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cGAS通过调控固有免疫应答抑制HTLV-1在HeLa细胞中复制 被引量：5
1
作者 马玲玲 郭志祥 +5 位作者 宋迪 刘月 崔钰晗 关宇鹤 杨波 王洁 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期822-826,共5页
目的 探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）在成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）感染HeLa细胞过程中的功能及其作用机制.方法 将HeLa细胞与MT2细胞（HTLV-1阳性T细胞）共培养,采用免疫印迹试验检测cGAS在HeLa细胞中的表达... 目的 探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）在成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）感染HeLa细胞过程中的功能及其作用机制.方法 将HeLa细胞与MT2细胞（HTLV-1阳性T细胞）共培养,采用免疫印迹试验检测cGAS在HeLa细胞中的表达变化;构建带有血凝素（HA）标签的cGAS表达质粒,转染入HeLa细胞24 h后与MT2细胞共培养24 h,免疫印迹试验检测HeLa细胞中HTLV-1病毒蛋白Tax和p19的表达量,real-time PCR检测HeLa细胞中HTLV-1病毒基因Tax、p19、Env、HBZ以及px转录本的量,同时免疫印迹试验检测干扰素调节因子3（IRF3）和p65的磷酸化水平,real-time PCR检测干扰素（IFN）-β、干扰素诱导蛋白10（IP-10）、调节活化正常T细胞表达和趋化因子（RANTES）和肿瘤坏死因子（TNF）-α的表达量.结果 与MT2细胞共培养后,HeLa细胞中cGAS的表达升高;转染有cGAS表达质粒的HeLa细胞与对照组细胞相比,在与MT2细胞共培养后,Tax和p19在蛋白水平上的表达量减少,Tax、p19、EnV、HBZ以及px转录本的量减少,IRF3和p65的磷酸化水平升高,IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量增加.结论 cGAS在HTLV-1感染的HeLa细胞中可能具有促进固有免疫应答并抑制HTLV-1病毒复制的功能. 展开更多
关键词 环鸟苷酸-腺苷酸合成酶 成人T淋巴细胞白血病病毒1型 dna识别受体 逆转 录病毒
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cGAS识别HTLV-1反转中间体并诱导STING依赖性的固有免疫应答 被引量：5
2
作者 刘月 崔钰晗 +5 位作者 宋迪 关宇鹤 陈凡 陈蒙蒙 杨波 王洁 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期168-173,共6页
目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)在成人T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV-1)感染过程中对病毒反转中间体的识别以及诱导的下游信号通路。方法将生物素标记的HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞,采用免疫共沉淀试验检... 目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)在成人T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV-1)感染过程中对病毒反转中间体的识别以及诱导的下游信号通路。方法将生物素标记的HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞,采用免疫共沉淀试验检测cGAS与ssDNA90的相互作用;将HeLa细胞与HTLV-1阳性细胞系MT2共培养,采用免疫共沉淀的方法检测cGAS与干扰素基因刺激蛋白(STING)的相互作用;采用siRNA的方法在HeLa细胞中敲减STING,24 h后再转染入cGAS表达质粒,24 h后与MT2细胞共培养24 h,real-time PCR实验检测HeLa细胞中干扰素(IFN)-β、调节活化正常T细胞表达和趋化因子(RANTES)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、HTLV-1病毒蛋白Tax、p19以及HBZ的表达,免疫印迹检测HeLa细胞中干扰素调节因子3(IRF3)和p65的磷酸化水平。结果cGAS与ssDNA90存在相互作用;cGAS与STING存在相互作用,且作用部位在胞质中;在敲减STING的HeLa细胞中,cGAS过表达对IFN-β、RANTES和TNF-α的表达量无明显影响,对HTLV-1病毒蛋白Tax、p19和HBZ的表达量无明显影响,对IRF3和p65的磷酸化水平无明显影响。结论cGAS可结合HTLV-1的反转中间体ssDNA90并通过STING激活固有免疫应答。 展开更多
关键词 环鸟苷酸-腺苷酸合成酶 成人T淋巴细胞白血病病毒1型 干扰素基因刺激蛋白 dna识别受体 反转中间体
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FAdV-4感染鸡引起不同组织DNA识别受体及炎性因子表达的变化
3
作者 焦惠暄 郭雨欣 +5 位作者 施佳蕾 王永强 高丽 曹红 李晓齐 郑世军 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2023年第12期1495-1506,共12页
为了探究禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)感染对鸡先天性免疫的影响,本研究以FAdV-4感染21日龄无特定病原(SPF)鸡,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测FAdV-4感染鸡的心脏、肝脏、脾、肺、肾、嗉囊、胸腺、气... 为了探究禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)感染对鸡先天性免疫的影响,本研究以FAdV-4感染21日龄无特定病原(SPF)鸡,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测FAdV-4感染鸡的心脏、肝脏、脾、肺、肾、嗉囊、胸腺、气管、食管、腺胃、肌胃、胰腺、法氏囊、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠、睾丸、脑等20种组织中DNA识别受体(感受器)及炎性因子表达水平。结果,与未感染对照组鸡相比,感染鸡大多数组织中DNA识别受体及下游炎性因子mRNA水平呈现不同程度增加,以FAdV-4感染鸡的心脏和肝脏中的变化尤为明显,而肝脏FAdV-4病毒载量最高。上述研究结果表明,FAdV-4感染引起鸡不同组织先天性免疫应答程度不同,这为深入研究FAdV-4致病机理以及宿主抗FAdV-4感染先天性免疫应答机制提供了参考。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 先天性免疫 dna识别受体 炎性因子
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小鼠LRRFIP1基因的克隆及LRRFIP1天然免疫模式识别功能的研究 被引量：3
4
作者 李婷婷 何小兵 +5 位作者 贾怀杰 陈国华 曾爽 房永祥 金启旺 景志忠 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期649-653,共5页
应用RT-PCR技术,从小鼠脾淋巴细胞中成功克隆了LRRFIP1基因,并对其遗传演化关系及LRRFIP1的分子结构特征进行了分析。结果显示,克隆的基因开放阅读框全长2 190bp,编码729个氨基酸,与大鼠、猪、牛等哺乳动物LRRFIP1相应序列的同源性为90.... 应用RT-PCR技术,从小鼠脾淋巴细胞中成功克隆了LRRFIP1基因,并对其遗传演化关系及LRRFIP1的分子结构特征进行了分析。结果显示,克隆的基因开放阅读框全长2 190bp,编码729个氨基酸,与大鼠、猪、牛等哺乳动物LRRFIP1相应序列的同源性为90.5%~46.5%。将克隆的小鼠LRRFIP1基因亚克隆至真核表达载体pCMV-Tag 2B,转染HEK293T细胞后,双荧光素酶报告系统证实,在poly(dA-dT)和poly(dG-dC)刺激下,过表达小鼠LRRFIP1能够通过激活IRF3而显著增强IFN-β的表达。结果表明,小鼠LRRFIP1能够识别富含A/T或C/G的DNA序列,在宿主抗DNA病毒感染的天然免疫反应中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 小鼠 LRRFIP1基因 结构分析 dna识别受体 信号转导
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DNA识别受体介导的天然免疫参与抗痘病毒感染的研究进展 被引量：2
5
作者 成温玉 雷霆宇 +1 位作者 张博昕 景志忠 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期341-348,共8页
痘病毒严重危害人类健康和畜牧业的健康发展。作为一类胞质中复制的双链DNA病毒,痘病毒在感染过程中可被宿主的一系列模式识别受体所识别,尤其是DNA识别受体可以识别病毒DNA,通过级联放大反应诱导宿主产生I型干扰素、细胞因子以及趋化... 痘病毒严重危害人类健康和畜牧业的健康发展。作为一类胞质中复制的双链DNA病毒,痘病毒在感染过程中可被宿主的一系列模式识别受体所识别,尤其是DNA识别受体可以识别病毒DNA,通过级联放大反应诱导宿主产生I型干扰素、细胞因子以及趋化因子等,从而发挥抗病毒天然免疫功能。截止目前,多个DNA识别受体被发现参与了抗痘病毒感染过程,其中TLR9和cGAS是识别并发挥抗痘病毒感染的关键受体。本文对所有参与痘病毒感染应答的DNA识别受体及其作用机制进行综述,以期深入了解宿主应答痘病毒感染的天然免疫反应机制,为阐明痘病毒的致病与免疫机制奠定基础。 展开更多
关键词 痘病毒 dna识别受体 天然免疫 抗病毒 免疫逃逸
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cGAS促进HTLV-1反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答 被引量：2
6
作者 郭志祥 宋迪 +5 位作者 刘月 崔钰晗 马玲玲 关宇鹤 杨波 王洁 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期434-439,共6页
目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）在成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）的反转中间体诱导的固有免疫信号通路中的调控功能。方法将HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞，采用免疫印迹试验检测cGAS在HeLa细胞... 目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）在成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）的反转中间体诱导的固有免疫信号通路中的调控功能。方法将HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞，采用免疫印迹试验检测cGAS在HeLa细胞中的表达变化；将cGAS表达质粒，转染入HeLa细胞，24 h后再转染入ssDNA90，real-time PCR试验检测HeLa细胞中干扰素（IFN）-β、干扰素诱导蛋白10（IP-10）、调节活化正常T细胞表达和趋化因子（RANTES）和肿瘤坏死因子（TNF）-α的表达，免疫印迹试验检测HeLa细胞中干扰素调节因子3（IRF3）和p65的磷酸化水平；采用siRNA的方法在HeLa和佛波酯（phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）诱导分化的THP1（PMA-THP1）细胞中沉默cGAS的表达，24 h后再转染入ssDNA90，real-time PCR试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达，免疫印迹试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IRF3和p65的磷酸化水平。结果ssDNA90转染后，HeLa细胞中cGAS的表达升高；转染有cGAS表达质粒的HeLa细胞与对照组细胞相比，在ssDNA90刺激后，IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量增加，IRF3和p65的磷酸化水平升高；沉默cGAS表达的HeLa和PMA-THP1细胞与对照组细胞相比，在ssDNA90刺激后，IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量降低，IRF3和p65的磷酸化水平下降。结论cGAS在HTLV-1的反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答中可能具有促进功能。 展开更多
关键词 环鸟苷酸-腺苷酸合成酶 成人T淋巴细胞白血病病毒1型 dna识别受体 反转中间体 固有免疫应答
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DNA识别受体PYHIN家族及相关病毒免疫逃逸机制的研究 被引量：1
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作者 魏巍 汪速飞 +1 位作者 倪明 余冰 《微生物与感染》 2016年第4期252-256,共5页
宿主细胞内的DNA识别受体可识别病毒核酸分子并激活细胞天然免疫反应,从而产生抗病毒效应;同时,病毒也进化出相应机制来逃避或抑制这种免疫反应。本文总结了宿主细胞内DNA识别受体PYHIN家族识别病毒核酸并激活细胞天然免疫反应的特点和... 宿主细胞内的DNA识别受体可识别病毒核酸分子并激活细胞天然免疫反应,从而产生抗病毒效应;同时,病毒也进化出相应机制来逃避或抑制这种免疫反应。本文总结了宿主细胞内DNA识别受体PYHIN家族识别病毒核酸并激活细胞天然免疫反应的特点和分子机制,并讨论了病毒逃避宿主天然免疫应答的方式。 展开更多
关键词 dna识别受体 PYHIN家族 免疫逃逸
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小鼠AIM2分子结构特征及天然免疫模式识别功能的研究 被引量：1
8
作者 王聪 李婷婷 +8 位作者 成温玉 何小兵 金启旺 贾怀杰 陈国华 曾爽 房永祥 景志忠 刘翊中 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期381-388,共8页
应用RT-PCR技术,从小鼠脾淋巴细胞中克隆AIM 2基因,通过生物信息学软件对AIM2的遗传演化关系、分子结构特征以及氨基酸序列进行分析,并应用q RT-PCR检测在不同组织中的m RN A转录水平。结果显示,克隆的小鼠AIM2基因开放阅读框全长1 065 ... 应用RT-PCR技术,从小鼠脾淋巴细胞中克隆AIM 2基因,通过生物信息学软件对AIM2的遗传演化关系、分子结构特征以及氨基酸序列进行分析,并应用q RT-PCR检测在不同组织中的m RN A转录水平。结果显示,克隆的小鼠AIM2基因开放阅读框全长1 065 bp,编码354个氨基酸,与其他动物的AIM2基因序列具有较高的同源性(56.9%~88.9%);q RT-PCR检测表明,AIM2基因在肌肉和心脏组织中转录水平较高。此外,将AIM2基因亚克隆至真核表达载体p CMV-Tag 2B进行W estern-blot验证,然后将正确的重组表达质粒转染H EK 293T细胞,进而应用双荧光素酶报告系统检测证实在poly(d A-d T)和poly(d G-d C)刺激下,过表达小鼠AIM2对转录因子NF-κB和AP-1的活化过程有显著增强作用。上述研究结果表明,小鼠AIM2能够识别富含A/T或C/G的D NA,是重要的胞浆DNA识别受体,这为进一步探讨AIM2与DNA病毒的相互作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 天然免疫 dna识别受体 AIM2 炎症小体
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小鼠DNA依赖的干扰素调节因子激活物分子结构特征及其功能
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作者 金启旺 李婷婷 +6 位作者 何小兵 贾怀杰 陈国华 曾爽 房永祥 景志忠 杨孝朴 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1606-1610,共5页
目的研究小鼠DNA依赖的干扰素调节因子激活物(DAI)的分子结构特征以及抗病毒天然免疫应答与信号转导的分子机制。方法应用反转录PCR技术从小鼠脾脏淋巴细胞中克隆DAI基因,并利用生物信息学软件对其遗传演化关系及分子结构特征进行分析;... 目的研究小鼠DNA依赖的干扰素调节因子激活物(DAI)的分子结构特征以及抗病毒天然免疫应答与信号转导的分子机制。方法应用反转录PCR技术从小鼠脾脏淋巴细胞中克隆DAI基因,并利用生物信息学软件对其遗传演化关系及分子结构特征进行分析;双荧光素酶报告系统检测小鼠DAI受到聚脱氧腺苷酸-脱氧胸苷酸[poly(d A-d T)]和聚脱氧鸟苷酸-脱氧胞苷酸[poly(d G-d C)]作用后β干扰素(IFN-β)启动子和核因子κB(NF-κB)调控元件启动的荧光素酶活性。结果克隆的小鼠DAI基因开放读框全长为1236 bp,编码411个氨基酸,与牛、猪、大鼠等哺乳动物DAI相应序列的同源性为60%、63.1%、84%,由2个Z-DNA结合结构域Zα和Zβ、DNA结合区3(D3)和信号转导结构域(SD)组成。小鼠DAI受到poly(d A-d T)作用后,IFN-β启动子和NF-κB调控元件起始的相对荧光素酶活性均显著增加;而小鼠DAI受到poly(d G-d C)作用后,只有NF-κB起始的相对荧光素酶活性显著增加,IFN-β启动子起始的相对荧光素酶活性并无显著变化。结论小鼠DAI能识别富含A/T或C/G的DNA序列,可能在宿主抗DNA病毒感染的天然免疫反应中发挥重要作用。 展开更多
关键词 小鼠DAI 结构分析 dna识别受体 信号转导
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细胞内DNA识别受体与反转录病毒感染 被引量：3
10
作者 刘月 宋迪 +1 位作者 崔钰晗 王洁 《新乡医学院学报》 CAS 2018年第7期554-557,共4页
反转录病毒可以通过模式识别受体触发一系列固有免疫应答反应,反转录病毒复制过程中会产生一系列的DNA中间体,包括RNA/DNA杂合体、单链DNA和双链DNA等,这些不同形式的DNA可被不同的DNA识别受体所识别,激活固有免疫应答反应,从而抑制反... 反转录病毒可以通过模式识别受体触发一系列固有免疫应答反应,反转录病毒复制过程中会产生一系列的DNA中间体,包括RNA/DNA杂合体、单链DNA和双链DNA等,这些不同形式的DNA可被不同的DNA识别受体所识别,激活固有免疫应答反应,从而抑制反转录病毒的复制。环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(c GAS)、γ干扰素诱导蛋白16(IFI16)及Ku70等细胞内DNA识别受体能够识别人类免疫缺陷病毒、成人T淋巴细胞病毒Ⅰ型、猴免疫缺陷病毒及鼠白血病病毒等反转录病毒的DNA中间体,与下游干扰素相关基因刺激因子(STING)相结合,诱导Ⅰ型干扰素(IFN)的产生及抗病毒免疫应答反应的启动。STING与TANK结合激酶1结合可以磷酸化和激活干扰素调节因子3,启动IFN-β和核因子κB的转录,从而抑制反转录病毒感染。本研究主要对反转录病毒感染过程中IFI16、c GAS、Ku70、STING及DEx D/H盒解螺旋酶41等细胞内DNA识别受体对反转录病毒感染的影响进行综述。 展开更多
关键词 固有免疫应答反应 细胞内dna识别受体 反转录病毒
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