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利用DNA免疫法制备植物选择标记基因hpt表达蛋白抗体的研究 被引量：4
1
作者 杨丽琛 朱祯 杨晓光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期248-251,共4页
目的 :制备转基因作物中选择标记基因潮霉素B磷酸转移酶 (hygromycinBphosphotransferase,hpt)基因表达产物的多克隆抗体 ,并探讨影响核酸免疫效果的因素及相应机制。方法 :以hpt的cDNA全长插入真核表达载体 pCDNA3中 ,并经限制性内切... 目的 :制备转基因作物中选择标记基因潮霉素B磷酸转移酶 (hygromycinBphosphotransferase,hpt)基因表达产物的多克隆抗体 ,并探讨影响核酸免疫效果的因素及相应机制。方法 :以hpt的cDNA全长插入真核表达载体 pCDNA3中 ,并经限制性内切酶酶切及DNA测序鉴定。以纯化的重组质粒pCDNA3 HPT免疫BALB/c小鼠。用在E .coli中表达并纯化的 (His) 6 HPT进行ELISA ,检测免疫过程中小鼠血清抗体效价的增长状况 ,并用Westernblot检测抗血清的特异性。结果 :经 3次核酸免疫后 ,小鼠血清中未发现明显的抗HPT抗体。第 4次加强免疫时 ,将小鼠分为 3组 ,每组两只。第 1组改用去内毒素的质粒提取试剂盒提纯的重组质粒免疫 ,第2组用 (His) 6 HPT融合蛋白免疫 ,第 3组仍用原来提取的重组质粒免疫。结果发现 ,第 1组小鼠抗血清的效价有所上升 ,经ELISA检测达 1∶2 0 0 ;第 2组抗血清的滴度显著升高 ,达到 1∶2 0 0 0 ;而第 3组小鼠血清中仍未检测到明显的抗体。Westernblot证实 ,前两组抗血清均可与亲和层析纯化的GST HPT、(His) 6 HPT融合蛋白及其诱导表达的相应菌体总蛋白发生特异性结合。结论 :用DNA免疫法成功地制备了抗hpt基因表达产物的特异性抗体 ,但抗体效价不够理想。推测与hpt基因本身的性质及其在体内表达呈现的水? 展开更多
关键词 dna免疫法 hpt 多克隆抗体 安全性评价
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DNA免疫法制备抗鸡IL-4单克隆抗体
2
作者 戴华 闫加庆 +3 位作者 张海霞 徐正中 陈祥 焦新安 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2270-2274,共5页
为建立有效检测鸡IL-4(ChIL-4)的生物学方法,将重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-4作为免疫抗原,肌肉注射法免疫6周龄BALB/c小鼠,免疫的间隔时间为4周,共免疫5次;于加强免疫3次后,取免疫鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合。以His-ChIL-4为检... 为建立有效检测鸡IL-4(ChIL-4)的生物学方法,将重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-4作为免疫抗原,肌肉注射法免疫6周龄BALB/c小鼠,免疫的间隔时间为4周,共免疫5次;于加强免疫3次后,取免疫鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合。以His-ChIL-4为检测抗原,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞株;采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞株进行亚克隆,体内诱生腹水法大量制备腹水单抗;采用ELISA、Western blot法分析mAbs的特异性。结果本研究共获得3株抗ChIL-4mAbs:1C11、5C1和3E10,其亚类分别为IgM、IgM和IgG2a,腹水效价为(1.6~6.4)×104。间接ELISA及Western blot结果显示,所获得的mAbs均只识别重组ChIL-4,而不能识别其他无关抗原,表明所获得的3株mAbs均特异性针对ChIL-4。该mAbs的获得为建立检测ChIL-4的生物学方法及进一步研究ChIL-4的生物学功能提供了有效的生物材料。 展开更多
关键词 鸡IL-4 dna免疫法 ELISA 单克隆抗体
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分析DNA免疫吸附法结合西药治疗系统性红斑狼疮肾炎患者的效果
3
作者 牛影 黄晓琴 《中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生》 2023年第5期76-78,共3页
探讨分析选择DNA免疫吸附法结合西药治疗对系统性红斑狼疮肾炎患者进行治疗的效果。方法 研究在开展时,实验设置在2021年4月至2022年6月录入红斑狼疮肾炎患者400名进行研究,分为对照组(n=200)与实验组(n=200)。采用常规西药治疗方式,实... 探讨分析选择DNA免疫吸附法结合西药治疗对系统性红斑狼疮肾炎患者进行治疗的效果。方法 研究在开展时,实验设置在2021年4月至2022年6月录入红斑狼疮肾炎患者400名进行研究,分为对照组(n=200)与实验组(n=200)。采用常规西药治疗方式,实验组内患者则在此基础上配合应用DNA免疫吸附法进行治疗,治疗后评价疗效。结果 研究结果显示实验组患者的各项治疗指标优于对照组,差异对比显著存在(P<0.05)。结论 系统性红斑狼疮在临床上属于一种自身免疫性疾病,而由系统性红斑狼疮引发的肾炎,在临床上也较为常见,整体发病率较高,研究人员在进行患者的临床治疗时,应用西药进行常规治疗,并不能很好的使患者的肾功能得到改善,影响患者在治疗时的效果与安全性。本次研究通过对照实验证实了 DNA免疫吸附法联合西药应用于系统性红斑狼疮患者的治疗中,能够使患者的肾功能得到保护,对于改善患者的康复治疗来说有十分积极的作用。 展开更多
关键词 dna免疫吸附法 西药治疗 系统性红斑狼疮肾炎 甲泼尼龙 肾功能损伤
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佛波酯对人胃癌细胞Ha-ras基因启动子及启动子结合蛋白的影响
4
作者 高萍 王永军 柳惠图 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期62-65,共4页
目的探讨佛波酯(PMA)对人胃癌细胞BGC-823 Ha-ras基因启动子活性及启动子结合蛋白活性的影响。方法通过RT-PCR和运用自行构建的真核表达载体prasEYFP转染细胞进行荧光细胞检测,并应用凝胶电泳移动检测S、outhwestern blotting等方法检测... 目的探讨佛波酯(PMA)对人胃癌细胞BGC-823 Ha-ras基因启动子活性及启动子结合蛋白活性的影响。方法通过RT-PCR和运用自行构建的真核表达载体prasEYFP转染细胞进行荧光细胞检测,并应用凝胶电泳移动检测S、outhwestern blotting等方法检测PMA(100μg/L)处理BGC-823细胞72和96 h后,对Ha-ras基因表达水平、Ha-ras基因启动子活性以及对Ha-ras启动子结合蛋白的影响。结果经PMA(100μg/L)处理72和96 h,与未处理细胞相比,BGC-823细胞中Ha-ras基因表达显著降低,Ha-ras基因启动子活性分别被抑制65.2%和71.8%;同时两个Ha-ras启动子结合蛋白活性也显著降低,经检测,其分子量分别约为18 kD,35 kD。结论PMA长期处理通过降低人胃癌细胞中Ha-ras启动子结合蛋白活性使Ha-ras启动子活性被抑制,从而在转录水平上调节Ha-ras基因表达。 展开更多
关键词 佛波酯 Ha—ras基因 Ha—ras基因启动子与结合蛋白 人胃癌细胞BGC-823 凝胶电泳移动检测 dna免疫印迹法
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