用人肝细胞cDNA文库制备Dig-Fas探针 被引量：13

1

作者 唐恩洁 杨宗琪 +5 位作者 赵明才 冯莉 任碧轩 敬保迁 李仁 眭维耻 《川北医学院学报》 CAS 2000年第3期1-3,共3页

为探索SLE发生、发展与Fas表达的关系 ,本文采用降落PCR技术、分子克隆技术和Fas特异性引物 ,将从人肝细胞cDNA文库中扩增的FascDNA插入T -easyvector中 ,转染JM10 9,经耐药性和lacZ插入失活筛选 ,快速细胞裂解法、限制性内切酶酶切片段... 为探索SLE发生、发展与Fas表达的关系 ,本文采用降落PCR技术、分子克隆技术和Fas特异性引物 ,将从人肝细胞cDNA文库中扩增的FascDNA插入T -easyvector中 ,转染JM10 9,经耐药性和lacZ插入失活筛选 ,快速细胞裂解法、限制性内切酶酶切片段和PCR扩增试验分析鉴定 ,确证获阳性转化子。然后采用地高辛化学连接标记和查见方法 ,标记扩增、分离和纯化的FascDNA ,经斑点免疫实验证实获高滴度Dig 展开更多

关键词 FAS CDNA文库 dig标记 探针 PCR 系统性红斑狼疮

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基于DIG-化学发光法的Southern blot方法优化 被引量：4

2

作者 张晓 张锐 +5 位作者 于源华 史计 孟志刚 孙国清 周焘 郭三堆 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期205-210,共6页

目前,基于DIG-化学发光法的Southern blot技术已在生物实验室广泛应用,但在试验过程中经常会遇到背景黑、目的信号弱等问题,以致不能获得理想结果。在棉花线粒体基因组RFLP分析过程中结合前人经验对基于DIG-化学发光法的Southern blot... 目前,基于DIG-化学发光法的Southern blot技术已在生物实验室广泛应用,但在试验过程中经常会遇到背景黑、目的信号弱等问题,以致不能获得理想结果。在棉花线粒体基因组RFLP分析过程中结合前人经验对基于DIG-化学发光法的Southern blot技术在探针标记、探针浓度、探针剥离等方面进行了优化。优化后的方法重复性好,一张转好的尼龙膜最多可以反复使用11次;一份杂交液在两年内至少可以反复使用5次且不会明显降低杂交效果。 展开更多

关键词 SOUTHERN BLOT dig标记 化学发光法 尼龙膜 探针

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v-sis表达在脑肿瘤中的作用 被引量：3

3

作者 刘乃国 刘希贤 +1 位作者 张卫群 刘云启 《滨州医学院学报》 1997年第4期317-318,共2页

为探讨ｖ－ｓｉｓ表达在脑肿瘤中的作用，我们用Ｄｉｇ标记探针，用原位杂交结合图像分析的方法对２８例脑膜瘤和３０例胶质瘤中的ｖ－ｓｉｓｍＲＮＡ表达进行定位、定量分析。结果表明：ｖ－ｓｉｓｍＲＮＡ在脑膜瘤和胶质瘤中的阳性表... 为探讨ｖ－ｓｉｓ表达在脑肿瘤中的作用，我们用Ｄｉｇ标记探针，用原位杂交结合图像分析的方法对２８例脑膜瘤和３０例胶质瘤中的ｖ－ｓｉｓｍＲＮＡ表达进行定位、定量分析。结果表明：ｖ－ｓｉｓｍＲＮＡ在脑膜瘤和胶质瘤中的阳性表达率分别为６０．７％和７０％。经ｔ检验，两种脑瘤中ｖ－ｓｉｓ表达明显高于正常脑组织中的表达（Ｐ＜０．０１）。说明ＰＤＧＦ／ＰＤＧＦＲ自泌刺激环路在脑瘤的发生、发展中具有重要作用。 展开更多

关键词 v-sis 脑肿瘤 dig标记 原位杂交

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光敏生物素和DIG标记Orf病毒DNA探针的研究 被引量：3

4

作者 王廷璞 赵菲佚 +1 位作者 孙春香 党岩 《生物技术》 CAS CSCD 2002年第6期21-23,共3页

目的 :是用于Orf病毒病的诊断和相应重组菌的检测 ,将HCEDNAHindⅢ A、B片断及重组质粒pGRL - 4A中消化的A片断用光敏生物素和地高辛进行标记 ,对不同病毒分离株DNA进行检测 ,并对不同重组质粒进行了Dot-blotting和Southern -blotting... 目的 :是用于Orf病毒病的诊断和相应重组菌的检测 ,将HCEDNAHindⅢ A、B片断及重组质粒pGRL - 4A中消化的A片断用光敏生物素和地高辛进行标记 ,对不同病毒分离株DNA进行检测 ,并对不同重组质粒进行了Dot-blotting和Southern -blotting检测。结果 :用光敏生物素标记的探针最低可检出 1 2pg的DNA ,地高辛标记的探针最低可检出 0 1pg的DNA ,且有极强的特异性。 展开更多

关键词 羊传染性脓疱病毒 光敏生物素 dig标记 Orf病毒 DNA探针

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DIG标记罗非鱼DNA指纹图谱研究 被引量：2

5

作者 王进科 吴婷婷 夏德全 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第2期94-96,101,共4页

运用 Hae / 33.6、Hae / 33.15、Hinf / 33.6、Hinf / 33.154种限制酶 /探针组合对奥利亚罗非鱼、美国尼罗罗非鱼、沙市尼罗罗非鱼三种群体罗非鱼进行非放射性 DNA指纹图谱研究 ,结果表明在三种罗非鱼群体中 4种限制酶 /探针组合都能产... 运用 Hae / 33.6、Hae / 33.15、Hinf / 33.6、Hinf / 33.154种限制酶 /探针组合对奥利亚罗非鱼、美国尼罗罗非鱼、沙市尼罗罗非鱼三种群体罗非鱼进行非放射性 DNA指纹图谱研究 ,结果表明在三种罗非鱼群体中 4种限制酶 /探针组合都能产生具有种属特异性和个体特异性的 DNA指纹图谱 .Hae / 33.6、Hae / 33.15组合中奥利亚罗非鱼特有的强阳性杂交图带可作为鉴别奥利亚罗非鱼的分子遗传标记 .4种限制酶 /探针组合在奥利亚罗非鱼、沙市尼罗罗非鱼、美国尼罗罗非鱼检出的个体平均图带数分别为 8.72 6、8.0 86和 6 .975.4种限制酶 /探针组合在奥利亚罗非鱼、沙市尼罗罗非鱼、美国尼罗罗非鱼检出的多态性位点比例分别为 6 2 .95%、96 .31%和85.2 6 % . 展开更多

关键词 DNA 指纹图谱 罗非鱼 dig标记 选育 养殖

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地高辛配基标记探针在流行性出血热尸检组织中原位分子杂交技术的应用和探讨 被引量：3

6

作者 唐志佼 张波 +1 位作者 邢寿富 邱慧玲 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 1992年第2期180-183,共4页

将地高辛配基(Dig)标记的探针应用于流行性出血热(EHF)尸检组织的石蜡切片中,进行原位分子杂交四例。方法要点:(1)采用Dig标记的探针及碱性磷酸酶系统、提高其敏感性;(2)为达到被检核酸的暴露彻底、准确,选择合适的消化酶;(3)选择适当... 将地高辛配基(Dig)标记的探针应用于流行性出血热(EHF)尸检组织的石蜡切片中,进行原位分子杂交四例。方法要点:(1)采用Dig标记的探针及碱性磷酸酶系统、提高其敏感性;(2)为达到被检核酸的暴露彻底、准确,选择合适的消化酶;(3)选择适当的杂交温度和时间,防止了非特异性背景,并避免了组织脱片。结果表明此方法操作简便、安全、快速、敏感。 展开更多

关键词 dig标记 CDNA探针 流行性出血热 原位分子杂交

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DIG标记DNA探针检测noggin在爪蟾胚胎中的表达

7

作者 周文 冯湘玲 +2 位作者 杨旭宇 王磊 姚开泰 《生命科学研究》 CAS CSCD 2002年第3期239-242,共4页

整体原位杂交 (Whole mountinsituhybridization)用于基因表达定位和表达分布模式的研究 ,已经成为一种非常重要的手段 .PCR方法进行探针标记 ,可以获得特异性高 ,片断大小可变的探针 .采用DIG标记 ,检测已知基因noggin在爪蟾胚胎时空分... 整体原位杂交 (Whole mountinsituhybridization)用于基因表达定位和表达分布模式的研究 ,已经成为一种非常重要的手段 .PCR方法进行探针标记 ,可以获得特异性高 ,片断大小可变的探针 .采用DIG标记 ,检测已知基因noggin在爪蟾胚胎时空分布 ,所得结果与文献报道一致 。 展开更多

关键词 dig标记 DNA探针 检测 NOGGIN 爪蟾胚胎 表达 整体原位杂交

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PCR检测细粒棘球蚴及DIG标记DNA杂交诊断技术的建立 被引量：1

8

作者 冯笑梅 韩晓芳 +1 位作者 曹银芳 王文灏 《内蒙古医学杂志》 2002年第3期189-191,共3页

目的 :该项研究旨在探讨聚合酶链反应 (PCR)技术在细粒棘球蚴检测和诊断中的应用 ,同时建立Digoxinum(DIG)标记DNA杂交诊断技术。方法 :根据细粒棘球蚴基因片断克隆与序列分析 ,设计了一对特异性引物 ,P15′—GGAATGGAGAGAAGTTAC— 3′,... 目的 :该项研究旨在探讨聚合酶链反应 (PCR)技术在细粒棘球蚴检测和诊断中的应用 ,同时建立Digoxinum(DIG)标记DNA杂交诊断技术。方法 :根据细粒棘球蚴基因片断克隆与序列分析 ,设计了一对特异性引物 ,P15′—GGAATGGAGAGAAGTTAC— 3′,P2 5′—GCAACCTCCGGAACTTGC— 3′。以棘球蚴的囊液、子囊及原头蚴为模板 ,经PCR扩增获得 471bp特异性区带。将扩增产物纯化后 ,用DIG标记DNA ,制备成功特异性核酸探针并用于细粒棘球蚴检测。结果 :经对大肠杆菌、痢疾杆菌、结核分枝杆菌、猪囊尾蚴、健康人白细胞进行PCR扩增和DIG标记DNA探针斑点杂交 ,只有细粒棘球蚴出现单一 471bp特异性区带。PCR的灵敏性为可检出单个原头蚴及 1 0 0— 1 0fg水平的DNA ,而斑点杂交的特异性为 2 5 0 0fg。异源性DNA即使提高点膜量 ,亦不呈现阳性反应。结论 :配以DIG标记的PCR技术在细粒棘球蚴的检测中具有特异、敏感、快速、准确的特点。 展开更多

关键词 dig标记 聚合酶链反应 细粒棘球蚴 核酸杂交探针 包虫病 PCR 诊断 棘球蚴病

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原位杂交Dig标记的HPV6B/11、16、18型DNA应用初探

9

作者 时淑舫 姚庆英 《首都医科大学学报》 CAS 1998年第3期270-271,共2页

原位杂交（ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｚａｔｉｏｎ，ＩＳＨ）技术是将重组核酸分子杂交技术与组织细胞化学及免疫组化结合起来，在组织细胞原位显示特定基因或病毒感染的ＤＮＡ或ｍＲＮＡ的表达、定位、半定量及变化规律的一种新兴技术。... 原位杂交（ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｚａｔｉｏｎ，ＩＳＨ）技术是将重组核酸分子杂交技术与组织细胞化学及免疫组化结合起来，在组织细胞原位显示特定基因或病毒感染的ＤＮＡ或ｍＲＮＡ的表达、定位、半定量及变化规律的一种新兴技术。我们做的原位杂交Ｄｉｇ标记的ＨＰＶ... 展开更多

关键词 原位杂交 dig标记 HPV6B DNA 喉肿瘤

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Dig标记Era用于相应结合蛋白基因的钓取

10

作者 陈南春 陈苏民 +3 位作者 高磊 郝晓萌 马小峰 金晶 《生物技术通讯》 CAS 1997年第Z1期140-141,共2页

Era是大肠杆菌生存繁殖必需的era基因产物,属G蛋白。作者推测它与其它G蛋白一样,有相应的结合蛋白存在。为了寻找Era结合蛋白及其基因。

关键词 dig标记 蛋白基因 Era结合蛋白 第四军医大学 G蛋白 教研室 大肠杆菌基因 ERA基因 基因组DNA文库 酶切位点

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异羟基洋地黄甙（Digoxigenin）标记的DNA探针用于鉴定特异…

11

作者 卢健 姜志龙 《中国优生与遗传杂志》 1996年第2期11-12,10,共3页

本文采用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（简称ＤＩＧ）标记的ＤＮＡ探针用于鉴定特异的ＥＢ病毒ＰＣＲ反应产物，根据ＥＢ病毒ＢａｍＨ１酶后产生的Ｗ片段的基因顺序合成一对外引物和一个内引物，由此外引物扩增的ＰＣＲ产物长度为１５４个碱... 本文采用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（简称ＤＩＧ）标记的ＤＮＡ探针用于鉴定特异的ＥＢ病毒ＰＣＲ反应产物，根据ＥＢ病毒ＢａｍＨ１酶后产生的Ｗ片段的基因顺序合成一对外引物和一个内引物，由此外引物扩增的ＰＣＲ产物长度为１５４个碱基，用该引物对１００例石蜡包埋的劓咽癌组织，１３例劓咽癌活检组织及１１例畸胎 １００列人不良生育史的妇女血、羊水、绒毛标本中的ＥＢ病毒ＤＮＡ进行了检测。 展开更多

关键词 EB病毒 聚合酶链反庆 反应产物 dig标记

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Dig标记探针原位杂交检测MSG-肝再生-大鼠下丘脑弓状核TGF-β_1mRNA 被引量：20

12

作者 杨木兰 李瀚旻 +2 位作者 梅家俊 张六通 邱幸凡 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2002年第2期202-204,共3页

目的　通过建立MSG 肝再生 大鼠模型 ,检测MSG 肝再生 大鼠下丘脑弓状核 (ARN)TGF β1mRNA的表达与神经内分泌免疫网络的关系。方法　用肝大部分切除MSG 大鼠的方法建立MSG 肝再生 大鼠模型 ,原位杂交技术检测MSG 肝再生 大鼠下丘脑... 目的　通过建立MSG 肝再生 大鼠模型 ,检测MSG 肝再生 大鼠下丘脑弓状核 (ARN)TGF β1mRNA的表达与神经内分泌免疫网络的关系。方法　用肝大部分切除MSG 大鼠的方法建立MSG 肝再生 大鼠模型 ,原位杂交技术检测MSG 肝再生 大鼠下丘脑弓状核 (ARN)TGF β1mRNA的表达。结果　发现MSG -肝再生 -大鼠ARNTGF - β1mRNA的表达显著上调 ,切除 11天达 2 0 9± 1 6 ,与生理盐水组 (11 1± 1 2 )和MSG -大鼠假手术组 (15 2± 1 1)比较 ,差异显著 (P <0 0 1)。结论　MSG -肝再生 -大鼠神经 -内分泌 -免疫网络功能紊乱与其ARNTGF - β1mRNA表达失调密切相关。 展开更多

关键词 下丘脑弓状核 TGF-Β1MRNA dig标记探针 原位杂交 检测 MSG-肝再生-大鼠

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简单、快速、高效扩增和标记目的基因技术的研究

13

作者 邢德峰 李新玲 徐香玲 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2002年第5期75-78,共4页

从固体平板挑取转化带有目的基因的单菌落 ,用特异引物通过聚合酶链式反应可直接扩增和标记目的基因 ,不需经过菌的液体培养、质粒提取和酶解反应等复杂过程 ,能快速获得目的基因扩增产物和进行目的基因探针的标记。

关键词 聚合酶链式反应 原位标记法 PCR-dig标记法 PCR-Southern 目的基因

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应用Digoxigenin标记探针定量检测血清HBV　DNA

14

作者 张立农 俞树高 +4 位作者 苏东辉 刘延深 陈治新 郑祥雄 胡金福 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1994年第2期28-30,共3页

本文报道采用非同位素Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记探针定量检测血清ＨＢＶＤＮＡ。显色膜经空气干燥、液体石蜡透明处理后，即可置酶联免疫检测仪上测定各斑点的光密度（ＯＤ）值，波长６３０ｎｍ。结果发现已知含量的ＨＢＶＤＮＡ在２... 本文报道采用非同位素Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记探针定量检测血清ＨＢＶＤＮＡ。显色膜经空气干燥、液体石蜡透明处理后，即可置酶联免疫检测仪上测定各斑点的光密度（ＯＤ）值，波长６３０ｎｍ。结果发现已知含量的ＨＢＶＤＮＡ在２－５００ｐｇ／样点范围内与其相应的ＯＤ值有着良好的线性关系（ｒ＝０．９７０ｙ＝０．００１２ｘ＋０．１０５６）。标本测得ＯＤ值后，便可知其含量。该法重复性试验结果良好，１１份ＨＢＶＤＮＡ阳性的血清经定量测定，其ＨＢＶＤＮＡ含量在２０－１０５ｐｇ／４０μｌ之间。定量检测血清ＨＢＶＤＮＡ不仅可用来评价乙肝治疗的效果，而且也可用于了解血清传染性的强弱。 展开更多

关键词 dig标记探针 DNA 乙型肝炎病毒

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用染色体DNA探针鉴别猫口腔中的拟杆菌

15

作者 冯专照 《畜牧兽医科技信息》 1995年第5期3-3,共1页

澳大利亚学者用高分子量DNA作为全染色体探针,利用斑点印渍杂交试验来鉴定顶盖拟杆菌和脆弱拟杆菌。同时,就³²p标记的探针及异羟基毛地黄毒苷元（DIG）标记的探针进行比较。结果认为,全染色体探针对于鉴别顶盖... 澳大利亚学者用高分子量DNA作为全染色体探针,利用斑点印渍杂交试验来鉴定顶盖拟杆菌和脆弱拟杆菌。同时,就³²p标记的探针及异羟基毛地黄毒苷元（DIG）标记的探针进行比较。结果认为,全染色体探针对于鉴别顶盖拟杆菌和脆弱拟杆菌以及上述二者与猫及马正常或异常口腔中发现的其它种类细菌（包括拟杆菌属的其它细菌、梭形杆菌。 展开更多

关键词 DNA探针 染色体 脆弱拟杆菌 全染色 拟杆菌属 口腔厌氧菌 高分子量DNA 杂交试验 dig标记 澳大利亚

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鸡传染性法氏囊病毒南汇分离株cDNA探针的研制 被引量：1

16

作者 陆苹 李晖 孙建和 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2001年第6期324-326,共3页

采自上海郊县某发病鸡场的法氏囊病料 ,用单克隆抗体 (McAb )沉淀法从冻融的上清液提纯IBD病毒。用SDS 蛋白酶K法提纯核酸 ,得到高纯度的IBDVRNA后 ,再用特异性引物进行逆转录和PCR扩增 ,得到长度为 147bp的IBDVcDNA片段。将该片段回收... 采自上海郊县某发病鸡场的法氏囊病料 ,用单克隆抗体 (McAb )沉淀法从冻融的上清液提纯IBD病毒。用SDS 蛋白酶K法提纯核酸 ,得到高纯度的IBDVRNA后 ,再用特异性引物进行逆转录和PCR扩增 ,得到长度为 147bp的IBDVcDNA片段。将该片段回收、纯化和克隆 ,经测序鉴定 ,其结果与Genebank中同源率达 96 %。采用DIG非放射性标记系统 ,标记IBDVcDNA片段 ,得到足够量的探针 ,与不同毒株的IBDVRNA和送检病料RNA进行杂交 ,均有清晰斑点出现 ,其灵敏度为 0 1pg。 展开更多

关键词 IBDV RT-PCR dig-标记探针 杂交 鸡 CDNA探针

原文传递

PCR-DIG探针斑点杂交法快速检测SRY基因 被引量：2

17

作者 郭金虎 余多慰 单祥年 《中国优生与遗传杂志》 1999年第3期29-30,共2页

以正常男性ＤＮＡ作为模板，用本文设计的ＳＲＹ基因的１对引物组合进行ＰＣＲ法制备ＤＩＧ探针，然后通过低熔点琼脂糖电泳回收将扩增产物纯化，得到ＳＲＹ基因探针。与其他制备探针的方法相比，此方法制得的探针产量和标记效率都很高... 以正常男性ＤＮＡ作为模板，用本文设计的ＳＲＹ基因的１对引物组合进行ＰＣＲ法制备ＤＩＧ探针，然后通过低熔点琼脂糖电泳回收将扩增产物纯化，得到ＳＲＹ基因探针。与其他制备探针的方法相比，此方法制得的探针产量和标记效率都很高，标记灵敏度达００１ｐｇ，片段长度均一，为２９０ｂｐ。在ＤＮＡ斑点杂交检测ＳＲＹ基因时显示了很好的特异性，显示这种方法可以同时对大量性反转病例进行临床检测。 展开更多

关键词 PCR dig探针标记 SRY基因 产前诊断

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FWA116基因在心衰动物模型心脏血管内皮的表达

18

作者 刘玉清 陆立鹤 +4 位作者 韩玉 陈敬洲 刘宝华 张禅那 Huirutai 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2003年第2期100-103,共4页

建立亚急性和慢性心衰SD大鼠模型,用RNA-RNA原位杂交方法观察新基因FWA116在心脏组织的表达。以重组质粒FWA116/PGEM-T线性cDNA为模板,在T7耵或SP6RNA聚合酶作用下,体外合成地高辛(DIG)半抗原标记的FWA116cRNA探针。结果表明:与对照组相... 建立亚急性和慢性心衰SD大鼠模型,用RNA-RNA原位杂交方法观察新基因FWA116在心脏组织的表达。以重组质粒FWA116/PGEM-T线性cDNA为模板,在T7耵或SP6RNA聚合酶作用下,体外合成地高辛(DIG)半抗原标记的FWA116cRNA探针。结果表明:与对照组相比,该基因在两种心衰大鼠心脏的中、小动脉内皮组织的mRNA表达均明显增高;与Northern blot及免疫组化的结果相一致,这提示DIG标记cRNA原位杂交方法的敏感和可靠。同时FWA116基因在心衰缺血缺氧心脏动脉内皮中的转录和翻译水平的高表达,说明该基因可能在心衰的病理过程中起到重要的作用。 展开更多

关键词 地高辛(dig)标记 CRNA探针 原位杂交 基因表达

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