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哺乳动物DNA连接酶在DNA双链断裂修复通路中的作用 被引量:4
1
作者 芦广庆 段金志 张昱 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期178-179,共2页
保持基因组的完整性和稳定性对于生物体的存活是十分重要的。DNA损伤来源于多方面,主要包括内源性的生理因素(如细胞代谢产物、DNA复制错误、抗体类别转换等)和外源性因素(如uv照射、同位素辐射等)。基因组DNA一旦发生损伤,机体内... 保持基因组的完整性和稳定性对于生物体的存活是十分重要的。DNA损伤来源于多方面,主要包括内源性的生理因素(如细胞代谢产物、DNA复制错误、抗体类别转换等)和外源性因素(如uv照射、同位素辐射等)。基因组DNA一旦发生损伤,机体内的DNA损伤修复机制就会被激活。 展开更多
关键词 dna连接酶 断裂修复 哺乳动物 基因组dna dna损伤 通路 双链 dna复制
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T4DNA连接酶对电转化效率的影响 被引量:5
2
作者 王福利 赵爱志 +4 位作者 韩月恒 温伟红 刘建平 董青川 秦卫军 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第17期1974-1976,共3页
目的探讨T4DNA连接酶影响电转化效率的机制并寻找提高电转化效率的方法。方法将1μg噬粒pDAN5加入到连接反应体系中并进行沉淀、热灭活以及酚氯仿抽提等各种处理后进行电转化。结果热灭活、酚氯仿抽提、热灭活后沉淀及热灭活后酚氯仿抽... 目的探讨T4DNA连接酶影响电转化效率的机制并寻找提高电转化效率的方法。方法将1μg噬粒pDAN5加入到连接反应体系中并进行沉淀、热灭活以及酚氯仿抽提等各种处理后进行电转化。结果热灭活、酚氯仿抽提、热灭活后沉淀及热灭活后酚氯仿抽提处理后的转化效率最高(4.6×108 ̄5.3×108),其次是沉淀处理(4.8×107),未处理的转化效率最低(4.4×106)。结论 T4DNA连接酶的活性是导致电转化效率降低的主要原因,任何可以灭活该酶活性的方法均可显著地提高转化效率。 展开更多
关键词 T4 dna连接酶 电转化
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砷对人DNA连接酶影响的研究 被引量:2
3
作者 胡宇 苏林 +1 位作者 Elithabeth T.Snow 王国荃 《地方病通报》 2000年第1期7-10,共4页
采用纯化酶活性分析和人细胞体外培养方法 ,研究砷对人 DNA修复关键酶—— DNA连接酶活性的影响。结果表明 :纯化人 DNA连接酶 和 在毫摩尔水平三价砷和五价砷存在下 ,酶活性增加。与此不同的是 ,经过微摩尔砷处理的人细胞核提取物的 ... 采用纯化酶活性分析和人细胞体外培养方法 ,研究砷对人 DNA修复关键酶—— DNA连接酶活性的影响。结果表明 :纯化人 DNA连接酶 和 在毫摩尔水平三价砷和五价砷存在下 ,酶活性增加。与此不同的是 ,经过微摩尔砷处理的人细胞核提取物的 DNA连接酶的活性即可被显著抑制。未经染砷处理的细胞核提取物的 DNA连接酶活性与纯化酶对砷的敏感性没有显著区别。说明砷的毒性与砷对 DNA连接酶的作用没有直接联系。因此 ,砷的促突变和对 DNA’损伤后修复的抑制 ,可能并非直接抑制修复酶所致 ,可能与砷所引起的细胞内信号传递和基因表达的改变及通过转录水平或翻译修饰的调节有关。 展开更多
关键词 dna连接酶 肿瘤
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DNA连接酶及相关检测技术研究进展 被引量:4
4
作者 易萍 李力 陈竹钦 《中国优生与遗传杂志》 2007年第8期5-9,共5页
关键词 核酸检测技术 dna连接酶 聚合链式反应 分子遗传学 临床诊断 微生物学 诊断方法 基因突变
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重组DNA技术是怎样产生的 被引量:3
5
作者 任衍钢 宋玉奇 +1 位作者 白冠军 卫红萍 《生物学通报》 北大核心 2010年第8期60-62,共3页
从历史的角度回顾了重组DNA技术的产生过程;侧重介绍限制性内切酶、DNA连接酶、运载工具的发现,以及科学家运用这些发现进行重组DNA实验的过程,并以此阐述生物学发展与生物技术进步的相互关系。
关键词 重组dna技术 限制性内切 dna连接酶 运载体
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Thermus aquaticus DNA连接酶的连接特性研究 被引量:3
6
作者 于欣 王静 +1 位作者 安然 梁兴国 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期50-55,共6页
为进一步研究Thermus aquaticus(Taq)DNA连接酶的作用机理、开发以DNA连接作为关键步骤的新生物技术,本文以含有超稳定发卡结构的DNA(带有11nt长的单链部分)和另一条单链DNA为连接底物,研究了片段长度、反应温度、连接位点的结构特... 为进一步研究Thermus aquaticus(Taq)DNA连接酶的作用机理、开发以DNA连接作为关键步骤的新生物技术,本文以含有超稳定发卡结构的DNA(带有11nt长的单链部分)和另一条单链DNA为连接底物,研究了片段长度、反应温度、连接位点的结构特性、聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)的添加等对连接的影响,探讨了Taq DNA连接酶的连接特性。连接结果显示:单链DNA的3’端同发卡结构I底物相连的连接率,比单链DNA的5’端同发卡结构II底物相连的连接率更高;可以连接的最短单链DNA片段的长度为6nt;在20~65℃范围内,一般连接率随温度升高而升高。在连接时,由2条底物通过互补配对形成的复合体的热稳定性对连接率影响不大,一般在连接温度远远高于该复合体的熔点(Melting Temperature,Tm)时仍有很高的连接率。在70或75℃时,虽然连接率有所降低,但仍然可以连接9nt的单链DNA片段。研究还发现,在片段连接上,PEG 6000对较难连接的片段(6~7nt)有促进作用,对容易连接的片段(8~10nt)促进作用不显著,甚至有一定抑制作用。 展开更多
关键词 TAQ dna连接酶 发卡结构 短片段
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T4 DNA连接酶性质及其平端连接功能 被引量:3
7
作者 贺添艳 刘亚娟 +2 位作者 徐文选 刘猛 刘亮伟 《河南科学》 2016年第7期1058-1062,共5页
T4 DNA连接酶(T4Lig)在基因工程中有重要作用,科研人员对该工具酶性质了解不全面易导致平端DNA连接效率很低、甚至失败.所以对T4Lig性质功能的全面认识有助于基因重组,特别是平端DNA连接中的应用.为了提高平端DNA连接效率,以及进一步阐... T4 DNA连接酶(T4Lig)在基因工程中有重要作用,科研人员对该工具酶性质了解不全面易导致平端DNA连接效率很低、甚至失败.所以对T4Lig性质功能的全面认识有助于基因重组,特别是平端DNA连接中的应用.为了提高平端DNA连接效率,以及进一步阐明平端连接机理,本文综述了T4Lig酶分子大小、保真性、切口DNA连接机理、平端DNA连接端口检测、酶分子性质理性改造等研究进展,并对平端连接中有待解决的几个问题进行了展望. 展开更多
关键词 T4 dna连接酶 性质 功能 平端连接
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T4 DNA连接酶酶活力测定方法 被引量:3
8
作者 周李华 叶德萍 +1 位作者 王智 唐祥凯 《中国测试》 CAS 北大核心 2014年第2期64-66,81,共4页
工具酶的酶活力检测是工具酶产品质量控制的关键,研究和建立工具酶酶活力的测定方法是工具酶产品标准化制定的重点和难点。该文采用改进的粘性末端单位测定T4 DNA连接酶酶活力。经验证,方法重复性好,稳定性佳,为建立T4 DNA连接酶质量检... 工具酶的酶活力检测是工具酶产品质量控制的关键,研究和建立工具酶酶活力的测定方法是工具酶产品标准化制定的重点和难点。该文采用改进的粘性末端单位测定T4 DNA连接酶酶活力。经验证,方法重复性好,稳定性佳,为建立T4 DNA连接酶质量检测标准奠定了基础。 展开更多
关键词 T4 dna连接酶 活力 测定
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基于分子瓦自组装的DNA纳米管的制备与表征
9
作者 叶日安 周明 +3 位作者 庄立洲 AMOAKO George 杨晓红 沈智勇 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第13期1248-1254,共7页
利用DNA分子自组装技术可以构建从一维到三维不同形状的纳米结构,并且这些结构在微纳米电子学、纳米生物学等众多领域有许多潜在的用途.本文利用DNA分子瓦(tile)自组装技术,采用双交叉(DX)DNA分子瓦成功组装了一维DNA纳米管结构,聚丙烯... 利用DNA分子自组装技术可以构建从一维到三维不同形状的纳米结构,并且这些结构在微纳米电子学、纳米生物学等众多领域有许多潜在的用途.本文利用DNA分子瓦(tile)自组装技术,采用双交叉(DX)DNA分子瓦成功组装了一维DNA纳米管结构,聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)、透射电子显微镜(TEM)、荧光显微镜和原子力显微镜(AFM)对制得的DNA纳米管结构进行了表征,结果表明,组装成功的DNA纳米管直径在7~20nm之间,长度最长可以达到50μm以上.为了结构更加稳定,对分子瓦中每条DNA单链的5′末端进行磷酸化处理,自组装完成后利用T4DNA连接酶连接磷酸化修饰的DNA纳米管的缺口.AFM结果显示,使用T4DNA连接酶处理后的DNA纳米管更能保持完好的管状结构,表明连接处理后的DNA纳米管更加坚固,促进了DNA纳米管应用于微纳米领域的研究. 展开更多
关键词 dna纳米管 dna分子瓦 黏性末端 磷酸化 dna连接酶
原文传递
DNA连接酶的种类和作用机制 被引量:1
10
作者 徐广志 《生物化工》 2018年第5期124-126,共3页
DNA连接酶是一种能够催化相邻DNA的3’-OH和5’-磷酸基末段形成磷酸二酯键,并且把两段DNA拼接起来的核酸酶。不同生物体内具有不同种类的DNA连接酶,可以连接黏性末端或者平末端,连接过程是通过DNA连接酶把ATP或者NAD的磷酸腺苷接到DNA... DNA连接酶是一种能够催化相邻DNA的3’-OH和5’-磷酸基末段形成磷酸二酯键,并且把两段DNA拼接起来的核酸酶。不同生物体内具有不同种类的DNA连接酶,可以连接黏性末端或者平末端,连接过程是通过DNA连接酶把ATP或者NAD的磷酸腺苷接到DNA的缺口处,形成磷酸二酯键,在释放出一个磷酸腺苷完成DNA的连接过程,相对而言对平末端的连接效率较低。 展开更多
关键词 dna连接酶 黏性末端 平末端 体外dna连接
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一种嗜热耐酸古细菌JP2菌株编码的热稳定DNA连接酶的生物化学及酶学特性研究(英文) 被引量:2
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作者 兰海燕 刘纯 HENDRY PHIL 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第9期881-889,共9页
对分离自巴布亚新几内亚地热活跃区的一种嗜热耐酸古细菌——JP2菌株中的DNA连接酶基因进行了克隆、表达、纯化,并对其生物化学及酶学特性进行了研究.对其核酸及氨基酸序列的分析表明:JP2菌株的DNA连接酶与古细菌种Sulfolobussolfatari... 对分离自巴布亚新几内亚地热活跃区的一种嗜热耐酸古细菌——JP2菌株中的DNA连接酶基因进行了克隆、表达、纯化,并对其生物化学及酶学特性进行了研究.对其核酸及氨基酸序列的分析表明:JP2菌株的DNA连接酶与古细菌种Sulfolobussolfataricus和Sulfolobusshibatae的DNA连接酶具有很高的同源性,尤其在与功能紧密相关的6个保守结构基序的一致性更高.JP2连接酶表现出高的DNA缺口连接活性,在二价金属辅因子的选择方面,JP2连接酶更倾向于Mn2+离子而不是Mg2+、Ca2+及其他离子.不同温度时的热稳定性测试显示:JP2连接酶在50~80℃时为较适连接温度,当温度不超过85℃时,连接酶的活性在5h内保持相对稳定,但在90℃以上活性则很快降低.还分离纯化了JP2的分子伴侣——TF55,并将其应用于增加JP2连接酶的热稳定性研究.结果表明:在体外85℃时,分子伴侣未增加连接酶的热稳定性,可能的原因是在85℃体外状态下TF55本身就表现出不稳定性. 展开更多
关键词 dna连接酶 SULFOLOBUS spp. 嗜热耐酸古细菌 耐热性 分子伴侣TF55
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额外的错配碱基提高T4 DNA连接酶等位特异性连接(英文) 被引量:1
12
作者 李书亚 郜艳敏 +2 位作者 胡亚赛 郝敏 齐浩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期854-860,共7页
连接是一种主要的DNA处理过程。由于较低的商业成本以及核酸底物识别的灵活性,T4DNA连接酶被广泛应用于生物分子工程,特别是特定核酸序列的等位特异性连接检测。本文评估了在T4 DNA连接酶介导的连接反应中,引入额外的错配碱基对所产生... 连接是一种主要的DNA处理过程。由于较低的商业成本以及核酸底物识别的灵活性,T4DNA连接酶被广泛应用于生物分子工程,特别是特定核酸序列的等位特异性连接检测。本文评估了在T4 DNA连接酶介导的连接反应中,引入额外的错配碱基对所产生的影响。设计了超过150组DNA/DNA或DNA/RNA带有的额外错配碱基对的组合。结果发现,引入额外的错配碱基对后,T4 DNA连接酶在DNA/DNA连接中特异性可提高60倍以上,而在DNA/RNA连接中特异性只能提高2倍。在等位特异性连接中,有的错配碱基对可使T4 DNA连接酶的特异性提高600多倍。 展开更多
关键词 等位特异性连接 错配 T4 dna连接酶 锁式探针
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人教版选修三《基因工程》专题核心概念分析 被引量:2
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作者 于江欢 《中国校外教育》 2019年第22期121-122,共2页
"基因工程"不仅在现代生物专题中占有重要地位,在高考命题中也是一大热点,并且近年来也有考点加深的趋势。因此,下面对基因工程中几组重要的基本概念进行具体分析。
关键词 基因工程 限制 dna连接酶 运载体
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DNA连接酶的结构与功能
14
作者 张波 孟紫强 《生命的化学》 CAS CSCD 2001年第2期119-121,共3页
关键词 dna连接酶 蛋白质结构 dna复制 切除修复 功能
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Effect of Temperature on Topological States of Circular DNA
15
作者 Yang-Tao Fan Xiu-Yan Li +1 位作者 Yan-Hui Liu Hu Chen 《Communications in Theoretical Physics》 SCIE CAS CSCD 2017年第7期131-136,共6页
The different topological states of circular double-stranded DNA can be defined by their linking number. The equilibrium distribution of linking number can be obtained by circularizing a linear DNA into a circle by li... The different topological states of circular double-stranded DNA can be defined by their linking number. The equilibrium distribution of linking number can be obtained by circularizing a linear DNA into a circle by ligase. Based on the recent experimental results that the DNA bending rigidity and twist rigidity strongly depend on temperature, the reduced bending rigidity can be approximated by g = (3.19 x10-19 - T. 4.14s10-22) erg. cm over the temperature interval (5 ~ 53) ~ C, and the temperature dependence of twist rigidity can be fitted by C ( T) = (4588.89 exp(-T/117.04)- 251.33) nm. The temperature dependence of the linking number distribution of circular DNAs can be predicted by using Monte Carlo simulation. The variance of linking number distribution on temperature is in accordance with the previous experimental results. Compared with the temperature dependence of bending rigidity, the temperature dependence of twist rigidity causes a noticeable fluctuation in linking number distribution and mainly contribute towards the variance change of linking number distribution of circular DNA. The variance of the writhe number and twist number in the equation ((ALk)21 = ((ATw)2) -b ((Wr)2) depends on the length of circular DNA. When the length of circular DNA is less than 230 nm, the variance of twist number ((ATw)2) is dominant over the variance of writhe number (((wr)2))whereas for the condition that the length of the circular DNA is larger than 370 nm. 展开更多
关键词 dna Monte Carlo simulations mechanical properties
原文传递
“DNA重组技术的基本工具”一节的教学设计 被引量:1
16
作者 杨二群 《中学生物学》 2017年第7期11-13,共3页
根据“发现问题”“分析问题”到“解决问题”的规律,针对高中生物教学中“基因工程”这一难点进行设计,创设并充分利用情境展开教学,以问题串贯穿引领学生深入浅出,并通过模拟操作实验变抽象为具体,帮助学生降低学习难度,把握重点。
关键词 基因工程 限制 dna连接酶 模拟操作 教学设计
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极端嗜热古菌——芝田硫化叶菌DNA连接酶的生化性质
17
作者 赖小勤 黄力 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第2期122-128,共7页
极端嗜热古菌——芝田硫化叶菌DNA连接酶(Ssh连接酶) 的最适辅因子为ATP,在dATP存在时,该酶也能表现出较弱的连接活性. ATP或dATP都能够使该酶发生腺苷化,腺苷化的Ssh连接酶能够将腺苷基团转移至含切刻的DNA上. 电泳迁移率改变实验表明,... 极端嗜热古菌——芝田硫化叶菌DNA连接酶(Ssh连接酶) 的最适辅因子为ATP,在dATP存在时,该酶也能表现出较弱的连接活性. ATP或dATP都能够使该酶发生腺苷化,腺苷化的Ssh连接酶能够将腺苷基团转移至含切刻的DNA上. 电泳迁移率改变实验表明,Ssh连接酶能够结合双链DNA,且与含切刻及不含切刻的DNA结合的亲和力相同,但不结合单链DNA. 酵母双杂交实验显示,硫磺矿硫化叶菌(与芝田硫化叶菌亲缘关系很近) 的DNA连接酶,与该菌所含的3个增殖细胞核抗原(PCNA) 同源蛋白中的一个(PCNA-1) 有相互作用,而与另外2个同源蛋白(PCNA-like和PCNA-2) 则无相互作用. 在古菌中高度保守的Sac10b蛋白家族成员Ssh10b能够激活Ssh连接酶的活性,而硫化叶菌中的主要染色体蛋白——7 ku DNA结合蛋白(Ssh7) 则对该酶活性没有影响. 展开更多
关键词 古菌 硫化叶菌 dna连接酶 dna结合 Saclob家族蛋白 PCNA
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概述基因工程中的工具酶
18
作者 张淑萍 《中学生物学》 2021年第10期3-5,共3页
催化特异性反应的工具酶在基因工程中发挥着重要的作用,根据其催化反应特性可分为限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶和末端修饰酶4种类型。对这四种工具酶的发现和作用机制进行概述,并展望工具酶的应用前景。
关键词 限制 dna连接酶 dna聚合 末端修饰
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詹氏甲烷球菌DNA连接酶在大肠杆菌中的表达纯化及连接活性鉴定
19
作者 张洋 谢响明 刘建华 《生命科学研究》 CAS CSCD 2009年第2期99-103,共5页
对一种耐热性古菌——詹氏甲烷球菌(Methanocaldococcus jannaschii)DNA连接酶进行了克隆、表达、纯化.并对其生物化学特性和酶学活性进行了初步研究.詹氏甲烷球菌DNA连接酶重组蛋白在ATP及Mg^2+二价阳离子存在的条件下具有连接酶... 对一种耐热性古菌——詹氏甲烷球菌(Methanocaldococcus jannaschii)DNA连接酶进行了克隆、表达、纯化.并对其生物化学特性和酶学活性进行了初步研究.詹氏甲烷球菌DNA连接酶重组蛋白在ATP及Mg^2+二价阳离子存在的条件下具有连接酶活性,能够封闭DNA链上的切割.通过不同温度下的测试,50-80℃为较适合连接温度,其耐热性强,甚至在90℃下加热5min后仍有连接酶活性;其发挥活性的pH值范围比较宽泛.最适pH值为6.0~9.0.这是国际上对詹氏甲烷球菌DNA连接酶的首次报导. 展开更多
关键词 詹氏甲烷球菌 dna连接酶 蛋白纯化 活分析
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对基因工程教学中几个问题的认识
20
作者 姜爱丽 《中学生物教学》 2010年第1期41-42,共2页
人教版选修3模块以专题形式介绍了现代生物科学技术,由于这些都是当前发展非常迅速的领域,既新又专,实例层出不穷,科学和技术的新概念较多,又多在形成之中,各家观点不一。笔者就“基因工程”专题的教学过程中所遇到的一些不易理... 人教版选修3模块以专题形式介绍了现代生物科学技术,由于这些都是当前发展非常迅速的领域,既新又专,实例层出不穷,科学和技术的新概念较多,又多在形成之中,各家观点不一。笔者就“基因工程”专题的教学过程中所遇到的一些不易理解的问题,通过查阅相关资料,从一线教师的视角对其中几个问题进行解读。 展开更多
关键词 基因文库 感受态 dna分子杂交 dna连接酶 中学 生物教学
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