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稀有糖的生物转化生产策略:Izumoring方法 被引量：12
1
作者 沐万孟 张涛 +1 位作者 江波 张华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期129-136,共8页
稀有糖是在自然界中存在但含量极少的一类单糖及衍生物,在膳食、保健、医药等领域中发挥着重要的功能。综述了一种稀有糖的生物转化生产策略——Izumoring方法,即利用D-塔格糖3-差向异构酶、醛糖异构酶和多元醇脱氢酶等进行所有单糖及... 稀有糖是在自然界中存在但含量极少的一类单糖及衍生物,在膳食、保健、医药等领域中发挥着重要的功能。综述了一种稀有糖的生物转化生产策略——Izumoring方法,即利用D-塔格糖3-差向异构酶、醛糖异构酶和多元醇脱氢酶等进行所有单糖及糖醇之间的相互转化;利用该原则,分别构建了己糖类、戊糖类和丁糖类的Izumoring转化策略,并可获得所有稀有糖的酶反应和生物转化生产途径。同时,展望了稀有糖生物转化生产的研究趋势。 展开更多
关键词 稀有糖 生物转化 D-塔格糖3-差向异构酶 醛糖异构酶 多元醇脱氢酶
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D-塔格糖3-差向异构酶家族蛋白的研究进展 被引量：5
2
作者 沐万孟 张涛 +1 位作者 江波 张龙涛 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期127-131,共5页
稀有糖是在自然界中存在但含量极少的一类单糖及衍生物,其在膳食、保健、医药等领域中发挥着重要的功能。D-塔格糖3-差向异构酶(D-tagatose 3-epimerase,缩写为DTE)家族蛋白在稀有糖生物转化中占有重要地位。文中对DTE家族蛋白的最新进... 稀有糖是在自然界中存在但含量极少的一类单糖及衍生物,其在膳食、保健、医药等领域中发挥着重要的功能。D-塔格糖3-差向异构酶(D-tagatose 3-epimerase,缩写为DTE)家族蛋白在稀有糖生物转化中占有重要地位。文中对DTE家族蛋白的最新进展进行了综述;同时,展望了DTE家族蛋白的研究趋势。 展开更多
关键词 稀有糖 D-塔格糖3-差向异构酶 生物转化
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Clostridium cellulolyticum D-塔格糖3-差向异构酶基因的克隆、表达及酶活性 被引量：7
3
作者 储菲菲 邢庆超 +4 位作者 沐万孟 张涛 缪铭 江波 周榴明 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期283-286,共4页
D-塔格糖3-差向异构酶是生物法生产新型功能性因子D-阿洛酮糖最为有效的酶。作者克隆到一种新型的D-塔格糖3-差向异构酶基因,来源于微生物Clostridium cellulolyticumH10。以pET-22b(+)为载体质粒,E.coliBL21(DE3)为宿主细胞,构建了基... D-塔格糖3-差向异构酶是生物法生产新型功能性因子D-阿洛酮糖最为有效的酶。作者克隆到一种新型的D-塔格糖3-差向异构酶基因,来源于微生物Clostridium cellulolyticumH10。以pET-22b(+)为载体质粒,E.coliBL21(DE3)为宿主细胞,构建了基因重组菌,IPTG可诱导目的蛋白质的过量表达;经亲和层析纯化的重组蛋白质样品进行SDS-PAGE分析,在约31 000处出现显著的特征蛋白质条带;活性检测结果表明:该重组酶具有较高的转化活性。 展开更多
关键词 D-塔格糖3-差向异构酶 D-阿洛酮糖 克隆 表达 亲和层析
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乳糖诱导D塔格糖3差向异构酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量：5
4
作者 贾敏 江波 +4 位作者 张晓鸣 沐万孟 张涛 缪铭 周榴明 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期143-146,152,共5页
以D-塔格糖3-差向异构酶高效表达菌株BL21(DE3)/pET22b-cbdte为研究对象,考察乳糖作为诱导剂诱导D-塔格糖3-差向异构酶在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性。在摇瓶发酵条件下,从诱导时机、诱导剂浓度、诱导时间及诱导温度等四个方面,研... 以D-塔格糖3-差向异构酶高效表达菌株BL21(DE3)/pET22b-cbdte为研究对象,考察乳糖作为诱导剂诱导D-塔格糖3-差向异构酶在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性。在摇瓶发酵条件下,从诱导时机、诱导剂浓度、诱导时间及诱导温度等四个方面,研究诱导条件对目的蛋白表达的影响。结果表明,工程菌培养至对数生长中期OD值为1.0左右后,加入终浓度为5g/L的乳糖,于20℃的条件下诱导7h,可获得最大酶活。与异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)最适诱导条件相比,优化后的乳糖诱导酶活提高82.7%,可溶性目的蛋白的表达量提高99.5%,菌体生物量提高30.5%。研究结果为乳糖作为诱导剂应用于D-塔格糖3-差向异构酶的工业化生产提供有益的参考和借鉴。 展开更多
关键词 D-塔格糖3-差向异构酶 乳糖 IPTG 诱导表达
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Clostridium bolteae ATCC BAA-613 D-塔格糖3-差向异构酶的诱导表达、纯化及活性研究 被引量：2
5
作者 储菲菲 沐万孟 +3 位作者 邢庆超 周榴明 张涛 江波 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期198-201,392,共5页
D-塔格糖3-差向异构酶是生物法生产新型功能性因子D-阿洛酮糖最为有效的酶。一种新型的能够编码D-塔格糖3-差向异构酶的基因CLOBOL_00069被克隆,它来源于Clostridium bolteae ATCC BAA-613。以pUC57为克隆载体,以pET-22b(+)为载体质粒,E... D-塔格糖3-差向异构酶是生物法生产新型功能性因子D-阿洛酮糖最为有效的酶。一种新型的能够编码D-塔格糖3-差向异构酶的基因CLOBOL_00069被克隆,它来源于Clostridium bolteae ATCC BAA-613。以pUC57为克隆载体,以pET-22b(+)为载体质粒,E.coli BL21(DE3)为宿主细胞,构建了基因重组工程菌。IPTG诱导剂诱导目的蛋白的表达;通过镍柱亲和层析,杂蛋白与目的蛋白得到了很好的分离。对纯化的重组蛋白样品进行SDS-PAGE分析,在约32ku处出现明显的特征条带。通过活性研究表明,Clostridium bolteae ATCC BAA-613 DTEase属于DTEase家族,并具有较高的生物转化率,反应10h后转化率达到20%。 展开更多
关键词 D-塔格糖3-差向异构酶 D-阿洛酮糖 基因重组 亲和层析
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D-塔格糖3-差向异构酶的储存稳定性 被引量：2
6
作者 张巧 帅玉英 +3 位作者 张涛 江波 缪铭 沐万孟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1-5,共5页
为提高D-塔格糖3-差向异构酶(D-tagatose 3-epimeriase,DTE)粗酶液的储存稳定性,在其粗酶液中添加防腐剂以及糖类、盐类、多元醇类与蛋白质等稳定剂。通过单因子研究与正交实验,研究了它们对酶液储存稳定性的影响。结果表明:0.3%尼泊金... 为提高D-塔格糖3-差向异构酶(D-tagatose 3-epimeriase,DTE)粗酶液的储存稳定性,在其粗酶液中添加防腐剂以及糖类、盐类、多元醇类与蛋白质等稳定剂。通过单因子研究与正交实验,研究了它们对酶液储存稳定性的影响。结果表明:0.3%尼泊金甲酯(methylparaben,Met)有较佳的防腐效果,且能显著降低酶液的失活速率;果糖、肌醇、Mg SO4是DTE良好的稳定剂,其组合2 mmol/L Mg SO4,6%果糖,4%肌醇为最优的复合稳定剂;将加有0.3%Met和复合稳定剂的粗酶液在25℃下保存,粗酶失活半衰期为62 d,而仅加防腐剂Met的半衰期为25 d,空白酶液仅2 d。因此,复合稳定剂与防腐剂Me的联合使用能较好地提高DTE粗酶液的储存稳定性。 展开更多
关键词 D-塔格糖3-差向异构酶 储存稳定性 半衰期 稳定剂
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D-塔格糖3-差向异构酶的固定化研究
7
作者 周林芳 储菲菲 +1 位作者 张涛 江波 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第19期197-200,共4页
从14种离子交换树脂和吸附树脂中,筛选出固定化效果较好的大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D301-Ⅲ为载体,以戊二醛为交联剂,通过先吸附后交联的方法对D-塔格糖3-差向异构酶的固定化进行研究。结果表明,最佳固定化条件为:加酶量为2.00m... 从14种离子交换树脂和吸附树脂中,筛选出固定化效果较好的大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D301-Ⅲ为载体,以戊二醛为交联剂,通过先吸附后交联的方法对D-塔格糖3-差向异构酶的固定化进行研究。结果表明,最佳固定化条件为:加酶量为2.00mL/g(粗酶液/树脂),吸附pH7.5,吸附时间为8h,吸附温度为30℃,戊二醛浓度为0.05%,交联时间为3h,固定化酶活回收率可达50%以上。固定化酶重复使用10次,酶活仍能稳定保持在初始酶活的65%以上,具有良好的操作稳定性。 展开更多
关键词 D-塔格糖3-差向异构酶 树脂 固定化
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生物法生产D-阿洛酮糖的研究进展 被引量：3
8
作者 黄月园 徐铮 徐虹 《生物加工过程》 CAS 2021年第6期581-588,共8页
D-阿洛酮糖(D-psicose或D-allulose)是一种零热量的功能性稀少糖,具有控血糖、保护胰岛、抗氧化等诸多功效。在广泛调研的基础上,本文总结了D-阿洛酮糖的理化性质,生产关键酶D阿洛酮糖3差向异构酶(D-psicose 3-epimerase,DPE)和D-塔格... D-阿洛酮糖(D-psicose或D-allulose)是一种零热量的功能性稀少糖,具有控血糖、保护胰岛、抗氧化等诸多功效。在广泛调研的基础上,本文总结了D-阿洛酮糖的理化性质,生产关键酶D阿洛酮糖3差向异构酶(D-psicose 3-epimerase,DPE)和D-塔格糖3-差向异构酶(D-tagatose 3-epimerase,DTE)的研究进展,探讨了生物法合成D-阿洛酮糖的工艺方法,分子手段改造DPE和DTE的研究成果以及D-阿洛酮糖的分离纯化方法,并就当前D阿洛酮糖的研究现状与发展前景进行了展望。 展开更多
关键词 D-阿洛酮糖 稀少糖 D-塔格糖3差向异构酶 D-阿洛酮糖3差向异构酶
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Clostridium scindens ATCC35704中的D-塔格糖-3-差向异构酶的克隆表达、纯化及活性研究
9
作者 邢庆超 沐万孟 +2 位作者 江波 周榴明 张涛 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期6-10,共5页
D-阿洛酮糖作为一种新型低热量功能性甜味剂,可以通过D-塔格糖-3-差向异构酶家族,以D-果糖为底物C-3位异构化得到。一个新的来源于微生物Clostridium scindens ATCC 35704中ZP 0243228的D-塔格糖-3-差向异构酶基因(CS-DTE),通过克隆并... D-阿洛酮糖作为一种新型低热量功能性甜味剂,可以通过D-塔格糖-3-差向异构酶家族,以D-果糖为底物C-3位异构化得到。一个新的来源于微生物Clostridium scindens ATCC 35704中ZP 0243228的D-塔格糖-3-差向异构酶基因(CS-DTE),通过克隆并成功导入E.coli BL21(DE3)中,构建了基因重组菌,诱导目的重组基因过量表达;经亲和层析纯化的重组蛋白样品进行SDS-PAGE分析,在约31 ku处出现显著的特征蛋白条带;通过对其活性检测表明,该重组酶分别以D-塔格糖和D-果糖为底物,可以生成D-山梨糖和D-阿洛酮糖,转化率分别为8.6%和27.9%。 展开更多
关键词 D-阿洛酮糖 D-山梨糖 D-塔格糖-3-差向异构酶 基因重组 亲和层析
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