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蓝光照射致人视网膜色素上皮细胞线粒体凋亡的途径及机制 被引量：9
1
作者 李红 吕建平 +3 位作者 蔡善君 宿罡 武志鹏 宫鑫 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期16-20,共5页
背景 研究已证实蓝光照射可导致视网膜色素上皮细胞（RPE）凋亡,但其机制目前尚不完全清楚. 目的 探讨线粒体凋亡通路是否参与蓝光照射诱导体外培养的人RPE细胞凋亡过程.方法 分离新鲜的供体视网膜,对人RPE细胞进行原代培养和传代,用角... 背景 研究已证实蓝光照射可导致视网膜色素上皮细胞（RPE）凋亡,但其机制目前尚不完全清楚. 目的 探讨线粒体凋亡通路是否参与蓝光照射诱导体外培养的人RPE细胞凋亡过程.方法 分离新鲜的供体视网膜,对人RPE细胞进行原代培养和传代,用角蛋白单克隆抗体行细胞鉴定.将体外培养的人RPE细胞分为无光照组、单纯光照组、光照＋硝苯地平组、光照＋钙磷酸结合蛋白C（calphostin C）组、光照＋佛波酯（PMA）组.光照组细胞用（2 000±500） lx的蓝光照射人RPE细胞6h,然后继续培养24 h后终止.采用Western blot法比较两个组间RPE细胞中凋亡相关调控因子bax、bcl-2、bcl-xl的相对表达,以评价蓝光照射对RPE细胞凋亡的影响.光照＋硝苯地平组、光照＋calphostin C组、光照＋PMA组细胞在蓝光照射前1h分别在培养基中加入相应药物,然后以（2 000±500） lx的蓝光照射人RPE细胞6h,并继续培养24 h,采用Westernblot法检测5个组细胞中caspase-9蛋白表达量的变化,观察钙通道和蛋白激酶C（PKC）通路对RPE细胞线粒体的影响.结果 培养的细胞生长良好,细胞质内充满色素颗粒,呈铺路石样排列,对角蛋白呈阳性反应.无光照组和单纯光照组均可见bax、bcl-2及bcl-xl蛋白条带,相对分子质量分别为23 000、26 000和30 000.与无光照组比较,单纯光照组bax、bcl-2和bcl-xl蛋白表达相对值（A）下降,差异均有统计学意义（t=-4.409,P=0.012;t=7.575,P=0.002;t=6.068,P=0.004）.与无光照组比较,单纯光照组、光照＋calphostin C组、光照＋PMA组细胞中caspase-9蛋白表达均升高,差异均有统计学意义（P=0.005、0.002、0.000）,而光照＋硝苯地平组与无光照组比较差异无统计学意义（P=0.191）.与单纯光照组比较,光照＋PMA组caspase-9蛋白表达升高,差异有统计学意义（P=0.005）;而光照＋硝苯地平组及光照＋calphostin C组caspase-9蛋白表达差异均无统计学意义� 展开更多
关键词 蓝光 光损伤 视网膜色素上皮 凋亡 线粒体 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 细胞培养
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环境高温促进猪睾丸Apaf-1和Caspase-9的表达 被引量：2
2
作者 范小瑞 张禛 +2 位作者 席华明 梁亚俊 贺俊平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1155-1160,共6页
高温热应激条件下,凋亡蛋白表达量升高,生殖细胞凋亡增加。凋亡蛋白酶活化因子1（apoptosis protease activating factor 1,Apaf-1）和凋亡蛋白酶活化起始者含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9,（cysteine aspartic acid specific proteas... 高温热应激条件下,凋亡蛋白表达量升高,生殖细胞凋亡增加。凋亡蛋白酶活化因子1（apoptosis protease activating factor 1,Apaf-1）和凋亡蛋白酶活化起始者含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9,（cysteine aspartic acid specific protease 9,Caspase-9）是细胞凋亡内源途径中的重要调节蛋白,热应激条件下猪睾丸Apaf-1和Caspase-9的表达未见报道。本研究发现,夏季畜舍高温使Apaf-1和Caspase-9表达量升高。qRT-PCR和Western印迹结果显示,与对照组（正常舍温20℃）相比,短时热应激组（40-42℃,1 h/d,7 d）和长时热应激组（40-42℃,1 h/d,42 d）,Apaf-1和Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量均显著升高。免疫组织化学研究发现,Apaf-1在猪睾丸组织中免疫反应阳性物定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞。热应激处理导致精母细胞和精子细胞Apaf-1表达量升高。在各实验猪睾丸组织中,Caspase-9定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞的胞质中。与对照组相比,热应激处理导致减数分裂以后的生精细胞和支持细胞Caspase-9表达量升高。上述结果表明,高温热应激促进Apaf-1和Caspase-9的表达,提示Apaf-1和Caspase-9表达的变化可能与猪舍高温导致的猪精液品质下降存在关联。 展开更多
关键词 热应激 公猪 睾丸 凋亡蛋白酶活化因子1(Apaf-1) 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)
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