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The Role of Cyclic Nucleotide-Gated Ion Channels in Plant Immunity 被引量:14
1
作者 Wolfgang Moeder William Urquhart +1 位作者 Huoi Ung Keiko Yoshioka 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2011年第3期442-452,共11页
Since the first plant cyclic nucleotide-gated ion channel (CNGC), HvCBT1, was identified as a calmodulin bind- ing protein, more than a decade has passed and a substantial amount of work has been done to understand ... Since the first plant cyclic nucleotide-gated ion channel (CNGC), HvCBT1, was identified as a calmodulin bind- ing protein, more than a decade has passed and a substantial amount of work has been done to understand the molecular nature and function of these channel proteins. Based on electrophysiological and heterologous expression analyses, plant CNGCs function as non-selective cation channels and, so far, their biological roles have been reported in defense responses, development, and ion homeostasis. Forward genetic approaches identified four AtCNGCs (AtCNGC2, 4, 11, and 12) to be involved in plant immunity, as null mutants for AtCNGC2, 4, 11, and 12 as well as a gain-of- function mutant for AtCNGC11 and 12 exhibited alterations in defense responses. Since ion flux changes have been reported as one of the early events upon pathogen recognition and also are an essential component for the activation of defense responses, the involvement of CNGCs in these ion flux changes has been suggested. However, the recent detailed characterization of null mutants suggested a more complex involvement of this channel family. In this review, we focus on the discoveries and character- ization of these CNGC mutants and discuss possible roles of CNGCs as components in plant immunity. 展开更多
关键词 CNGC cyclic nucleotide-gated ion channel plant immunity dnd1 dnd2 HLM1 CPR22 ED51.
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用酵母双杂交技术筛选DND1相互作用蛋白(英文) 被引量:1
2
作者 张菁 李顺东 +2 位作者 张勇 杨智 彭小宁 《湖南师范大学学报(医学版)》 2011年第2期9-12,共4页
目的:小鼠睾丸生殖细胞瘤易感蛋白DND1是在进化中保守的RNA结合蛋白。为了进一步了解DND1的功能,我们筛选了与DND1相互作用的蛋白。方法:采用酵母双杂交系统,用Dnd1基因编码序列构建诱饵载体筛选小鼠10.5天的胚胎文库。结果:筛选小鼠胚... 目的:小鼠睾丸生殖细胞瘤易感蛋白DND1是在进化中保守的RNA结合蛋白。为了进一步了解DND1的功能,我们筛选了与DND1相互作用的蛋白。方法:采用酵母双杂交系统,用Dnd1基因编码序列构建诱饵载体筛选小鼠10.5天的胚胎文库。结果:筛选小鼠胚胎cDNA文库得到4个与DND1相互作用蛋白,分别为Jun蛋白、辅肌动蛋白α、核受体结合蛋白和氯离子通道2。结论:DND1可能参与调节细胞増殖、迁移及细胞转化等过程。 展开更多
关键词 酵母双杂交 dnd1 相互作用蛋白 TGCT
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睾丸生殖细胞瘤易感基因Dnd1互作蛋白质的筛选与鉴定 被引量:1
3
作者 张菁 罗畅 +2 位作者 丁小凤 张健 彭小宁 《自然科学进展》 北大核心 2008年第12期1500-1506,共7页
小鼠睾丸生殖细胞瘤(testicular germ cell tumour,TGCT)易感基因Dnd1属于RNA结合蛋白基因家族成员.Dnd1在进化中具有保守性,Dnd1缺乏导致小鼠原始生殖细胞(primordialgerm cell,PGC)的丧失、TGCT的发生和部分胚胎死亡,但Dnd1作用机制... 小鼠睾丸生殖细胞瘤(testicular germ cell tumour,TGCT)易感基因Dnd1属于RNA结合蛋白基因家族成员.Dnd1在进化中具有保守性,Dnd1缺乏导致小鼠原始生殖细胞(primordialgerm cell,PGC)的丧失、TGCT的发生和部分胚胎死亡,但Dnd1作用机制还未明了.利用酵母双杂交系统,构建小鼠Dnd1基因诱饵载体pDBLeu-Dnd1,筛选10.5 d的小鼠胚胎cDNA文库,成功筛选到4个与Dnd1相互作用蛋白,其中之一为原癌基因Jun蛋白;进一步的酵母双杂交实验和GST pull down实验再次确认Dnd1与Jun蛋白之间的相互作用.研究发现Dnd1新的相互作用蛋白,这为探明其信号传导通路及Dnd1致病机制研究建立了基础. 展开更多
关键词 酵母双杂交系统 dnd1 蛋白质相互作用 睾丸生殖细胞瘤
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Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞增殖的抑制作用 被引量:3
4
作者 张菁 丁小凤 +2 位作者 罗畅 张健 彭小宁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期37-43,共7页
小鼠睾丸生殖细胞瘤易感基因Dnd1编码的蛋白是一个在进化中保守的RNA结合蛋白.为探讨小鼠Dnd1的蛋白亚细胞定位和对细胞增殖的影响及其机制,利用生物信息学技术,采用组合的亚细胞定位分析软件对Dnd1进行真核生物亚细胞定位预测;利用融... 小鼠睾丸生殖细胞瘤易感基因Dnd1编码的蛋白是一个在进化中保守的RNA结合蛋白.为探讨小鼠Dnd1的蛋白亚细胞定位和对细胞增殖的影响及其机制,利用生物信息学技术,采用组合的亚细胞定位分析软件对Dnd1进行真核生物亚细胞定位预测;利用融合绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)定位的方法,通过构建pEGFP-Dnd1重组质粒,将重组质粒pEGFP-Dnd1转染HeLa细胞和GC-1细胞,在荧光显微镜下观察Dnd1的蛋白亚细胞定位;用MTT法和流式细胞技术测定Dnd1过表达对HeLa细胞的增殖能力的影响和细胞周期的改变;在HeLa细胞系中检测Dnd1对AP-1转录活性的影响.结果表明:①生物信息学预测Dnd1主要在细胞核表达,在细胞质中也有少量表达;荧光显微镜下观察发现,Dnd1蛋白主要定位在细胞核,在细胞质中也有少量分布;②Dnd1基因在HeLa细胞系中的过表达抑制细胞增殖和诱导细胞周期G1期阻滞;③Dnd1抑制AP-1的转录活性,从而抑制AP-1介导的转录是Dnd1抑制细胞增殖的可能机制.本研究初步明确了Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞的生长抑制作用,这为进一步研究Dnd1基因的功能建立基础. 展开更多
关键词 dnd1基因 绿色荧光蛋白 睾丸生殖细胞瘤 细胞增殖
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Dnd1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定 被引量:2
5
作者 李顺东 于淼 +4 位作者 张勇 邓来 谭宇婷 程洁 彭小宁 《湖南师范大学学报(医学版)》 2011年第3期12-15,共4页
目的:构建小鼠Dnd1基因的RNAi慢病毒载体。方法:针对小鼠Dnd1基因RNAi设计有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA。退火形成双链DNA,与经Age I和EcoR I酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生短发卡RNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。结果:... 目的:构建小鼠Dnd1基因的RNAi慢病毒载体。方法:针对小鼠Dnd1基因RNAi设计有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA。退火形成双链DNA,与经Age I和EcoR I酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生短发卡RNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。结果:PCR鉴定与DNA测序证实合成的含Dnd1sh RNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。结论:成功构建小鼠Dnd1基因的RNAi慢病毒载体。 展开更多
关键词 dnd1基因 慢病毒载体 RNA干扰
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小鼠Dnd1酵母双杂交系统诱饵载体的构建及自身激活检测 被引量:1
6
作者 张菁 罗畅 +2 位作者 丁小凤 张健 彭小宁 《湖南师范大学学报(医学版)》 2008年第1期1-4,共4页
目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其是否有自身激活作用。方法:设计引物引入SalⅠ、NotⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,连至pMD18-T载体。酶切验证及测序正确后,用... 目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其是否有自身激活作用。方法:设计引物引入SalⅠ、NotⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,连至pMD18-T载体。酶切验证及测序正确后,用SalⅠ,NotⅠ内切酶分别消化pMD-T-Dnd1及pDBLeu载体而后构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其在G IBCO/BRL公司的酵母双杂交系统中的自身激活作用。结果:成功构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并证明其在该系统中无自身激活作用。结论:pDBLeu-Dnd1可应用该酵母双杂交系统筛选与之相互作用的蛋白。 展开更多
关键词 dnd1基因 酵母双杂交系统 自身激活作用
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Dnd1慢病毒表达载体的制备及鉴定
7
作者 于淼 李顺东 +1 位作者 王光伟 彭小宁 《湖南师范大学学报(医学版)》 2009年第4期1-4,8,共5页
目的:构建小鼠Dnd1慢病毒表达载体,以期在哺乳动物细胞中高效、稳定表达。方法:设计引物引入AgeⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,对所扩增出的目的片段回收纯化。用In-Fusion技术将AgeⅠ内切... 目的:构建小鼠Dnd1慢病毒表达载体,以期在哺乳动物细胞中高效、稳定表达。方法:设计引物引入AgeⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,对所扩增出的目的片段回收纯化。用In-Fusion技术将AgeⅠ内切酶消化后目的片段交换连接入AgeI酶切的pGC-FU载体,构建Dnd1慢病毒表达载体pGC-FU-Dnd1。酶切验证并测序正确后,将质粒pGC-FU-Dnd1与慢病毒辅助包装载体共转染293T细胞,Western-blot验证Dnd1在转染293T细胞中表达。结果:通过PCR扩增获得了Dnd1基因,将Dnd1克隆到慢病毒转移质粒pGC-FU中,并在293T细胞中包装产生慢病毒颗粒。结论:成功构建了Dnd1慢病毒表达载体,为进一步从分子水平探讨Dnd1功能奠定了基础。 展开更多
关键词 dnd1基因 慢病毒载体 293T细胞
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