被引量：17
13
作者 臧红梅 樊景凤 王斌 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2006年第1期79-82,共4页
研究了应用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-Enzym e L inked Immunosorbent Assay,Dot-ELISA)技术检测副溶血弧菌Vibrio parahaem olyticus的方法。根据棋盘试验,确定副溶血弧菌免疫血清最佳工作浓度为1∶200,酶标抗体最佳工作浓度为1∶100,... 研究了应用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-Enzym e L inked Immunosorbent Assay,Dot-ELISA)技术检测副溶血弧菌Vibrio parahaem olyticus的方法。根据棋盘试验,确定副溶血弧菌免疫血清最佳工作浓度为1∶200,酶标抗体最佳工作浓度为1∶100,以出现明显清晰斑点者判定为阳性。用该方法检测时,副溶血弧菌呈阳性,哈维氏弧菌V.harveyi、嗜水气单胞菌Aerom onas hydrophila、河流弧菌Vf.luvialis biotype、溶藻弧菌V.alginolyticus、大肠杆菌Escherichia coli均呈阴性。斑点ELISA方法不仅具有快速、经济的特点,而且可用肉眼直接判定结果,适合在基层单位应用推广。 展开更多
关键词 斑点elisa 副溶血弧菌 快速检测
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柑桔黄龙病的血清学检测与诊断方法的初步研究 被引量：16
14
作者 李德望 唐伟文 范怀忠 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 1992年第2期16-22,共7页
用提纯的柑桔黄龙病病原(CYSO)免疫小鼠制备出抗体IgG,其浓度与2.7mg/ml,并证明它对CYSO具有特异性,效价测定结果:ELISA达1∶640,间接免疫荧光(IIF)达1∶1 000;斑点(?)联免疫技术(Dot-ELISA)达1∶1280;斑点免疫荧光技术(Dot-IF)达1∶1 2... 用提纯的柑桔黄龙病病原(CYSO)免疫小鼠制备出抗体IgG,其浓度与2.7mg/ml,并证明它对CYSO具有特异性,效价测定结果:ELISA达1∶640,间接免疫荧光(IIF)达1∶1 000;斑点(?)联免疫技术(Dot-ELISA)达1∶1280;斑点免疫荧光技术(Dot-IF)达1∶1 280,检测纯化抗原(?)度,ELISA达1∶256;IIF达1∶4 096,Dot-ILISA达1∶8 192,Dot-IF达1∶32 768。ELISA只能用于检测典型的蕉柑和椪柑病材料,面IIF,dot-ILISA和Dot-IF还可用于甜橙的检测,用4种方法均不能检测出未显症材料的CYSO。 展开更多
关键词 柑桔 黄龙病 血清学 dot-elisa
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Dot-ELISA法同时检测多种食品过敏原的实验研究 被引量：18
15
作者 张在军 毛露甜 +3 位作者 向军俭 邓宁 黄峙 杨红宇 《食品科技》 CAS 北大核心 2005年第4期69-71,73,共4页
通过花生、虾、蛋清过敏原浸液皮下免疫复制小鼠过敏模型,获特异性IgE的小鼠血清进行方法学研究。将不同的过敏原以适当浓度点状吸附于硝酸纤维素膜(NC膜)上,与待检血清作用,再依次与生物素化羊抗鼠IgE第二抗体,亲和素偶联的辣根过氧化... 通过花生、虾、蛋清过敏原浸液皮下免疫复制小鼠过敏模型,获特异性IgE的小鼠血清进行方法学研究。将不同的过敏原以适当浓度点状吸附于硝酸纤维素膜(NC膜)上,与待检血清作用,再依次与生物素化羊抗鼠IgE第二抗体,亲和素偶联的辣根过氧化物酶反应,DAB显色。结果表明:获得了小鼠抗花生、虾、蛋清过敏原高效价特异性IgE血清。Dot-ELISA法各种过敏原最适包被量为2μL(10μg蛋白),待检抗血清最佳稀释度为1∶80,通过肉眼观察NC膜上斑点的显色即可确定待检血清中相应过敏原特异性IgE,且3种过敏原之间无交叉反应性。不同时间同批试剂重复检测结果完全一致,包被过敏原的NC膜4℃可稳定保存3个月。实验初步建立了用含有过敏原特异性IgE的小鼠血清同时检测多种过敏原的Dot-ELISA实验方案,该法简便、特异、稳定、重复性好,可成为食品过敏原鉴定与评价的新方法。 展开更多
关键词 dot-elisa 食品过敏原 特异性IGE
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重庆辣椒上番茄斑萎病毒的血清学检测及分子鉴定 被引量：21
16
作者 孙淼 荆陈沉 +5 位作者 楚成茹 吴根土 孙现超 谢艳 刘勇 青玲 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期487-494,共8页
为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术对采自重庆的298份辣椒病毒病样品进行了检测和分子鉴定。Dot-E... 为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术对采自重庆的298份辣椒病毒病样品进行了检测和分子鉴定。Dot-ELISA检测结果表明,有40份辣椒样品检测到TSWV,检出率为13.42%。通过电子显微镜在TSWV检测呈阳性的样品中观察到具包膜的球状病毒粒体。设计扩增TSWV cp的引物,选取6个TSWV阳性样品进行RT-PCR扩增,均扩增到大小约750 bp的目的片段。序列分析表明,重庆辣椒分离物TSWV-CQ(KX611497)与已报道的22个TSWV分离物cp基因的核苷酸相似性为96.1%~99.4%,与已报道的TSWV中国分离物亲缘关系较近,表现出明显的地理相关性。 展开更多
关键词 辣椒 番茄斑萎病毒 dot-elisa RT-PCR
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间接Dot－ELISA检测猪细小病毒抗原的研究 被引量：9
17
作者 张晓根 甘孟侯 黄喻 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1994年第12期3-5,共3页
本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＰＰＶ抗原对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为２．５ｎｇ／点。ＰＰＶ阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明，该方法对ＰＰＶ抗原的检测具有特异性。以... 本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＰＰＶ抗原对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为２．５ｎｇ／点。ＰＰＶ阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明，该方法对ＰＰＶ抗原的检测具有特异性。以该方法检测ＰＰＶ人工感染兔样本和自然染猪样本，ＰＰＶ抗原的阳性检出率分别为肾样本１００％（１７／１７）、８１．８２％（９１／１１），肝样本１００％（１６／１６）、５６．５２％（１３／２３）。２０份随机样本的间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。 展开更多
关键词 猪细小病毒 elisa 抗原 检测
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免疫斑点法和免疫捕获RT-PCR检测黄瓜绿斑驳花叶病毒 被引量：17
18
作者 尚海丽 周雪平 吴建祥 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期485-490,共6页
黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是葫芦科作物上重要的病毒之一.用提纯的黄瓜绿斑驳花叶病毒免疫新西兰大白兔制备CGMMV的多克隆抗体.该多克隆抗体的间接ELISA效价达1∶512 000,与CGMMV17.5 ku外壳蛋白... 黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是葫芦科作物上重要的病毒之一.用提纯的黄瓜绿斑驳花叶病毒免疫新西兰大白兔制备CGMMV的多克隆抗体.该多克隆抗体的间接ELISA效价达1∶512 000,与CGMMV17.5 ku外壳蛋白有特异性反应,而与烟草花叶病毒、齿兰环斑病毒和健康植物没有任何反应.用ACP-ELISA分析多抗灵敏度表明多抗检测1∶40 960倍稀释的CGMMV病叶时仍呈阳性反应.用该多抗建立了检测CGMMV的免疫斑点法(dot-ELISA)和免疫捕获RT-PCR方法(IC-RT-PCR).病叶汁液可被dot-ELISA检出的最大稀释度为1∶10 240.IC-RT-PCR从感染CGMMV的病叶组织中扩增到与预期大小相同的480 bp DNA条带,且当CGMMV病叶稀释1∶163 840倍时检测仍呈阳性.检测CGMMV的dot-ELISA和IC-RT-PCR方法的建立为该病毒病的诊断和控制提供了技术支撑. 展开更多
关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 多克隆抗体 dot-elisa IC-RT-PCR
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应用dot-ELISA和RT-PCR法检测玉米花粉中玉米矮花叶病毒的研究 被引量：10
19
作者 马占鸿 常胜军 周广和 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期247-249,共3页
首次采用 ｄｏｔＥＬＩＳＡ 和 ＲＴＰＣＲ ２种方法对受玉米矮花叶病毒（Ｍ ＤＭＶ）侵染的玉米品种３３０、４７８、黄早四、获白及Ｍ ｏ１７病株上采得的花粉进行了检测，结果表明２种方法在供试玉米病株花粉中均检测不到Ｍ Ｄ... 首次采用 ｄｏｔＥＬＩＳＡ 和 ＲＴＰＣＲ ２种方法对受玉米矮花叶病毒（Ｍ ＤＭＶ）侵染的玉米品种３３０、４７８、黄早四、获白及Ｍ ｏ１７病株上采得的花粉进行了检测，结果表明２种方法在供试玉米病株花粉中均检测不到Ｍ ＤＭＶ。 展开更多
关键词 玉米 矮花叶病毒 花粉 dot-elisa RT-PCR
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南方水稻黑条矮缩病毒和水稻黑条矮缩病毒的单抗制备及其检测应用 被引量：16
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作者 刘欢 倪跃群 +2 位作者 饶黎霞 吴建祥 周雪平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期27-34,共8页
用与牛血清白蛋白偶联的南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)衣壳蛋白的C端12个氨基酸多肽为抗原免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、筛选、克隆,获得2株能稳定传代并分泌抗SRBSDV和水稻黑条矮缩病毒(Rice ... 用与牛血清白蛋白偶联的南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)衣壳蛋白的C端12个氨基酸多肽为抗原免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、筛选、克隆,获得2株能稳定传代并分泌抗SRBSDV和水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株3F1、5G1。3F1、5G1单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10-6,抗体类型及亚类均为IgG1,kappa链。Western blot分析表明,2株单克隆抗体均与SRBSDV和RBSDV的外壳蛋白亚基有特异反应。利用单克隆抗体3F1建立的dot-ELISA检测方法能准确、特异、灵敏地检测田间稻飞虱及水稻样品中的SRBSDV和RBSDV。SRBSDV和RBSDV单克隆抗体的制备及检测方法的建立为水稻黑条矮缩病的诊断、预测预报及科学防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 南方水稻黑条矮缩病毒 水稻黑条矮缩病毒 多肽 单克隆抗体 dot—elisa
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