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聚合酶链式反应技术在肾综合征出血热病毒基因分型中的应用 被引量:38
1
作者 李盈盈 杭长寿 +1 位作者 刘旭 宋干 《中华实验和临床病毒学杂志》 CSCD 1994年第1期20-25,共6页
用聚合酶链反应(PCR)方法对25株国内外病毒进行分型。病毒RNA逆转录成cDNA后,用Ⅰ型(HAN)和Ⅱ型(R22)两种分型引物进行体外扩增。产物经凝胶电泳、核苷酸序列分析和打点杂交等技术证实其特异性。结果表明,Ⅰ... 用聚合酶链反应(PCR)方法对25株国内外病毒进行分型。病毒RNA逆转录成cDNA后,用Ⅰ型(HAN)和Ⅱ型(R22)两种分型引物进行体外扩增。产物经凝胶电泳、核苷酸序列分析和打点杂交等技术证实其特异性。结果表明,Ⅰ型引物仅扩增野鼠型病毒cDNA;Ⅱ型引物也只扩增家鼠型病毒,无交叉反应。扩增片段的大小与预计一致。两种引物和探针可将25株病毒明确地分为两种基因型,与血清学分型结果完全吻合。 展开更多
关键词 肾综合征 出血热病毒 PCR 基因
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利用斑点杂交法和RT-PCR技术检测甘蔗花叶病毒 被引量:18
2
作者 李利君 周仲驹 谢联辉 《福建农业大学学报》 CSCD 2000年第3期342-345,共4页
利用地高辛标记不同长度的 DNA探针通过斑点杂交法对甘蔗花叶病毒进行检测 .结果表明 ,可检测出2 0 0 mg稀释度为 1/10 4 病叶中的病毒 .但不同长度的探针表现出一定的差异 ,较长的探针显示出较高的灵敏度 .根据克隆所得的病毒基因序列... 利用地高辛标记不同长度的 DNA探针通过斑点杂交法对甘蔗花叶病毒进行检测 .结果表明 ,可检测出2 0 0 mg稀释度为 1/10 4 病叶中的病毒 .但不同长度的探针表现出一定的差异 ,较长的探针显示出较高的灵敏度 .根据克隆所得的病毒基因序列设计特异引物 ,利用反转录 -聚合酶链式反应的方法进行检测 ,同样得到较好的检测效果 ,但灵敏度略低于杂交检测 . 展开更多
关键词 甘蔗花叶病毒 检测 斑点杂交 RT-PCR
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斑点杂交检测对虾白斑综合征病毒青岛株在螯虾体内的动态分布 被引量:6
3
作者 朱建中 夏晓勤 +1 位作者 陆承平 郭福生 《中国病毒学》 CSCD 2001年第1期92-95,共4页
A fragment sized 400bp of White spot syndrome virus(WSSV,formerly designated NOSV),recovered from recombinant plasmid pAFD, was labeled with Digoxigenin as a probe to detect dynamic distribution of WSSV within 120h an... A fragment sized 400bp of White spot syndrome virus(WSSV,formerly designated NOSV),recovered from recombinant plasmid pAFD, was labeled with Digoxigenin as a probe to detect dynamic distribution of WSSV within 120h and 72h in crawfishes( Cambarus proclarkii ) inoculated WSSV by oral taking and injection respectively. Stomach epithelium, intestine epithelium, heart, gill, haemolymph, muscle, hepatopancreas, hypoderm, connective tissue and ovary of infected crawfishes were examined for WSSV. In both groups, WSSV was first detected in heamolymph at 12h p.i. and then disappeared. Again it was detected at 96h p.i. only in oral infection group and maintained till 120h p.i., but it didn’t appear at 72h p.i. in injection group. WSSV in heart, muscle was detected at 36h p.i. in oral infection group and 24h p.i. in injection group respectively, and then increased generally. In addition, WSSV in intestine epithelium, connective tissue, ovary of oral infection group and intestine epithelium, hypoderm, ovary of injection group could also be detected. In dead crawfishes after 120h and 72h p.i. in two groups, WSSV could be detected in all the examined tissues and it demonstrated that systemic infection occurred in the animales. The tissue containing more amounts of WSSV was hypoderm in oral infection group, while intestine epithelium, gill, hypoderm, ovary in injection infection group. It deduced that WSSV first appears in haemolymph and then goes into heart, muscle and other tissues and proliferates in them. Once again, WSSV is released into heamolymph resulting in systemic infection till crawfishes’ death. 展开更多
关键词 白斑综合征病毒 斑点杂交 螯虾 动态分布
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黄鳝单条染色体的显微分离及特异性检测 被引量:6
4
作者 戢福云 余其兴 +3 位作者 郭一清 海燕 周荣家 刘利 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期114-120,共7页
建立了显微分离黄鳝单条染色体及检测其特异性的方法。在Olympus倒置显微镜下用毛细玻璃微针手工分离黄鳝减数分裂Ⅰ终变期 3号染色体 ,将其DNA作模板进行DOP PCR扩增后 ,分别以α-3 2 P dCTP和Biotin 11 dUTP标记的单条染色体DNAPCR扩... 建立了显微分离黄鳝单条染色体及检测其特异性的方法。在Olympus倒置显微镜下用毛细玻璃微针手工分离黄鳝减数分裂Ⅰ终变期 3号染色体 ,将其DNA作模板进行DOP PCR扩增后 ,分别以α-3 2 P dCTP和Biotin 11 dUTP标记的单条染色体DNAPCR扩增产物及Biotin 11 dUTP标记的大豆 18SrRNA基因作探针进行Southern杂交、FISH和Dot杂交来检测其特异性。结果表明 :(1)减数分裂Ⅰ终变期染色体标本是进行染色体显微操作的理想材料 ;(2 )DOP PCR扩增产物片段在 2 0 0~ 10 0 0bp之间 ,平均 6 0 0bp左右 ;(3)杂交结果显示 ,本研究所获得的单条染色体是黄鳝 3号染色体 ;(4 )与显微操作仪和微激光分离相比较 ,该方法不需要昂贵仪器 ,在常规实验室即可操作 。 展开更多
关键词 黄鳝 单条染色体 显微分离 DOP-PCR SOUTHERN杂交 FISH dot杂交 特异性检测
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新疆幼畜和人非典型轮状病毒的调查和鉴定 被引量:7
5
作者 王正党 单文鲁 +2 位作者 黄嘉驷 张福萍 刘明军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期336-341,共6页
自1984至1994年10年间,在新疆采集了绵羊、山羊羔、仔猪、犊牛、骆驼羔和鸡的粪样1959份,以及住院腹泻婴幼儿、无症状新生儿和成人腹泻的粪样255份,共2214份。用PAGE法检测了这些粪样中的轮状病毒和非典型... 自1984至1994年10年间,在新疆采集了绵羊、山羊羔、仔猪、犊牛、骆驼羔和鸡的粪样1959份,以及住院腹泻婴幼儿、无症状新生儿和成人腹泻的粪样255份,共2214份。用PAGE法检测了这些粪样中的轮状病毒和非典型轮状病毒。按Saif电泳型分组法,检出的各组轮状病毒是:A组276份,在成人腹泻和驼羔中未检出;B组26份,都是从羊羔和仔猪中检出;C组22份,都是从仔猪中检出;D组2份,在鸡中检出;似E组1份,从仔猪中检出。取检出的各组非典型轮状病毒9株,即羊羔B组2株(KB-63和LB-60),仔猪B组4株(MPB-1、2,SPB-3、4),仔猪C组2株(SPC-11、ZPC-12),仔猪似E组1株(MPB-5),口服接种剥夺初乳的本种动物,接种后12-16小时动物都发生急性水样腹泻,并检出大量病毒。对这9株病毒和1株成人腹泻轮状病毒(ADRV),用ELISA和对流免疫电泳检测A、B组组抗原,结果ADRV、羊羔B组、仔猪B组和似E组共8株病毒都只有B组组抗原。用A、B组轮状病毒生物素核酸探针斑点杂交分别检测8株和10株病毒,血清学检测为B组者都只与B组有杂交信号。C组的两株则既无A、B组组抗原,也不与A、B? 展开更多
关键词 非典型轮状病毒 轮状病毒 调查
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食管癌及癌旁组织中人乳头状瘤病毒DNA的存在状态 被引量:8
6
作者 李茵 黄光琦 +3 位作者 肖恒怡 黄一峰 毛婷 邓文杰 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 1991年第2期157-160,共4页
作者以人乳头状瘤病毒(HPV)16DNA为探针,采用斑点杂交及Southern分子杂交技术检测24例食管癌及其相应癌旁组织中的HPV16DNA。结果:在食管癌组织中,HPV 16DNA斑点及Southern杂交的阳性率为50%(12/24),癌旁组织为37%(9/24);经Bam H I酶... 作者以人乳头状瘤病毒(HPV)16DNA为探针,采用斑点杂交及Southern分子杂交技术检测24例食管癌及其相应癌旁组织中的HPV16DNA。结果:在食管癌组织中,HPV 16DNA斑点及Southern杂交的阳性率为50%(12/24),癌旁组织为37%(9/24);经Bam H I酶切的食管癌及癌旁组织中,杂交后出现7.2kb的HPV16DNA特异性阳性区带;经Pst I酶切杂交后出现2.7kb、2.3kb、1.75kb、1.18kb四条HPV16DNA阳性区带;未经酶切者来发现阳性杂交带出现。提示人乳头状瘤病毒基因组确实存在于食管癌及癌旁组织DNA中,且多以整合状态存在。 展开更多
关键词 食管肿瘤 乳头状瘤病毒 斑点杂交
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PCR检测犬腺病毒方法的建立 被引量:6
7
作者 扈荣良 黄耕 +2 位作者 林庆年 袁书智 夏咸柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1994年第3期260-263,共4页
利用人工合成的两条引物,对病犬肝脏和细胞培养物冻融上清中的1、2型犬腺病毒DNA进行多聚酶链式反应(PCR)检测;再将扩增产物进行同位素标记,与纯化病毒DNA进行打点杂交。扩增产物经电泳分析结果表明,其大小与设计的引物间的序列大小... 利用人工合成的两条引物,对病犬肝脏和细胞培养物冻融上清中的1、2型犬腺病毒DNA进行多聚酶链式反应(PCR)检测;再将扩增产物进行同位素标记,与纯化病毒DNA进行打点杂交。扩增产物经电泳分析结果表明,其大小与设计的引物间的序列大小基本一致;扩增产物经标记后只与犬腺病毒DNA发生杂交反应,表明其为犬腺病毒特异性核酸片段。 展开更多
关键词 犬腺病毒 打点杂交 聚合酶链反应
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用地高辛标记的核酸探针从尿囊液和组织中检测传染性支气管炎病毒 被引量:4
8
作者 王泽霖 王丽 +2 位作者 闫若潜 钟凯 王新卫 《中国预防兽医学报》 CSCD 2000年第1期64-66,共3页
将IBVT株基因组S1 基因上0.6kb 片段(位于S1 基因上1121bp~1723bp 之间) 克隆到PIBPCRCloning vector 中,用地高辛标记探针,分别与9 株IBV的PCR 产物和12 株IBV 的核酸进行点杂交均呈阳性反应,而该探针不与IBDV和NDV 的RNA,EDS76 ... 将IBVT株基因组S1 基因上0.6kb 片段(位于S1 基因上1121bp~1723bp 之间) 克隆到PIBPCRCloning vector 中,用地高辛标记探针,分别与9 株IBV的PCR 产物和12 株IBV 的核酸进行点杂交均呈阳性反应,而该探针不与IBDV和NDV 的RNA,EDS76 病毒的DNA及正常鸡胚尿囊液的抽提物反应。探针检测IBVPCR产物的灵敏度为100~200pg。用该探针检测不同毒株IBV在鸡胚中的繁殖动态,接种24~30 小时后的的尿囊液均获阳性结果。用M 和宜株混合感染5 日龄雏鸡12 小时能从气管粘液中检出病毒,38~46 小时后能从肾组织中检出病毒。对7 只就诊病鸡的病变肾脏进行杂交检测,有5 只呈阳性反应。核酸杂交技术为生产上提供了直接从尿囊液和感染鸡组织中快速检测病毒,诊断IBV 展开更多
关键词 支气管炎病毒 地高辛标记探针 点杂交 IBV
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大黄素对系膜细胞c-myc原癌基因表达的影响 被引量:6
9
作者 刘志红 黎磊石 +1 位作者 胡伟新 周虹 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 1992年第1期27-30,共4页
为了进一步阐明大黄抑制系膜细胞增殖作用的分子机理。本研究应用斑点杂交技术观察了大黄素对大鼠系膜细胞c-myc原癌基因mRNA表达的影响,发现大黄素能有效地抑制由LPS诱导的系膜细胞c-myc癌基因的过度表达,加大黄素0.5h后c-myc mRNA的... 为了进一步阐明大黄抑制系膜细胞增殖作用的分子机理。本研究应用斑点杂交技术观察了大黄素对大鼠系膜细胞c-myc原癌基因mRNA表达的影响,发现大黄素能有效地抑制由LPS诱导的系膜细胞c-myc癌基因的过度表达,加大黄素0.5h后c-myc mRNA的表达比原有水平降低50%,2.5h后降低75%,一直持续到6h后。该结果表明,大黄素可能通过影响c-myc癌基因表达而参与细胞周期的调控,其对LPS诱导c-myc癌基因mRNA过度表达的负性调节体用,可能是它抑制系膜细胞增殖的机理之一。 展开更多
关键词 大黄素 系膜细胞 原癌基因 C-MYC 斑点杂交
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肉食兽细小病毒核酸探针的制备及其初步应用研究 被引量:6
10
作者 赵永军 童光志 +2 位作者 赵奕 白丽萍 殷震 《兽医大学学报》 CSCD 1990年第1期1-6,共6页
将提纯的貂肠炎病毒(MEV)中间复制型DNA(RF-DNA),以HinaⅡ酶切,回收0.7kbC片段并克隆至质粒pBR322中,构成重组质粒pBM,经转化大肠杆菌RRⅠ并扩增后,提纯pBM,酶切电泳回收克隆的C片段,以[α-32P]dATP标记C片段和pBM,用光生物素标记pBM,... 将提纯的貂肠炎病毒(MEV)中间复制型DNA(RF-DNA),以HinaⅡ酶切,回收0.7kbC片段并克隆至质粒pBR322中,构成重组质粒pBM,经转化大肠杆菌RRⅠ并扩增后,提纯pBM,酶切电泳回收克隆的C片段,以[α-32P]dATP标记C片段和pBM,用光生物素标记pBM,分别制成放射性同位素和光生物素核酸探针。采用打点杂交技术检测了5种肉食兽细小病毒的细胞培养物和非细小病毒科5种病毒的细胞培养物,同时检测了貂和犬的粪便样品33份。结果表明,32P标记的C片段和pBM探针与光生物素际记的pBM探针均具有相同的杂交特异性,与5种肉食兽细小病毒及感染细小病毒的貂、犬粪样呈杂交阳性反应,与其他科病毒及健貂、犬粪样呈阴性。同位素32P和光生物素标记探针分别检出1 pg和10 pg貂肠炎病毒RF-DNA,敏感性比血凝试验分别离100倍和10倍。 展开更多
关键词 肉食兽 细小病毒 核酸探针
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抗氧化维生素对大鼠脂代谢及清道夫受体表达的影响 被引量:1
11
作者 陈彦球 杨燕 +1 位作者 崔永萍 张喜忠 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期254-258,共5页
目的 : 观察不同水平的 VE、VC对 SD大鼠血脂代谢、脂质过氧化和清道夫受体( SR) m RNA表达的作用。方法 : 将诱导成高脂模型的 SD雄性大鼠分为 5个组 ,分别饲以含不同剂量的 VE( 1 5 0 mg/kg diet、35 0 mg/kg diet)、VC( 1 0 0 0 mg... 目的 : 观察不同水平的 VE、VC对 SD大鼠血脂代谢、脂质过氧化和清道夫受体( SR) m RNA表达的作用。方法 : 将诱导成高脂模型的 SD雄性大鼠分为 5个组 ,分别饲以含不同剂量的 VE( 1 5 0 mg/kg diet、35 0 mg/kg diet)、VC( 1 0 0 0 mg/kg diet、2 0 0 0 mg/kg diet)高脂饲料和阳性对照组 8w。结果 :  VE组和 VC组低剂量均可降低血清中 TC、LDL- C、致动脉粥样硬化指数 ( AI)和 Apo- B及脂质过氧化物水平 ,并可升高 HDL- C、HDL - C/LDL- C,同时能抑制肺组织SR- m RNA的表达 ;而增高 VC剂量对上述指标无显著性作用。结论 : VE、VC能降低血清 TC与 LDL- C、抑制 LDL氧化和 SR- m RNA表达。 展开更多
关键词 抗氧化维生素 脂质代射 脂质过氧化 清道夫受体 斑点杂交
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几种动物肉源性成分膜芯片检测方法的建立 被引量:1
12
作者 徐轶飞 王泽祥 +5 位作者 赵禹 马永华 李羽翡 李涛善 曲志强 孙晓林 《动物医学进展》 北大核心 2023年第3期73-76,共4页
用斑点杂交技术构建对牛、羊、鸭肉源性成分快速检测的膜芯片方法。在3种动物的线粒体细胞色素b基因上设计特异性引物,对3种动物基因组进行PCR扩增,扩增产物用地高辛进行标记,作为标记探针。将3种动物PCR扩增产物固定到尼龙膜上,再选取... 用斑点杂交技术构建对牛、羊、鸭肉源性成分快速检测的膜芯片方法。在3种动物的线粒体细胞色素b基因上设计特异性引物,对3种动物基因组进行PCR扩增,扩增产物用地高辛进行标记,作为标记探针。将3种动物PCR扩增产物固定到尼龙膜上,再选取3种常见动物作为参照,将其扩增产物一并固定到尼龙膜上。将制作好的膜芯片与标记探针进行斑点杂交试验,来检验标记探针的标记效率和特异性。试验结果表明,标记探针在1 pg/μL浓度下显点清晰可见;3种标记探针分别与6种动物源性扩增产物杂交,结果标记探针只与其对应扩增源性产物发生显点。证明研究设计的膜芯片标记探针具有灵敏度高、特异性强的特点,符合膜芯片检测要求,从而成功构建了一种快速检测牛、羊、鸭3种动物肉源性的膜芯片方法,同时也为动物源性成分检测提供新的依据。 展开更多
关键词 细胞色素B基因 斑点杂交 标记探针 灵敏性 特异性 膜芯片
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引物长度不对称PCR技术制备单链DNA探针 被引量:4
13
作者 彭晓谋 顾琳 +2 位作者 陈雪娟 黄仰甦 高志良 《中国实验诊断学》 2002年第4期206-208,共3页
目的 建立引物长度不对称PCR制备单链DNA探针技术 ,评价单链探针进行斑点杂交的优越性。方法 设计 1对引物 ,其中 1条引物长度为 34bp ,复性温度为 75 2℃ ,另 1条为 2 0bp ,复性温度为 5 5 7℃。首先以 5 2℃的复性温度进行双向对... 目的 建立引物长度不对称PCR制备单链DNA探针技术 ,评价单链探针进行斑点杂交的优越性。方法 设计 1对引物 ,其中 1条引物长度为 34bp ,复性温度为 75 2℃ ,另 1条为 2 0bp ,复性温度为 5 5 7℃。首先以 5 2℃的复性温度进行双向对数扩增 ,获得一定数量的双链DNA ,再以 72℃的复性温度进行单向扩增 ,获得单链DNA片段。以含HBVS基因片段的质粒为模板 ,在PCR体系中加入地高辛标记核苷酸直接制备探针 ,并收集 4 0份乙型肝炎患者的血清进行斑点杂交检测。结果 采用引物长度不对称PCR可成功地制备出单链探针且重复性好。对 4 0份乙型肝炎患者血清进行斑点杂交检测 ,HBVDNA检出率为 4 0 %。双链探针和单链探针的检出率一样 ,但单链探针的斑点更清晰 ,背景更好。结论 引物长度不对称PCR可能成为制备单链DNA片段或探针的简便而有效方法。单链探针具有高效和简便特点 。 展开更多
关键词 单链 DNA探针 聚合酶链反应 斑点杂交 分子生物学
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冬虫夏草对体外培养肾小管细胞TGF-β及癌基因c-myc mRNA表达的影响 被引量:3
14
作者 郑丰 黎磊石 +1 位作者 刘志红 周虹 《医学研究生学报》 CAS 1993年第2期143-146,共4页
本研究应用分子生物学技术观察了冬虫夏草对体外培养肾小管细胞c-myc原癌基因和TGF-β基因mRNA表达的影响。结果发现,冬虫夏草可诱导肾小管细胞c-myc原癌基因mRNA持续高表达。此外,冬虫夏草对TGF-β基因表达也有增强作用。冬虫夏草可能... 本研究应用分子生物学技术观察了冬虫夏草对体外培养肾小管细胞c-myc原癌基因和TGF-β基因mRNA表达的影响。结果发现,冬虫夏草可诱导肾小管细胞c-myc原癌基因mRNA持续高表达。此外,冬虫夏草对TGF-β基因表达也有增强作用。冬虫夏草可能通过诱导c-myc原癌基因和TGF-β基因表达机理促进肾小管细胞生长。 展开更多
关键词 冬虫夏草 肾小管细胞 原癌基因C-MYC 转化生长因子-Β 斑点杂交
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A组轮状病毒结构蛋白基因在马铃薯细胞中的初步表达 被引量:5
15
作者 王明忠 朱进 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期204-207,共4页
目的 在马铃薯细胞中表达轮状病毒结构蛋白。方法 采用RT PCR扩增截短VP4 蛋白基因 ,克隆于植物表达载体pBI2 2 1,再双酶切pBI2 2 1,将带有CaMV35S启动子、外源基因及终止子的片段转入pSB11,通过三亲杂交方法 ,制备农杆菌转化载体pSB1... 目的 在马铃薯细胞中表达轮状病毒结构蛋白。方法 采用RT PCR扩增截短VP4 蛋白基因 ,克隆于植物表达载体pBI2 2 1,再双酶切pBI2 2 1,将带有CaMV35S启动子、外源基因及终止子的片段转入pSB11,通过三亲杂交方法 ,制备农杆菌转化载体pSB111 VP4 ,并对pSB111 VP4 作点杂交检测 ,筛选鉴定重组子 ,对马铃薯组织细胞进行转化。结果 转化细胞经Western印迹检测其免疫活性 ,具有良好的抗原性。结论 为研制轮状病毒重组疫苗、亚单组疫苗。 展开更多
关键词 轮状病毒外壳蛋白 转化载体 点杂交检测 westem印迹
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异羟基洋地黄毒甙元核酸探针对马立克氏病毒 DNA 的检测 被引量:4
16
作者 李光富 陈溥言 蔡宝祥 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期85-88,共4页
应用异羟基洋地黄毒甙元(digoxigcnin)标记的 DNA 探针,检测了细胞培养物和鸡羽髓中提取的马立克氏病毒(MDV)核酸.结果发现,异羟基洋地黄毒甙元标记的马立克氏病毒血清 I 型(GA 株)核酸的BamHI-L 片段探针,只与马立克氏病毒Ⅰ型核酸发... 应用异羟基洋地黄毒甙元(digoxigcnin)标记的 DNA 探针,检测了细胞培养物和鸡羽髓中提取的马立克氏病毒(MDV)核酸.结果发现,异羟基洋地黄毒甙元标记的马立克氏病毒血清 I 型(GA 株)核酸的BamHI-L 片段探针,只与马立克氏病毒Ⅰ型核酸发生杂交,而不与Ⅱ型(SB-1)或Ⅲ型(HVT)发生杂交.对36份鸡羽髓病料提取的病毒核酸的杂交检测与琼扩试验相比较,前者阳性率为94.4%,后者仅为86.1%.由此说明,Ⅰ型病毒的核酸探针可用于区别强毒株和 HVT 疫苗毒株,并可作为马立克氏病的临床检测的有效手段. 展开更多
关键词 马立克氏病毒 鸡病 异羟基洋地黄
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RT-PCR和核酸探针在IBV检测中的应用 被引量:3
17
作者 王泽霖 王丽 +2 位作者 闫若潜 钟凯 金亚美 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 1998年第4期339-344,共6页
用PCR和核酸探针杂交检测了3种毒株(H120株,M41株,HK株)在鸡胚中的繁殖动态及人工感染鸡和自然感鸡气管粘液及肾组织内的IBV.结果表明:在鸡胚中繁殖3种毒株IBV(H120,HK,M41),PCR最早检出时... 用PCR和核酸探针杂交检测了3种毒株(H120株,M41株,HK株)在鸡胚中的繁殖动态及人工感染鸡和自然感鸡气管粘液及肾组织内的IBV.结果表明:在鸡胚中繁殖3种毒株IBV(H120,HK,M41),PCR最早检出时间为20~24h,克隆探针最早检出时间为24~30h;用克隆核酸探针检测人工感染鸡,12h后能从肾脏中检出病毒。对7只就诊鸡的病变肾脏进行杂交检测和PCR扩增,有5只均呈阳性反应。IBV分离株HK株与标准株M41株经PCR扩增、HaeⅢ和HindⅢ酶切及RFLP分析,表明其属同一马萨诸塞血清型。PCR和核酸杂交技术为生产上提供了直接从尿囊液和感染鸡组织中快速检测IBV病毒及诊断IBV的新方法,对IBV的血清定型也有一定的实用价值。 展开更多
关键词 传染性 支气管炎病毒 点杂交 RT-PCR IBV
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冬虫夏草促进肾小管细胞增殖与c-myc原癌基因表达的联系 被引量:3
18
作者 郑丰 黎磊石 +2 位作者 刘志红 周虹 沈克勤 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 1993年第1期21-23,共3页
为阐明冬虫夏草刺激肾小管细胞增殖的分子机理,本研究应用斑点杂交技术观察了冬虫夏草对肾小管上皮细胞c-myc原癌基因mRNA表达的影响,结果发现冬虫夏草可诱导肾小管细胞c-myc原癌基因高表达,冬虫夏草可能通过这一机理促进肾小管上皮细... 为阐明冬虫夏草刺激肾小管细胞增殖的分子机理,本研究应用斑点杂交技术观察了冬虫夏草对肾小管上皮细胞c-myc原癌基因mRNA表达的影响,结果发现冬虫夏草可诱导肾小管细胞c-myc原癌基因高表达,冬虫夏草可能通过这一机理促进肾小管上皮细胞增殖。 展开更多
关键词 冬虫夏草 肾小管 上皮细胞 原癌基因 C-MYC 斑点杂交
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裂变中子诱导小鼠胸腺细胞凋亡的时间效应及其分子机制初探 被引量:3
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作者 苑宾 孙建民 +4 位作者 侯春梅 刘洪涛 薛文成 李梁 王宝勤 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2000年第3期184-187,共4页
目的 :以60 Coγ射线为参比射线 ,研究裂变中子诱导小鼠胸腺细胞凋亡的时间效应 ,并初步探讨其分子机制。方法 :用形态学观察、DNA电泳、流式细胞仪 (FCM )分析及二苯胺 (DPA)法检测细胞凋亡 ;用斑点杂交方法检测 p53与bcl 2的基因表达... 目的 :以60 Coγ射线为参比射线 ,研究裂变中子诱导小鼠胸腺细胞凋亡的时间效应 ,并初步探讨其分子机制。方法 :用形态学观察、DNA电泳、流式细胞仪 (FCM )分析及二苯胺 (DPA)法检测细胞凋亡 ;用斑点杂交方法检测 p53与bcl 2的基因表达。 结果 :小鼠经裂变中子 2 .5Gy照射后 2~ 2 4h ,在各时间点上均检测到胸腺细胞DNA梯状条带 ,利用光镜与电镜观察到具有典型凋亡特征的胸腺细胞 ;以DPA法、FCM分析与形态观察计数测定的结果 ,绘制时间效应曲线 ,发现胸腺细胞凋亡比例随着照射时间的延长而增加 ,在 6h前上升较快 ,8~ 10h达到峰值 ,12h后开始下降 ,2 4h较 4~ 12h明显降低 (P <0 .0 5) ,但略高于正常水平。γ射线 5.0Gy照射后 ,胸腺细胞凋亡比例随时间的变化规律与之相似 ,但在 6h之前增加较缓 ;此外 ,在照后 2 4h检测不到DNA梯状条带。裂变中子 2 .5Gy照射后 ,小鼠胸腺细胞 p53基因表达水平在 2、4、12、2 4h均比未照射组有显著增加 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;bcl 2基因表达水平均比未照射组明显降低 (P <0 .0 1)。结论 :裂变中子 2 .5Gy照射小鼠可诱导其胸腺细胞凋亡 ,且与γ射线 5.0Gy照射有类似的时相性 ,但裂变中子诱导的胸腺细胞凋亡比γ射线增加快、持续时间长 。 展开更多
关键词 裂变中子 胸腺细胞 细胞凋亡 时间效应 斑点杂交
原文传递
转基因轮状病毒疫苗植物表达载体的构建及GUS基因表达 被引量:3
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作者 朱进 张云 +4 位作者 唐家琪 李先富 郭恒彬 李喜文 李彦舫 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2001年第10期873-874,共2页
目的 选用植物细胞表达轮状病毒结构蛋白 ,拟构建有效植物细胞表达系统。方法 利用PT -PCR扩增A组轮状病毒外壳蛋白VP4基因片段 ,经双酶切后与植物表达载体连接 ,转化感受态细菌TG1。利用地高辛标记探针进行斑点杂交检测 ,筛选出阳性... 目的 选用植物细胞表达轮状病毒结构蛋白 ,拟构建有效植物细胞表达系统。方法 利用PT -PCR扩增A组轮状病毒外壳蛋白VP4基因片段 ,经双酶切后与植物表达载体连接 ,转化感受态细菌TG1。利用地高辛标记探针进行斑点杂交检测 ,筛选出阳性克隆 ,拟用该克隆转化马铃薯细胞 ,研制新型轮状病毒疫苗。本研究还利用 β -葡萄糖苷酸酶 (GUS)基因转化马铃薯细胞。结果 A组轮状病毒SA11株VP4基因产物大小与设计相同 ,为 96 0bp。在被检测的未知载体中 ,有四个显紫色斑 ,可判定其为带有VP4cDNA的转化载体。用肉眼或显微镜可观察到马铃薯组织细胞中的蓝色物质。结论在转基因植物组织器官中观察到GUS的活性 ,获得外源基因转化的条件。拟用本研究构建的表达载体转化马铃薯细胞 ,研制新型轮状病毒疫苗。 展开更多
关键词 轮状病毒疫苗 基因转化 斑点杂交 GUS
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