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天麻二羧酸-三羧酸盐载体蛋白基因的克隆及功能初探 被引量：1
1
作者 赵建豪 陈虞超 +4 位作者 华中一 刘天睿 赵玉洋 黄璐琦 袁媛 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期3140-3148,共9页
基于天麻转录组数据,设计特异性引物,克隆天麻二羧酸-三羧酸载体蛋白编码基因GeDTC,并利用ExPASy、ClustalW、MEGA等软件对其进行生物信息学分析,利用马铃薯遗传转化体系,获得阳性转基因植株和微型薯,并对微型薯块茎的大小、质量、有机... 基于天麻转录组数据,设计特异性引物,克隆天麻二羧酸-三羧酸载体蛋白编码基因GeDTC,并利用ExPASy、ClustalW、MEGA等软件对其进行生物信息学分析,利用马铃薯遗传转化体系,获得阳性转基因植株和微型薯,并对微型薯块茎的大小、质量、有机酸和淀粉含量等农艺性状进行了检测和分析,对GeDTC基因功能进行初步研究。结果显示,GeDTC开放阅读框(open reading frame)全长981 bp,编码326个氨基酸残基,相对分子质量为35.01 kDa。预测GeDTC蛋白的理论等电点为9.83,不稳定系数为27.88,亲水性平均指数为0.104,属于稳定的亲水性蛋白。GeDTC蛋白存在1个跨膜结构,无信号肽,定位于线粒体内膜。系统进化树显示,GeDTC与其他种类植物DTC蛋白之间具有较高的同源性,其中与铁皮石斛DcDTC(XP_020675804.1)同源性最高,为85.89%。运用双酶切方法构建GeDTC过表达载体pCambia1300-35Spro-GeDTC,并通过农杆菌介导转化法获得了马铃薯转基因植株,移栽收获的转基因株系微型薯和野生型株系相比体积更小,质量更轻,有机酸含量低,淀粉含量无显著差异。初步推测天麻GeDTC基因可能为三羧酸的外排通道并参与调控块茎的发育,为深入阐明天麻块茎形成的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 天麻 dtc基因 遗传转化 块茎发育 有机酸
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