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应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA的结合蛋白 被引量:10
1
作者 巨立中 钟彦伟 +2 位作者 成军 王建军 洪源 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2003年第6期360-362,共3页
目的:筛选丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA结合蛋白,探索HCTP4基因的表达调控机制。方法:应用噬菌体表面展示技术,以多聚酶链反应(PCR)技术扩增的HCTP4启动子DNA片段作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进... 目的:筛选丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA结合蛋白,探索HCTP4基因的表达调控机制。方法:应用噬菌体表面展示技术,以多聚酶链反应(PCR)技术扩增的HCTP4启动子DNA片段作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”富集过程,噬斑裂解液PCR扩增后,回收产物并进行克隆化,对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索。结果:噬菌体经富集后,筛选出12个阳性克隆,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索,确定了与HCV核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA结合的蛋白有:核糖体蛋白L15、视网膜母细胞瘤结合蛋白8。结论:用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HCV核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA结合蛋白,分析了这些蛋白的功能,为研究HCTP4的生物学调节机制,进一步阐明HCV核心蛋白的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 分子生物学 噬菌体展示技术 丙型肝炎病毒 启动子 dna结合蛋白 克隆
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Identification of a novel DNA-binding protein to osmotin promoter 被引量:7
2
作者 徐平 凌建群 李德葆 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 1998年第6期657-663,共7页
One novel osmotin promoter, binding_protein (OPBP1) gene, was isolated from salt adapted tobacco suspension cells using yeast one hybrid system. The OPBP1 interacted specifically in vivo with FA, a DNA sequence from t... One novel osmotin promoter, binding_protein (OPBP1) gene, was isolated from salt adapted tobacco suspension cells using yeast one hybrid system. The OPBP1 interacted specifically in vivo with FA, a DNA sequence from the 5′ upstream region of osmotin gene, which was essential for osmotin responsiveness. The deduced amino acid sequence of OPBP1 contained a conserved motif of a new gene family, AP2 family. This protein did not contain the typical motif found in the most known DNA binding proteins and transcription factors. 展开更多
关键词 OSMOTIN dna binding protein ONE hybrid screen.
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水稻cDNAc73片段在大肠杆菌中的表达及其产物的纯化 被引量:4
3
作者 唐威华 仇子龙 +2 位作者 王宗阳 张景六 洪孟民 《植物生理学报(0257-4829)》 CSCD 1999年第4期401-407,共7页
曾以水稻蜡质基因5’调控区内一段31 bp 片段为探针,用酵母单杂交法从水稻cDNA 文库中筛选出若干个其编码的蛋白可能与此31 bp 片段结合的cDNA克隆,现将其中的pC73 克隆中的插入片段c73 连接到含His6 的... 曾以水稻蜡质基因5’调控区内一段31 bp 片段为探针,用酵母单杂交法从水稻cDNA 文库中筛选出若干个其编码的蛋白可能与此31 bp 片段结合的cDNA克隆,现将其中的pC73 克隆中的插入片段c73 连接到含His6 的表达载体pET28c( + ) 上,在大肠杆菌BL21(DE3) 中进行诱导表达,并用NiNTA 树脂纯化得到预期的融合表达产物。在合适的诱导表达条件下,融合表达产物主要以可溶形式存在于大肠杆菌细胞内;表达量占到大肠杆菌总蛋白的10 % 左右;经NiNTA 树脂亲和层析纯化得到的产物纯度达95 % ,可供进一步研究之用。 展开更多
关键词 水稻 转录因子 dna结合蛋白 His6融合表达
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鲫鱼PKR-like Zα与d(GC)_(13)质粒的结合及其适应性进化 被引量:6
4
作者 陶敏 吴初新 +1 位作者 杨攀 胡成钰 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期494-498,共5页
Zα是一类能特异性识别与结合左旋DNA(Z-DNA)的蛋白质结构域,分布于不同物种的多种蛋白质中,其结构保守并分化自一个共同的祖先Z-结构域。适应性进化分析显示Zα没有经历正达尔文选择,表明与其结构对应Zα的功能相当保守。凝胶阻滞试验... Zα是一类能特异性识别与结合左旋DNA(Z-DNA)的蛋白质结构域,分布于不同物种的多种蛋白质中,其结构保守并分化自一个共同的祖先Z-结构域。适应性进化分析显示Zα没有经历正达尔文选择,表明与其结构对应Zα的功能相当保守。凝胶阻滞试验表明原核表达的鲫鱼PKR-like Zα多肽(CaPZα)不与pMD18-T质粒结合,而却能与包含d(GC)13的重组质粒pMD18-T/(GC)13结合。同时,与ADAR1Zα相比,CaPZα与d(GC)13质粒的结合能力较弱,即CaPZα1和CaPZα2子域单独不能结合d(GC)13质粒。这表明Zα功能虽然没有异化,但有很大的不同。实验结果还表明负超螺旋和d(GC)n可能都是正常生理条件下,DNA形成潜在Z-DNA必不可少的因素。定点突变试验证实38N与60W两个氨基酸位点对于CaPZα结合Z-DNA非常关键。 展开更多
关键词 PKR-like d(GC)n 适应性进化 Z-dna结合蛋白
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亲和层析法分离鉴定人类端粒酶复合体及其蛋白质组分分析 被引量:3
5
作者 周俊宜 罗超权 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第5期574-579,共6页
为分离纯化人类端粒酶复合体并对其蛋白质组分进行分析 ,自行设计一套特异的以端粒重复序列为配体 ,以亲和磁珠为介质 ,以竞争性碱基序列为洗脱原则的寡核苷酸亲和纯化法 ,对He La细胞端粒酶复合体进行分离纯化 .并采用近年发展起来的... 为分离纯化人类端粒酶复合体并对其蛋白质组分进行分析 ,自行设计一套特异的以端粒重复序列为配体 ,以亲和磁珠为介质 ,以竞争性碱基序列为洗脱原则的寡核苷酸亲和纯化法 ,对He La细胞端粒酶复合体进行分离纯化 .并采用近年发展起来的主要用于检测序列特异性 DNA结合蛋白的凝胶迁移阻滞分析法对纯化产物进行鉴定分析 .应用 SDS- PAGE对纯化蛋白质亚基组分进行分析与鉴定 ,并采用电泳迁移率和已知蛋白质分子质量标准的对数作图分析测得所得蛋白质亚基成分的相对分子质量 .结果表明 ,纯化产物以 TRAP法检测酶活性可见典型的梯形条带 ;比活性为每 mg蛋白质的 cpm值为 1 80× 1 0 9,纯化倍数 1 80 0 ,得率 90 % .凝胶迁移阻滞法分析显示特异的凝胶迁移阻滞性电泳条带 ;以 SDS- PAGE检测得到 4种蛋白质亚基成分 ,其蛋白质相对分子质量分别为 2 2 0 ku、2 1 2 ku、1 1 6ku和 43ku.由上述可见 ,采用自行设计的寡核苷酸亲和纯化法获得了人端粒酶复合体及 4种蛋白质亚基组分 . 展开更多
关键词 人类端粒酶 蛋白质组分 亲和层析 分离 鉴定
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环磷酸腺苷反应元件结合蛋白在吗啡依赖及戒断大鼠脑区的表达 被引量:1
6
作者 李国海 姜厚壁 +1 位作者 俞俊洪 黄明生 《中华精神科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期34-36,共3页
目的 研究吗啡依赖及吗啡戒断时环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 (CREB)在大鼠脑内的表达。方法 将 1 5只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为正常对照组、吗啡依赖组和吗啡戒断组 ,每组各 5只。于大鼠背部皮下注射吗啡 ,第 1天注射 2 0mg/kg ... 目的 研究吗啡依赖及吗啡戒断时环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 (CREB)在大鼠脑内的表达。方法 将 1 5只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为正常对照组、吗啡依赖组和吗啡戒断组 ,每组各 5只。于大鼠背部皮下注射吗啡 ,第 1天注射 2 0mg/kg ,逐日递增剂量 ,至第 5天达 1 0 0mg/kg ,形成大鼠吗啡依赖模型。吗啡戒断组大鼠在末次注射吗啡后 1 6h皮下注射纳洛酮 1mg/kg。采用免疫印迹法观察各组大鼠的前额叶皮质、伏隔核和海马等脑区CREB的表达。结果  (1 )在前额叶皮质 ,吗啡依赖组和吗啡戒断组CREB的含量 (为相对光密度值 )分别为 [(1 31± 1 1 ) % ]和 [(1 33± 1 5) % ] ,均高于正常对照组 [(1 0 0± 1 4 ) % ] ,差异有显著性 (P <0 0 5) ;(2 )在伏隔核 ,三组CREB的差异无显著性(P >0 0 5) ;(3)在海马 ,吗啡戒断组CREB的含量 [(1 4 1± 1 8) % ]高于正常对照组 [(1 0 0± 1 4 ) % ] ,差异有非常显著性 (P <0 0 1 )。结论 大鼠处于吗啡依赖和戒断时CREB的表达在前额叶皮质和海马发生改变 。 展开更多
关键词 dna结合蛋白质 环AMP反应性 吗啡依赖 大鼠 SPRAGUE-DAWLEY 免疫印迹法
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糖尿病肾病中Notch信号通路调控机制的研究进展 被引量:1
7
作者 王乐 陈骅 《分子诊断与治疗杂志》 2023年第3期361-363,372,共4页
Notch信号通路为生物细胞重要的信息通路,在生物的进化过程起关键作用。近年来,肾脏病领域的研究证实Notch信号通路与糖尿病肾病有关,参与肾间质纤维化、肾小球硬化的发生。本文以理论探析为研究方法,以既往文献及报道为核心数据,旨在介... Notch信号通路为生物细胞重要的信息通路,在生物的进化过程起关键作用。近年来,肾脏病领域的研究证实Notch信号通路与糖尿病肾病有关,参与肾间质纤维化、肾小球硬化的发生。本文以理论探析为研究方法,以既往文献及报道为核心数据,旨在介绍Notch信号通路在糖尿病肾病的调控机制,为创新糖尿病肾病理论提供依据。 展开更多
关键词 NOTCH信号通路 糖尿病肾病 Notch受体 dna结合蛋白
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应用Southwestern印迹技术和原位杂交技术对大鼠DNA结合蛋白的研究 被引量:4
8
作者 丁一 吴景兰 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期85-90,共6页
用Southwestern印迹技术和原位杂交技术,对大鼠肝细胞DNA结合蛋白(DBP)的组成成分、大鼠周围血白细胞、腹腔肥大细胞和肝细胞的DBP形态学定位进行了研究。结果表明,以λDNA探针检测的肝细胞核和胞质的DB... 用Southwestern印迹技术和原位杂交技术,对大鼠肝细胞DNA结合蛋白(DBP)的组成成分、大鼠周围血白细胞、腹腔肥大细胞和肝细胞的DBP形态学定位进行了研究。结果表明,以λDNA探针检测的肝细胞核和胞质的DBP均比鼠DNA探针检测的信号强,提示λDNA较鼠DNA具有较多的DBP结合位点。这两种探针所检测的DBP,除分子量较高和较低的DBP仅位于胞核以外,胞核和胞质中所含的DBP分子量相似。提示胞核和胞质的DBP具有同源性,可能通过DBP的移位而调控基因转录活性。大鼠白细胞和肥大细胞的DBP可与内源性DNA结合,也可与外源性λDNA结合。这两种细胞的DBP主要定位于胞膜和胞质。提示白细胞和肥大细胞的DBP可作为DNA受体,分别接受血源性和腹腔液源性DNA的遗传信息而影响基因表达。与游离的白细胞和肥大细胞相比较,非游离的大鼠肝细胞DBP与内源性DNA结合较少,仅定位于近血窦胞质和部分胞核内,但具有与标记的鼠DNA或λDNA结合的潜能。以上结果提示,DBP在通过微环境而调节基因的表达中可能起介导作用。 展开更多
关键词 dna 结合蛋白 SOUTHWESTERN 原位杂交 印迹技术
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三链DNA的形成抑制DNA结合蛋白与启动子的结合 被引量:3
9
作者 刘定燮 王昌才 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第3期262-266,共5页
电泳迁移分析方法及DNaseⅠ足迹实验表明21nt脱氧寡核苷酸G3TG2TGT2G5TG2TGT(CP1)与乙肝病毒(HBV)核心启动子(Cp)片段之间三链DNA的形成有较高的特异性及稳定性.凝胶滞留实验显示,在大鼠... 电泳迁移分析方法及DNaseⅠ足迹实验表明21nt脱氧寡核苷酸G3TG2TGT2G5TG2TGT(CP1)与乙肝病毒(HBV)核心启动子(Cp)片段之间三链DNA的形成有较高的特异性及稳定性.凝胶滞留实验显示,在大鼠肝细胞核提取物体外转录系统中,CP1可特异地抑制DNA结合蛋白与Cp片段的结合,而不能与Cp结合形成三链DNA的脱氧寡核苷酸CP3(TGTG2TG5T2GTG2TG3)对蛋白与Cp的结合并无抑制作用.这些结果表明,三链DNA的形成有可能抑制HBVDNA的转录. 展开更多
关键词 三链dna dna 结合蛋白 启动子 乙型肝炎病毒
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Z-DNA及其生物学功能 被引量:3
10
作者 汤雅男 杨攀 胡成钰 《生命科学》 CSCD 北大核心 2009年第1期72-75,共4页
Z-DNA是一种处于高能状态、不稳定的DNA分子构象。形成Z-DNA的原因有很多:首先,转录过程中,移动的RNA聚合酶在模板DNA的5'端产生负超螺旋扭曲力,导致Z-DNA的形成;其次,含有d(GC)n序列的核酸分子在高浓度的NaCl、[Co(NH3)6]2+盐溶液... Z-DNA是一种处于高能状态、不稳定的DNA分子构象。形成Z-DNA的原因有很多:首先,转录过程中,移动的RNA聚合酶在模板DNA的5'端产生负超螺旋扭曲力,导致Z-DNA的形成;其次,含有d(GC)n序列的核酸分子在高浓度的NaCl、[Co(NH3)6]2+盐溶液中也能够形成Z-DNA;最后,化学修饰也可以使DNA产生稳定的Z-DNA。Z-DNA是在体外首先发现的,但随着研究的不断深入,发现Z-DNA在体内也广泛存在并可能具有功能的多样性,包括参与基因表达调控、染色体断裂、基因重组、抗病毒、病毒发生等生物学过程。 展开更多
关键词 Z-dna 基因表达 Z-dna结合蛋白 干扰素系统
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毛细管电泳技术分析PDGF-B基因启动子与蛋白质的复合物 被引量:2
11
作者 樊兴君 刘静 +1 位作者 金由辛 王德宝 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期170-172,共3页
利用 1.0 %T ,0 %C的线性聚丙烯酰胺 (即丙烯酰胺和双丙烯酰胺的总质量分数是 1.0 % ,交联度为 0 % )作为筛分介质 ,对人体血小板长生因子 (PDGF) B基因启动子与核蛋白形成的复合物进行了分析。结果显示主要有两种核蛋白与PDGF B基因... 利用 1.0 %T ,0 %C的线性聚丙烯酰胺 (即丙烯酰胺和双丙烯酰胺的总质量分数是 1.0 % ,交联度为 0 % )作为筛分介质 ,对人体血小板长生因子 (PDGF) B基因启动子与核蛋白形成的复合物进行了分析。结果显示主要有两种核蛋白与PDGF B基因启动子具有较强的结合能力 ,能形成DNA蛋白质复合物。所得结论与传统凝胶电泳相似。该方法具有较高的分离度和良好的重现性 ,整个分析可在 5 0min内完成。该方法不失为一种基于PDGF为研究目标、用于PDGF与蛋白质复合物形成及抑制行为分析的快速、准确的实用方法。 展开更多
关键词 毛细管电泳 dna结合蛋白 PDGF-B基因启动子 核蛋白 复合物 分析
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耻垢分枝杆菌宿主整合因子(IHF)对DNA拓扑结构的影响 被引量:2
12
作者 陈媛媛 张先恩 毕利军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1110-1117,共8页
结核分枝杆菌(Mycobaterium tuberculosis)是结核病的病原菌,每年导致数百万人死亡.对于分枝杆菌基本生物学特性的研究有助于新的药物及治疗手段的研发.耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)是分枝杆菌属中的一种非致病菌,与结核分枝杆菌亲缘关系... 结核分枝杆菌(Mycobaterium tuberculosis)是结核病的病原菌,每年导致数百万人死亡.对于分枝杆菌基本生物学特性的研究有助于新的药物及治疗手段的研发.耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)是分枝杆菌属中的一种非致病菌,与结核分枝杆菌亲缘关系较近,是实验室常用的研究分枝杆菌的模式菌种.分枝杆菌主要编码三种染色质蛋白,类组蛋白HU、Lsr2和宿主整合因子IHF.为研究IHF在染色体包装中的作用,我们在大肠杆菌中表达、纯化了耻垢分枝杆菌IHF蛋白(MsIHF),并对其影响DNA拓扑结构的性质进行了系统分析.体外研究的结果表明,MsIHF以同二聚体的形式存在,其对负超螺旋DNA具有一定的结合偏好性,同时,该蛋白可以有效地固定DNA负超螺旋.进一步的研究表明,MsIHF可以调控拓扑异构酶的活性.MsIHF的结合明显地抑制拓扑异构酶Ⅰ的松弛活性,而与此相反,该蛋白可以轻微地促进旋转酶引入DNA负超螺旋的能力.以上结果提示,MsIHF可能通过调控拓扑异构酶的活性影响染色体DNA的结构,进而调控其包装. 展开更多
关键词 分枝杆菌 宿主整合因子 dna结合蛋白 dna超螺旋 dna拓扑异构酶
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红藻氨酸癫痫大鼠海马GFAP基因调控蛋白表达的变化 被引量:3
13
作者 姜春玲 黄敏 +1 位作者 安晓飞 张万琴 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期360-362,共3页
目的和方法 :用Southwestern印迹从红藻氨酸 (KA)癫痫大鼠海马结构中筛选调控胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)基因表达的DNA结合蛋白 ;并观察其在海马内表达变化的规律 ,旨在从基因调控水平深入探讨癫痫反复发作形成的神经病理学机制。结果 :... 目的和方法 :用Southwestern印迹从红藻氨酸 (KA)癫痫大鼠海马结构中筛选调控胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)基因表达的DNA结合蛋白 ;并观察其在海马内表达变化的规律 ,旨在从基因调控水平深入探讨癫痫反复发作形成的神经病理学机制。结果 :Southwestern印迹的实验显示海马结构内有两种调控GFAP基因表达的序列特异的DNA结合蛋白 ,分子量分别为 39kDa和 35 .5kDa ;KA后 1d ,两种调控蛋白的表达即开始增加 ,5~ 7d时表达显著增加 ,3周时表达最多 ,3个月时表达仍很高。结论 :KA通过上调调控GFAP基因表达的转录因子 ,使海马GFAP过量表达 。 展开更多
关键词 癫痫反复发作 海马 GFAP基因 dna结合蛋白 调控
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Zinc finger structure-function in Ikaros 被引量:2
14
作者 Marvin A Payne 《World Journal of Biological Chemistry》 CAS 2011年第6期161-166,共6页
The zinc finger motif was used as a vehicle for the initial discovery of Ikaros in the context of T-cell differentiation and has been central to all subsequent analyses of Ikaros function.The Ikaros gene is alternatel... The zinc finger motif was used as a vehicle for the initial discovery of Ikaros in the context of T-cell differentiation and has been central to all subsequent analyses of Ikaros function.The Ikaros gene is alternately spliced to produce several isoforms that confer diversity of function and consequently have complicated analysis of the function of Ikaros in vivo.Key features of Ikaros in vivo function are associated with six C2H2 zinc fingers;four of which are alternately incorporated in the production of the various Ikaros isoforms.Although no complete structures are available for the Ikaros protein or any of its family members,considerable evidence has accumulated about the structure of zinc fingers and the role that this structure plays in the functions of the Ikaros family of proteins.This review summarizes the structural aspects of Ikaros zinc fingers,individually,and in tandem to provide a structural context for Ikaros function and to provide a structural basis to inform the design of future experiments with Ikaros and its family members. 展开更多
关键词 IKAROS Zinc FINGER dna binding protein TRANSCRIPTION factor ⅢA C2H2 TANDEM
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芝田硫化叶菌ssh7a和ssh7b基因在大肠杆菌中的表达及重组蛋白的性质 被引量:2
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作者 陈绪林 唐玉秋 黄力 《微生物学报》 CSCD 北大核心 2000年第4期359-364,共6页
极端嗜热古菌———芝田硫化叶菌DNA结合蛋白Ssh7a和Ssh7b的编码基因 (ssh7a和ssh7b)在大肠杆菌中得到表达 ,表达量均达到细胞蛋白总量的 1 0 %~ 1 5%。重组蛋白通过一个包括热处理步骤的简单纯化程序得到纯化。重组Ssh7a和Ssh7b与松... 极端嗜热古菌———芝田硫化叶菌DNA结合蛋白Ssh7a和Ssh7b的编码基因 (ssh7a和ssh7b)在大肠杆菌中得到表达 ,表达量均达到细胞蛋白总量的 1 0 %~ 1 5%。重组蛋白通过一个包括热处理步骤的简单纯化程序得到纯化。重组Ssh7a和Ssh7b与松弛及负超螺旋DNA的结合与天然Ssh7蛋白无异 ,与天然Ssh7相似 ,Ssh7a在与DNA结合时能够固定负超螺旋 ,每固定一个负超螺旋约需 2 2个Ssh7a分子。这些结果表明天然Ssh7蛋白中的两个同源多肽与DNA结合时无明显差异。另外 ,Ssh7的甲基化与否似乎不影响该蛋白对DNA的亲和力及固定DNA超螺旋的能力。 展开更多
关键词 硫化叶菌 dna结合蛋白 基因表达 dna超螺旋
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DNA结合蛋白A在结直肠癌组织和细胞中的表达及其临床意义 被引量:3
16
作者 刘瑞廷 王国荣 +4 位作者 邱健 王小强 阎立昆 李小军 刘昌 《肿瘤研究与临床》 CAS 2015年第8期505-509,514,共6页
目的 研究DNA结合蛋白A(dbpA)基因在结直肠癌组织和细胞中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测60例结直肠癌患者癌组织及癌旁正常结直肠黏膜组织中dbpA蛋白的表达,采用免疫荧光及反转录PCR法检测结直肠黏膜上皮细胞系FH... 目的 研究DNA结合蛋白A(dbpA)基因在结直肠癌组织和细胞中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测60例结直肠癌患者癌组织及癌旁正常结直肠黏膜组织中dbpA蛋白的表达,采用免疫荧光及反转录PCR法检测结直肠黏膜上皮细胞系FHC、人结直肠腺癌细胞系SW480、RKO、SW620、DLD-1、HT-29、SW1463及患者癌组织、癌旁组织中dbpA mRNA表达,Western blot法检测结直肠癌组织及细胞中蛋白的表达变化.结果 在正常结直肠组织中dbpA蛋白和mRNA无表达或低表达,在结直肠癌组织中dbpA表达明显增高.结直肠癌中dbpA mRNA阳性表达率升高,分别为80.0%(48/60)、10.0%(6/60),dbpA蛋白阳性表达率升高,分别为83.3%(50/60)、10.0%(6/60),差异均有统计学意义(P<0.01).在FHC细胞中dbpA无表达,在6株结直肠癌细胞中,dbpA不同程度高表达(P<0.05).dbpA高表达与结直肠癌浸润深度、淋巴结转移、组织学分型及脉管侵犯相关(P<0.05),dbpA高表达组预后较差(P<0.05).结论 dbpA的升高可能在结直肠癌的发生发展中起重要作用,可能是结直肠癌的一个预后指标。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 免疫组织化学 反转录聚合酶链反应 印迹法 蛋白质
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番茄丛矮病毒组(Tombusviruses)成员外壳蛋白是一种单双链DNA结合蛋白 被引量:2
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作者 李毅 魏春红 +1 位作者 潘乃穟 陈章良 《应用基础与工程科学学报》 EI CSCD 1994年第Z1期117-123,共7页
应用South-western技术以番茄丛矮病毒组(tombusvirus)6种病毒为材料研究了它们的外壳蛋白对单双链DNA的结合作用。结果表明tombus-组6种病毒(PLCV,AMCV,CNV,CyRSV,PAMV,TBSV)的外壳蛋白及PLCV重组外壳蛋白是一种单双链DNA结合蛋白,对单... 应用South-western技术以番茄丛矮病毒组(tombusvirus)6种病毒为材料研究了它们的外壳蛋白对单双链DNA的结合作用。结果表明tombus-组6种病毒(PLCV,AMCV,CNV,CyRSV,PAMV,TBSV)的外壳蛋白及PLCV重组外壳蛋白是一种单双链DNA结合蛋白,对单链DNA的结合能力远远超过双链DNA。这种结合作用可能与在tombus一组病毒外壳蛋白立体空间结构有关,因为当蛋白变性时结合作用大大降低。另外,一旦外壳蛋白与单链DNA发生相互作用,用4moL/L尿素或0.1%SDS在90°C水浴中难以洗掉。Tombus一组病毒外壳蛋白这种对单双链DNA的结合作用可能表明它们是一种参与病毒体内运输或调节复制的蛋白。 展开更多
关键词 番茄丛矮病毒组 外壳蛋白 dna结合蛋白
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丙型肝炎病毒核心蛋白DNA结合区的测定 被引量:2
18
作者 关德玉 伊达孝保 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2001年第3期160-162,共3页
目的 阐明丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的DNA结合特性及其意义。方法 在大肠杆菌中表达谷胱甘肽转移酶(GST)融合HCV核心蛋白不同长度片段,并进行纯化。经聚丙烯酸胺凝胶电泳后,通过更换缓冲液的方法将这些蛋白片段相对... 目的 阐明丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的DNA结合特性及其意义。方法 在大肠杆菌中表达谷胱甘肽转移酶(GST)融合HCV核心蛋白不同长度片段,并进行纯化。经聚丙烯酸胺凝胶电泳后,通过更换缓冲液的方法将这些蛋白片段相对固定在凝胶中,用r-32P[4667-00091]ATP标记人工合成的DNA进行2次电泳,通过放射自显影检测核心蛋白的DNA结合区。结果 HCV核心蛋白N端第10~16位氨基酸残基和第46~70位氨基酸残基可独立地结合DNA,核心蛋白既能和单链DNA结合又能和双链DNA结合,对单双链DNA的结合域相同。对所结合的DNA序列无选择性。结论 HCV核心蛋白的N端含有两个DNA结合区,结合区序列与核内转移信号的部分重迭以及对结合靶DNA序列的非选择性可能是HCV核心蛋白具有多功能的基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 dna结合蛋白 病毒核心蛋白
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鸡减蛋综合征病毒DNA结合蛋白的基因结构及同源分析 被引量:2
19
作者 曾力宇 金奇 +4 位作者 章金钢 李茂祥 姚二梅 殷震 侯云德 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期423-426,共4页
从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒(EDSV)AA-2株,经常规方法提取其病毒核酸后,构建了限制性内切酶PstⅠ及HindⅢ水解片段的基因文库。对其中HindⅢ-F片段(52.9~58.9mu)的正反2条链的序列... 从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒(EDSV)AA-2株,经常规方法提取其病毒核酸后,构建了限制性内切酶PstⅠ及HindⅢ水解片段的基因文库。对其中HindⅢ-F片段(52.9~58.9mu)的正反2条链的序列测定发现,其反链存在1个编码容量为387个氨基酸(aa)的开放读码框架(openreadingframe,ORF),经Genebank/EMBL同源搜寻后证实其编码产物为EDSV的DNA结合蛋白(DBP)。与其他腺病毒DBP的氨基酸序列进行同源比较,其N端同源性在19.0%~46.2%之间,C端同源性在27.7%~60.4%之间。腺病毒DBP的3个保守序列CR1,CR2,CR3在EDSVDBP中有较大变化,但EDSVDBP的锌指框架(Zn2+fingermotif)却保留了对其功能必需的残基。 展开更多
关键词 鸡减蛋综合征 病毒 dna结合蛋白 核苷酸序列
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应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5A-TP9启动子DNA的结合蛋白 被引量:2
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作者 巨立中 钟彦伟 成军 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2003年第6期363-365,共3页
目的:筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5A-TP9启动子DNA结合蛋白,探索NS5A-TP9的表达调节机制。方法:应用噬菌体展示技术,以聚合酶链反应(PCR)技术扩增的NS5A-TP9启动子DNA片段作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDN... 目的:筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5A-TP9启动子DNA结合蛋白,探索NS5A-TP9的表达调节机制。方法:应用噬菌体展示技术,以聚合酶链反应(PCR)技术扩增的NS5A-TP9启动子DNA片段作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”富集过程,噬斑裂解液PCR扩增后,回收产物构建克隆载体,对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性生物信息学搜索。结果:噬菌体经富集后,筛选出10个阳性克隆,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索,确定了与HCV非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5A-TP9启动子DNA结合的蛋白有:补体C3、甲胎蛋白、人血清白蛋白、人核糖体蛋白20S和α1微球蛋白。结论:用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HCV NS5A蛋白反式激活基因NS5A-TP9启动子DNA结合蛋白,分析了这些蛋白的功能,为研究NS5A-TP9基因的转录调节机制,进一步阐明HCV非结构蛋白NS5A的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 丙型肝炎病毒 非结构蛋白 反式激活基因 启动子 dna结合蛋白 PCR
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