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题名DEK蛋白的真核表达纯化及其活性检测
被引量：1
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作者
郭海红
杨辛
郭芳
胡红刚
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机构
北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院
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出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第12期1-9,共9页
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基金
教育部留学回国人员基金资助项目(S09C300050)
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文摘
利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达DEK蛋白并进行纯化。首先以pFastBacI质粒构建重组质粒pFastBacI-DEK,转化DH10Bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体Bacmid-DEK,通过脂质体介导转染Sf9细胞产生具有强感染力的重组杆状病毒AcNPV-DEK。用此重组杆状病毒AcNPV-DEK感染Sf9细胞表达His-DEK融合蛋白。在非变性条件下,利用Ni-NTA agarose对表达的His-DEK融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blotting分析,在50 kDa处出现特异性蛋白条带并证实其为His-DEK融合蛋白。凝胶迁移阻滞实验表明,融合蛋白His-DEK与DNA的结合具有结构特异性,其与超螺旋型DNA结合活性强于与线性化DNA的结合活性。真核表达并纯化的融合蛋白His-DEK与DNA的结合活性要明显强于原核表达的融合蛋白His-CDB。DEK蛋白的磷酸化修饰会阻碍其与DNA的结合,而Sf9细胞中表达的融合蛋白His-DEK存在磷酸化修饰,将His-DEK去磷酸化后,其与DNA的结合活性有所提高。
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关键词
dek蛋白
杆状病毒表达系统
凝胶迁移阻滞
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Keywords
dek protein baculovirus expression system electrophoretic mobility shift assay
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分类号
Q819
[生物学—生物工程]
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