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正常肝和肝癌细胞中DHRS4L2基因选择性剪接亚型的克隆及其表达调控研究 被引量：1
1
作者 甘雪琼 宋旭红 +3 位作者 李蕊 张巧霞 杜牡丹 黄东阳 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2010年第5期329-334,共6页
目的:鉴定正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞Hep-G2中DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型,并探讨其表达调控机制。方法:应用RT-PCR,3′RACE和生物信息学方法发现并鉴定DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型;去甲基化药物5-aza-dC处理HL-7702和Hep-G2细... 目的:鉴定正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞Hep-G2中DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型,并探讨其表达调控机制。方法:应用RT-PCR,3′RACE和生物信息学方法发现并鉴定DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型;去甲基化药物5-aza-dC处理HL-7702和Hep-G2细胞,通过RT-PCR和real-time PCR方法检测DHRS4L2的表达情况。结果:发现了2个新的DHRS4L2剪接亚型DHRS4L2A和DHRS4L2A3,2个新亚型均出现了新的第1个外显子,命名为Ea,前者缺失外显子1,后者缺失外显子1和3;在正常肝细胞中去甲基化后含DHRS4L2外显子1的转录产物比处理前明显增加,在肝癌细胞中则比处理前减少。结论:获得2个新的DHRS4L2剪接亚型,并发现DHRS4L2的表达和甲基化调控相关,且甲基化的调控作用在正常肝与肝癌细胞之间存在差异,其机制尚待进一步探讨。 展开更多
关键词 辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶 表达调控 dhrs4l2基因 选择性剪接
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神经母细胞瘤SK-N-SH细胞内DHRS4L2基因一种新选择性剪接亚型S4的克隆和亚细胞定位
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作者 龚慧 李一凡 +6 位作者 祝胜郎 杜冀晖 王磊 周蓓 廉婕 李蓉 麦丽文 《医学分子生物学杂志》 CAS 2017年第4期192-198,共7页
目的 神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系脱氢酶/还原酶（SDR家族）成员4类2[dehydrogenase/reductase（SDR family）member 4 like 2,DHRS4L2]基因的一种新的选择性剪接亚型克隆、生物信息学分析及其亚细胞定位.方法 以SK-N-SH细胞cDNA为模板,... 目的 神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系脱氢酶/还原酶（SDR家族）成员4类2[dehydrogenase/reductase（SDR family）member 4 like 2,DHRS4L2]基因的一种新的选择性剪接亚型克隆、生物信息学分析及其亚细胞定位.方法 以SK-N-SH细胞cDNA为模板,PCR扩增DHRS4基因簇Ea1转录本.将PCR产物A-T克隆至pGEMT-Easy质粒,对质粒进行DNA Sanger测序.将测序所得序列用NCBI ORF finder分析其编码区,用Motif Scan分析预测蛋白氨基酸序列.用Clustal Omega进行蛋白序列比对分析.将新亚型完整编码框cDNA以及删除偶核定位信号的编码框分别插入pEGFP-C1质粒,所得质粒和空质粒分别转染SK-N-SH细胞,在荧光显微镜下观察转染表达蛋白亚细胞定位.结果 用RT-PCR和Sanger测序方法发现,SK-N-SH表达DHRS4L2 Ea1转录本,未检测到其表达脱氢酶/还原酶（SDR家族）成员4类1[dehydrogenase/reductase（SDR family）member 4 like 1,DHRS4L1]的Ea2转录本.DHRS4L2 Ea1表达一个新的选择性剪接亚型DHRS4L2-S4（KU141377）,由AY616183基础上在Ea1与E2外显子之间插入新外显子Ej形成,外显子Ej含有新亚型翻译起始密码子ATG.转录本KU141377预测蛋白羧基端具有偶核定位信号（bipartite nuclear localization signal,NLS）,提示其可能定位于细胞核.绿色荧光蛋白融合蛋白实验显示,在SK-N-SH细胞该蛋白定位于细胞核.该蛋白还含有一个甘氨酸密集区（glycine-rich region）和阿片样生长因子受体重复（opioid growth factor receptor repeat）序列.结论 研究发现SK-N-SH细胞表达的一种DHRS4L2新选择性剪接亚型KU141377,其预测编码蛋白含有细胞偶核定位信号,融合荧光蛋白实验显示该新亚型定位于细胞核,这为后续研究DHRS4L2在神经母细胞瘤中的潜在功能奠定基础. 展开更多
关键词 dhrs4l2基因 选择性剪接 细胞核定位
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