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RNA干涉抑制肺癌细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达 被引量:6
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作者 陈日升 齐连权 +3 位作者 于长明 付玲 于婷 陈薇 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2005年第2期127-131,共5页
目的:通过抑制肺癌细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达,从而部分恢复抑癌基因的表达。方法:采用RNAi技术来抑制DNMT1的活性。应用体外转录的方法,共合成了5个针对DNMT1不同靶位的siRNA序列,并转染人肺癌细胞NCI H157。采用MSP PCR、COBRA... 目的:通过抑制肺癌细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达,从而部分恢复抑癌基因的表达。方法:采用RNAi技术来抑制DNMT1的活性。应用体外转录的方法,共合成了5个针对DNMT1不同靶位的siRNA序列,并转染人肺癌细胞NCI H157。采用MSP PCR、COBRA等方法对抑癌基因RASSF1A进行甲基化分析,半定量RT PCR检测DNMT1mRNA的敲降与RASSF1A基因的表达。结果与结论:5个靶位的siRNA序列中有两个靶位能够有效地抑制DNMT1的表达,且呈剂量依赖效应。人肺癌细胞NCI H157中抑癌基因RASSF1A发生了高度甲基化,在抑制DNMT1活性后,RASSF1A基因去甲基化而恢复表达。 展开更多
关键词 dna甲基转移酶1(dnmt1) RNA干涉 RASSF1A
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DNMT1基因在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义 被引量:9
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作者 周可 马洪 段晓峰 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期584-586,共3页
采用Real-Time PCR检测DNA甲基转移酶-1(DNMT1)mRNA在20例口腔正常黏膜组织及43例口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达,用免疫组织化学法和Western blot分别检测DNMTl蛋白在组织样本中的表达。结果显示DNMTl mRNA在OSCC中高表达(Z=-2.028,... 采用Real-Time PCR检测DNA甲基转移酶-1(DNMT1)mRNA在20例口腔正常黏膜组织及43例口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达,用免疫组织化学法和Western blot分别检测DNMTl蛋白在组织样本中的表达。结果显示DNMTl mRNA在OSCC中高表达(Z=-2.028,P<0.05),43例OSCC组织中,DNMTl蛋白阳性表达率为81%,而在20例口腔正常黏膜组织中的阳性表达率为25%(P<0.05)。DNMTl有可能参与OSCC的发生发展。 展开更多
关键词 dna甲基转移酶1(dnmt1) 口腔鳞状细胞癌(OSCC) 实时定量荧光聚合链反应 免疫组织化学 免疫印迹法
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DNA甲基转移酶1在胰腺癌组织中的表达及其临床意义 被引量:4
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作者 张尤历 徐岷 +6 位作者 高道键 张玉琦 高军 杜奕奇 龚燕芳 满晓华 李兆申 《中华胰腺病杂志》 CAS 2010年第6期415-417,共3页
目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 收集手术切除的30例胰腺癌组织和配对癌旁组织.采用实时定量PCR法检测DNMT1 mRNA的表达;免疫组织化学法检测DNMT1蛋白的表达;分析胰腺癌组织DNMT1蛋白表达强度... 目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 收集手术切除的30例胰腺癌组织和配对癌旁组织.采用实时定量PCR法检测DNMT1 mRNA的表达;免疫组织化学法检测DNMT1蛋白的表达;分析胰腺癌组织DNMT1蛋白表达强度与临床病理参数之间的关系.结果 胰腺癌组织中DNMT1 mRNA的表达量为2.32(1.17~5.17),显著高于配对癌旁组织的0.78(0.07~3.14,P<0.05).胰腺癌组织中导管细胞DNMT1蛋白表达阳性率为(54.5±21.2)%,显著高于癌旁组织(10.9±15.0)%的表达阳性率(P<0.01).以胰腺癌导管细胞DNMT1阳性率54.5%为界,分为高表达组(19例)和低表达组(11例).DNMT1表达强度和临床分期(χ^2=6.897,P=0.029)、淋巴结转移(χ^2=4.739,P=0.029)、神经浸润与否(χ^2=5.44,P=0.020)相关,而与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小、肿瘤分化、血清CEA和CA19-9浓度无关.结论 胰腺癌组织DNMT1 mRNA和蛋白表达明显增加,DNMT1蛋白表达强度与胰腺癌的侵袭力、淋巴结转移和神经浸润相关. 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 dna甲基转移酶1(dnmt1) 免疫组织化学
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DNA甲基化转移酶1介导体外高糖刺激诱导的小鼠足细胞损伤的实验观察 被引量:4
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作者 张丽 史伟 +7 位作者 张倩媚 陈源汉 张鸿 黄宗顺 赵星辰 李锐钊 梁馨苓 刘双信 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期931-935,共5页
目的研究高糖刺激对体外培养的小鼠足细胞DNA甲基化转移酶(Dnmts)表达的影响及Dnmt1在高糖刺激诱导的小鼠足细胞损伤中的作用。方法以体外培养的小鼠永生化足细胞为研究对象,分为正常糖对照组、高糖刺激组、甘露醇组及高糖+干预组(DNA... 目的研究高糖刺激对体外培养的小鼠足细胞DNA甲基化转移酶(Dnmts)表达的影响及Dnmt1在高糖刺激诱导的小鼠足细胞损伤中的作用。方法以体外培养的小鼠永生化足细胞为研究对象,分为正常糖对照组、高糖刺激组、甘露醇组及高糖+干预组(DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷,Dnmt1-siRNA),培养48h,RT-PCR检测其Dnmts mRNA表达;免疫印迹检测Dnmt1、nephrin及podocin蛋白表达;Transwell转板迁移实验观察不同处理后足细胞迁移数目。结果与正常糖对照组比较,高糖刺激组足细胞Dnmt1mRNA及蛋白表达增加(P<0.01),Dnmt3a及Dnmt3bmRNA表达未见明显改变。经5-氮杂-2′-脱氧胞苷或Dnmt1-siRNA处理48h后,高糖刺激组导致Dnmt1高表达得到抑制,降低的足细胞裂孔膜蛋白podocin、nephrin表达增加(P<0.01)。结论高糖上调足细胞Dnmt1蛋白表达,Dnmt1参与体外高糖诱导的小鼠足细胞损伤。 展开更多
关键词 足细胞 高糖 dna甲基转移酶1(dnmt1) dna化抑制剂
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桃叶珊瑚苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学行为的影响 被引量:3
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作者 吴林燕 曾同祥 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第22期3092-3096,共5页
目的研究桃叶珊瑚苷调控miR-217/DNA甲基转移酶1(DNA methyl⁃transferase 1,DNMT1)分子轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学行为的影响。方法瘢痕疙瘩成纤维细胞分成anti-miR-NC组(转染inhibitor control)、anti-miR-217组(转染miR-217 inhibi... 目的研究桃叶珊瑚苷调控miR-217/DNA甲基转移酶1(DNA methyl⁃transferase 1,DNMT1)分子轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学行为的影响。方法瘢痕疙瘩成纤维细胞分成anti-miR-NC组(转染inhibitor control)、anti-miR-217组(转染miR-217 inhibitor)、miR-NC组(转染mimics control)、miR-217组(转染miR-217 mimics)、si-NC组(转染siRNA control)、si-DNMT1组(转染DNMT1 siRNA)、对照组(常规培养)、低剂量实验组(15μmol·L^(-1)桃叶珊瑚苷处理)、中剂量实验组(30μmol·L^(-1)桃叶珊瑚苷处理)、高剂量实验组(60μmol·L^(-1)桃叶珊瑚苷处理)、anti-miR-NC+高剂量实验组(转染inhibi⁃tor control,60μmol·L^(-1)桃叶珊瑚苷处理)、anti-miR-217+高剂量实验组(转染miR-217 inhibitor,60μmol·L^(-1)桃叶珊瑚苷处理)、anti-miR-217+si-NC+高剂量实验组(共转染miR-217 inhibitor、siRNA control,60μmol·L^(-1)桃叶珊瑚苷处理)、anti-miR-217+si-DNMT1+高剂量实验组(共转染miR-217 in⁃hibitor、DNMT1 siRNA,60μmol·L^(-1)桃叶珊瑚苷处理)。以噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,以蛋白质印迹(Western blot)法检测DNMT1、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测miR-217表达。以荧光素酶报告系统鉴定miR-217和DNMT1的靶向关系。结果对照组、高剂量实验组、anti-miR-NC+高剂量实验组、anti-miR-217+高剂量实验组、anti-miR-217+si-NC+高剂量实验组、anti-miR-217+si-DNMT1+高剂量实验组瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖活性(OD值)分别为0.75±0.07,0.32±0.06,0.33±0.04,0.48±0.05,0.47±0.06,0.40±0.03,细胞凋亡率分别为(7.05±0.98)%,(18.92±1.20)%,(17.86±1.85)%,(12.56±1.32)%,(12.09±1.47)%,(16.28±1.58)%,PCNA蛋白表达量分别为0.89±0.09,0.27±0.03,0.28±0.05,0.44±0.06,0.45±0.05,0.30±0.04,Bax蛋白表达量分别为0.29±0.04,0.92±0.09,0.87±0.10,0.69±0.07,0.65±0.08,0.78±0. 展开更多
关键词 桃叶珊瑚苷 瘢痕疙瘩成纤维细胞 微小RNA-217(miR-217) dna甲基转移酶1(dnmt1) 凋亡 增殖
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玻璃化冷冻对乳鼠卵巢Dnmt1和Grb10的影响研究 被引量:2
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作者 王红燕 周雪 +7 位作者 王锐 王燕蓉 裴秀英 马良宏 颜贝 张帆 周岳 田稼 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期27-32,共6页
目的探索玻璃化冷冻对乳鼠卵巢Dnmt1和Grb10 mRNA和蛋白表达的影响。方法 26只出生10 d的C57BL/6雌性小鼠,每只乳鼠双侧卵巢均分成新鲜组和玻璃化冷冻组。免疫组织化学法检测Dnmt1蛋白在玻璃化冻融前、后卵巢组织卵泡中的表达变化;通过q... 目的探索玻璃化冷冻对乳鼠卵巢Dnmt1和Grb10 mRNA和蛋白表达的影响。方法 26只出生10 d的C57BL/6雌性小鼠,每只乳鼠双侧卵巢均分成新鲜组和玻璃化冷冻组。免疫组织化学法检测Dnmt1蛋白在玻璃化冻融前、后卵巢组织卵泡中的表达变化;通过qRT-PCR检测Dnmt1和Grb10 mRNA在玻璃化冻融前、后卵巢组织中的表达变化;通过Western blotting方法检测Dnmt1和Grb10蛋白在玻璃化冻融前后卵巢组织中的表达变化。结果 Dnmt1在玻璃化冻融前、后的乳鼠卵巢组织各级卵泡的颗粒细胞及卵母细胞胞核表达。与新鲜组相比,玻璃化冷冻组卵巢内Dnmt1蛋白和mRNA表达水平均显著下调(P<0.05);Grb10蛋白和mRNA表达水平均显著上调(P<0.05)。结论玻璃化冷冻复苏过程导致卵巢内Dnmt1表达降低,使印记基因Grb10过表达,可能使配子糖代谢性表观遗传信息紊乱的的风险增加。 展开更多
关键词 乳鼠卵巢 玻璃化冷冻 dna甲基转移酶1(dnmt1) 生长因子受体结合蛋白10(Grb10)
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DNMT1和p27蛋白在原发性与继发性胶质母细胞瘤中的表达及相关性 被引量:1
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作者 谭春雷 常亮 +5 位作者 苏君 王超 金华 李国夫 张东智 张学新 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2016年第6期504-507,共4页
目的探讨原发性胶质母细胞瘤和继发性胶质母细胞瘤中DNA甲基转移酶1(DNMT1)蛋白及p27蛋白的表达及相关性。方法收集2000年1月1日至2012年12月31日经手术切除胶质母细胞瘤患者组织蜡块标本64例(原发胶质母细胞瘤32例,继发性胶质母细胞瘤3... 目的探讨原发性胶质母细胞瘤和继发性胶质母细胞瘤中DNA甲基转移酶1(DNMT1)蛋白及p27蛋白的表达及相关性。方法收集2000年1月1日至2012年12月31日经手术切除胶质母细胞瘤患者组织蜡块标本64例(原发胶质母细胞瘤32例,继发性胶质母细胞瘤32例)作为研究对象。检测64例胶质母细胞瘤标本和13例正常脑组织中DNMT1蛋白及p27蛋白的表达情况。结果在正常脑组织中,DNMT1蛋白不表达,而在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的阳性表达率分别为59.4%和81.3%。在正常脑组织中,p27蛋白的阳性表达率为100.0%,高于其在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的50.0%和25.0%(P<0.05)。DNMT1蛋白及p27蛋白在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的表达差异存在统计学意义(P<0.05),但两者表达无相关性(r=0.41,P>0.05)。结论 DNMT1蛋白及p27蛋白在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的表达存在差异,联合检测肿瘤标本中两者的表达情况有助于判断不同类型胶质母细胞瘤。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 原发性 继发性 dna甲基转移酶1(dnmt1) P27
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siRNA沉默膀胱癌T24细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的研究
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作者 罗欣 李杰贤 +3 位作者 林宇峰 邹戈 姚伟祥 谢文练 《海南医学》 CAS 2012年第20期1-2,共2页
目的研究siRNA对膀胱癌细胞T24 DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的沉默作用。方法将筛选出的siRNA转染入膀胱癌T24细胞分为空白组、脂质体组、阴性对照组和siRNA组,分别运用RT-PCR、Western blot检测转染后不同时段DNMT1 mRNA水平、蛋白水平... 目的研究siRNA对膀胱癌细胞T24 DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的沉默作用。方法将筛选出的siRNA转染入膀胱癌T24细胞分为空白组、脂质体组、阴性对照组和siRNA组,分别运用RT-PCR、Western blot检测转染后不同时段DNMT1 mRNA水平、蛋白水平变化。结果筛选出的siRNA转染膀胱癌T24细胞DNMT1 24h开始出现mRNA减少,24h、48h、72h分别降至(66.05±4.87)%、(39.36±4.53)%和(40.86±4.81)%(P<0.05)。转染后24h、48h、72h蛋白水平分别降至(90.21±3.68)%、(71.45±3.44)%和(67.74±3.38)%(P<0.05)。结论 siRNA能有效地沉默膀胱癌细胞T24 DNMT1的表达。 展开更多
关键词 dna甲基转移酶1(dnmt1) 小分子RNA(siRNA) 膀胱癌细胞T24 逆转录聚合链反应
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宫颈病变组织中DNMT1和MeCP2异常表达与细胞生物学特征的相关性研究 被引量:2
9
作者 林薇 马莎 《海南医学院学报》 CAS 2016年第19期2258-2261,共4页
目的:研究宫颈病变组织中DNA甲基转移酶1(DNMT)1和甲基-CpG-结合蛋白2(methyl-CpO-bindingprotein2,MeCP2)异常表达与细胞生物学特征的相关性。方法:宫颈癌组织和癌旁组织取自2012年5月~2015年10月在我院接受手术治疗的宫颈癌... 目的:研究宫颈病变组织中DNA甲基转移酶1(DNMT)1和甲基-CpG-结合蛋白2(methyl-CpO-bindingprotein2,MeCP2)异常表达与细胞生物学特征的相关性。方法:宫颈癌组织和癌旁组织取自2012年5月~2015年10月在我院接受手术治疗的宫颈癌患者,测定HPV种类及DNMTs、MeCP2、PBK、TOPK、Snail、Slug、SALL4、CatL的表达量。结果:宫颈癌组织中DNMTl、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b、DNMT31、MeCP2的蛋白含量均显著高于癌旁组织(P〈0.05),其中以DNMT1表达量的升高趋势最为显著;高危型HPV感染宫颈癌组织中DNMT1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b、DNMT31、MeCP2的蛋白含量均显著高于普通型HPV感染的宫颈癌组织(P〈0.05);DNMT1和MeCP2高表达的宫颈癌组织中,PBK、TOPK、Snail、Slug、SALL4、CatL的含量显著高于DNMT1和MeCP2低表达的宫颈癌组织(P〈0.05)。结论:宫颈癌组织中DNMT1和MeCP2异常高表达可能通过增加甲基化水平上调多种恶性生物学分子的表达。 展开更多
关键词 宫颈癌 dna dna甲基转移酶1(dnmt)1 -CpG-结合蛋白2(MeCP2)
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