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Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞增殖的抑制作用
被引量：
3
1
作者
张菁
丁小凤
+2 位作者
罗畅
张健
彭小宁
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第1期37-43,共7页
小鼠睾丸生殖细胞瘤易感基因Dnd1编码的蛋白是一个在进化中保守的RNA结合蛋白.为探讨小鼠Dnd1的蛋白亚细胞定位和对细胞增殖的影响及其机制,利用生物信息学技术,采用组合的亚细胞定位分析软件对Dnd1进行真核生物亚细胞定位预测;利用融...
小鼠睾丸生殖细胞瘤易感基因Dnd1编码的蛋白是一个在进化中保守的RNA结合蛋白.为探讨小鼠Dnd1的蛋白亚细胞定位和对细胞增殖的影响及其机制,利用生物信息学技术,采用组合的亚细胞定位分析软件对Dnd1进行真核生物亚细胞定位预测;利用融合绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)定位的方法,通过构建pEGFP-Dnd1重组质粒,将重组质粒pEGFP-Dnd1转染HeLa细胞和GC-1细胞,在荧光显微镜下观察Dnd1的蛋白亚细胞定位;用MTT法和流式细胞技术测定Dnd1过表达对HeLa细胞的增殖能力的影响和细胞周期的改变;在HeLa细胞系中检测Dnd1对AP-1转录活性的影响.结果表明:①生物信息学预测Dnd1主要在细胞核表达,在细胞质中也有少量表达;荧光显微镜下观察发现,Dnd1蛋白主要定位在细胞核,在细胞质中也有少量分布;②Dnd1基因在HeLa细胞系中的过表达抑制细胞增殖和诱导细胞周期G1期阻滞;③Dnd1抑制AP-1的转录活性,从而抑制AP-1介导的转录是Dnd1抑制细胞增殖的可能机制.本研究初步明确了Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞的生长抑制作用,这为进一步研究Dnd1基因的功能建立基础.
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关键词
dnd
1
基因
绿色荧光蛋白
睾丸生殖细胞瘤
细胞增殖
下载PDF
职称材料
Dnd1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
被引量：
2
2
作者
李顺东
于淼
+4 位作者
张勇
邓来
谭宇婷
程洁
彭小宁
《湖南师范大学学报（医学版）》
2011年第3期12-15,共4页
目的:构建小鼠Dnd1基因的RNAi慢病毒载体。方法:针对小鼠Dnd1基因RNAi设计有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA。退火形成双链DNA,与经Age I和EcoR I酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生短发卡RNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。结果:...
目的:构建小鼠Dnd1基因的RNAi慢病毒载体。方法:针对小鼠Dnd1基因RNAi设计有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA。退火形成双链DNA,与经Age I和EcoR I酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生短发卡RNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。结果:PCR鉴定与DNA测序证实合成的含Dnd1sh RNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。结论:成功构建小鼠Dnd1基因的RNAi慢病毒载体。
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关键词
dnd
1
基因
慢病毒载体
RNA干扰
原文传递
小鼠Dnd1酵母双杂交系统诱饵载体的构建及自身激活检测
被引量：
1
3
作者
张菁
罗畅
+2 位作者
丁小凤
张健
彭小宁
《湖南师范大学学报（医学版）》
2008年第1期1-4,共4页
目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其是否有自身激活作用。方法:设计引物引入SalⅠ、NotⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,连至pMD18-T载体。酶切验证及测序正确后,用...
目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其是否有自身激活作用。方法:设计引物引入SalⅠ、NotⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,连至pMD18-T载体。酶切验证及测序正确后,用SalⅠ,NotⅠ内切酶分别消化pMD-T-Dnd1及pDBLeu载体而后构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其在G IBCO/BRL公司的酵母双杂交系统中的自身激活作用。结果:成功构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并证明其在该系统中无自身激活作用。结论:pDBLeu-Dnd1可应用该酵母双杂交系统筛选与之相互作用的蛋白。
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关键词
dnd
1
基因
酵母双杂交系统
自身激活作用
原文传递
Dnd1慢病毒表达载体的制备及鉴定
4
作者
于淼
李顺东
+1 位作者
王光伟
彭小宁
《湖南师范大学学报（医学版）》
2009年第4期1-4,8,共5页
目的:构建小鼠Dnd1慢病毒表达载体,以期在哺乳动物细胞中高效、稳定表达。方法:设计引物引入AgeⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,对所扩增出的目的片段回收纯化。用In-Fusion技术将AgeⅠ内切...
目的:构建小鼠Dnd1慢病毒表达载体,以期在哺乳动物细胞中高效、稳定表达。方法:设计引物引入AgeⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,对所扩增出的目的片段回收纯化。用In-Fusion技术将AgeⅠ内切酶消化后目的片段交换连接入AgeI酶切的pGC-FU载体,构建Dnd1慢病毒表达载体pGC-FU-Dnd1。酶切验证并测序正确后,将质粒pGC-FU-Dnd1与慢病毒辅助包装载体共转染293T细胞,Western-blot验证Dnd1在转染293T细胞中表达。结果:通过PCR扩增获得了Dnd1基因,将Dnd1克隆到慢病毒转移质粒pGC-FU中,并在293T细胞中包装产生慢病毒颗粒。结论:成功构建了Dnd1慢病毒表达载体,为进一步从分子水平探讨Dnd1功能奠定了基础。
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关键词
dnd
1
基因
慢病毒载体
293T细胞
原文传递
题名
Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞增殖的抑制作用
被引量：
3
1
作者
张菁
丁小凤
罗畅
张健
彭小宁
机构
湖南师范大学医学院
湖南师范大学生命科学学院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第1期37-43,共7页
基金
湖南省自然科学基金(No.07JJ6059)
湖南师范大学优秀青年基金资助项目(No.070626)~~
文摘
小鼠睾丸生殖细胞瘤易感基因Dnd1编码的蛋白是一个在进化中保守的RNA结合蛋白.为探讨小鼠Dnd1的蛋白亚细胞定位和对细胞增殖的影响及其机制,利用生物信息学技术,采用组合的亚细胞定位分析软件对Dnd1进行真核生物亚细胞定位预测;利用融合绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)定位的方法,通过构建pEGFP-Dnd1重组质粒,将重组质粒pEGFP-Dnd1转染HeLa细胞和GC-1细胞,在荧光显微镜下观察Dnd1的蛋白亚细胞定位;用MTT法和流式细胞技术测定Dnd1过表达对HeLa细胞的增殖能力的影响和细胞周期的改变;在HeLa细胞系中检测Dnd1对AP-1转录活性的影响.结果表明:①生物信息学预测Dnd1主要在细胞核表达,在细胞质中也有少量表达;荧光显微镜下观察发现,Dnd1蛋白主要定位在细胞核,在细胞质中也有少量分布;②Dnd1基因在HeLa细胞系中的过表达抑制细胞增殖和诱导细胞周期G1期阻滞;③Dnd1抑制AP-1的转录活性,从而抑制AP-1介导的转录是Dnd1抑制细胞增殖的可能机制.本研究初步明确了Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞的生长抑制作用,这为进一步研究Dnd1基因的功能建立基础.
关键词
dnd
1
基因
绿色荧光蛋白
睾丸生殖细胞瘤
细胞增殖
Keywords
dnd
l
green fluorescent protein
testicular germ cell tumour
cell proliferation
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
Dnd1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
被引量：
2
2
作者
李顺东
于淼
张勇
邓来
谭宇婷
程洁
彭小宁
机构
长沙市第三医院
湖南师范大学医学院
中南大学湘雅二医院
出处
《湖南师范大学学报（医学版）》
2011年第3期12-15,共4页
基金
长沙市科技计划资助项目(k0802084-31)
文摘
目的:构建小鼠Dnd1基因的RNAi慢病毒载体。方法:针对小鼠Dnd1基因RNAi设计有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA。退火形成双链DNA,与经Age I和EcoR I酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生短发卡RNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。结果:PCR鉴定与DNA测序证实合成的含Dnd1sh RNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。结论:成功构建小鼠Dnd1基因的RNAi慢病毒载体。
关键词
dnd
1
基因
慢病毒载体
RNA干扰
Keywords
dnd
1
lentiviral vector
RNAi
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
小鼠Dnd1酵母双杂交系统诱饵载体的构建及自身激活检测
被引量：
1
3
作者
张菁
罗畅
丁小凤
张健
彭小宁
机构
湖南师范大学医学院
湖南师范大学生命科学学院基因敲除与转基因动物实验室
出处
《湖南师范大学学报（医学版）》
2008年第1期1-4,共4页
基金
教育部留学归国人员资助项目〔2005(383)〕
文摘
目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其是否有自身激活作用。方法:设计引物引入SalⅠ、NotⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,连至pMD18-T载体。酶切验证及测序正确后,用SalⅠ,NotⅠ内切酶分别消化pMD-T-Dnd1及pDBLeu载体而后构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其在G IBCO/BRL公司的酵母双杂交系统中的自身激活作用。结果:成功构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并证明其在该系统中无自身激活作用。结论:pDBLeu-Dnd1可应用该酵母双杂交系统筛选与之相互作用的蛋白。
关键词
dnd
1
基因
酵母双杂交系统
自身激活作用
Keywords
dnd
1
gene
yeast two-hybrid system
self-activation
分类号
R [医药卫生]
原文传递
题名
Dnd1慢病毒表达载体的制备及鉴定
4
作者
于淼
李顺东
王光伟
彭小宁
机构
湖南师范大学医学院
长沙市第三医院
出处
《湖南师范大学学报（医学版）》
2009年第4期1-4,8,共5页
基金
湖南师范大学青年优秀人才培养计划(No.070626)
长沙市科技计划资助(No.k0802084-31)
文摘
目的:构建小鼠Dnd1慢病毒表达载体,以期在哺乳动物细胞中高效、稳定表达。方法:设计引物引入AgeⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,对所扩增出的目的片段回收纯化。用In-Fusion技术将AgeⅠ内切酶消化后目的片段交换连接入AgeI酶切的pGC-FU载体,构建Dnd1慢病毒表达载体pGC-FU-Dnd1。酶切验证并测序正确后,将质粒pGC-FU-Dnd1与慢病毒辅助包装载体共转染293T细胞,Western-blot验证Dnd1在转染293T细胞中表达。结果:通过PCR扩增获得了Dnd1基因,将Dnd1克隆到慢病毒转移质粒pGC-FU中,并在293T细胞中包装产生慢病毒颗粒。结论:成功构建了Dnd1慢病毒表达载体,为进一步从分子水平探讨Dnd1功能奠定了基础。
关键词
dnd
1
基因
慢病毒载体
293T细胞
Keywords
dnd
1
lentiviral vector
293Tcells
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞增殖的抑制作用
张菁
丁小凤
罗畅
张健
彭小宁
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
下载PDF
职称材料
2
Dnd1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
李顺东
于淼
张勇
邓来
谭宇婷
程洁
彭小宁
《湖南师范大学学报（医学版）》
2011
2
原文传递
3
小鼠Dnd1酵母双杂交系统诱饵载体的构建及自身激活检测
张菁
罗畅
丁小凤
张健
彭小宁
《湖南师范大学学报（医学版）》
2008
1
原文传递
4
Dnd1慢病毒表达载体的制备及鉴定
于淼
李顺东
王光伟
彭小宁
《湖南师范大学学报（医学版）》
2009
0
原文传递
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