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昆虫表皮蛋白基因研究进展 被引量:20
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作者 梁欣 陈斌 乔梁 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1084-1093,共10页
在昆虫表皮的发生、分化和昆虫躯体外部重要部位及器官的构建中,表皮蛋白是不可或缺的组成元素。本文在简要总结了目前昆虫表皮蛋白鉴定与分类方面研究的基础上,重点对近10年来昆虫表皮蛋白基因的时空表达模式、激素及转录因子对表皮蛋... 在昆虫表皮的发生、分化和昆虫躯体外部重要部位及器官的构建中,表皮蛋白是不可或缺的组成元素。本文在简要总结了目前昆虫表皮蛋白鉴定与分类方面研究的基础上,重点对近10年来昆虫表皮蛋白基因的时空表达模式、激素及转录因子对表皮蛋白基因表达的调控、表皮蛋白基因功能的研究进展进行了综述,探讨了其在害虫防治中可能的应用前景,旨在为进一步研究昆虫表皮蛋白基因及其潜在利用价值提供参考。目前报道的昆虫表皮蛋白序列已超过1 400条,分为12个家族,如CPR,CPF,CPFL和Tweedle等。经由蜕皮激素激活的相关转录因子(如βFTZ-F1和BR-C等)作用于表皮蛋白基因上游的顺式作用元件,开启或关闭基因,以调控表皮蛋白基因的表达。表皮蛋白基因在昆虫表皮整合,体形塑造,活动能力,抗逆与抗药性,以及先天免疫等生理现象和生理过程中有不可或缺的作用。因此,如果能够通过抑制关键表皮蛋白基因的表达,或将其从基因组中删除,以阻碍昆虫的发育或扰乱昆虫的繁殖能力,或可为害虫防治策略提供参考。 展开更多
关键词 昆虫 表皮蛋白 鉴定与分类 基因表达调控 基因功能 害虫防控
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家蚕表皮蛋白基因的生物信息学分析 被引量:9
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作者 梁九波 刘碧朗 +1 位作者 占智高 何宁佳 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期405-416,共12页
家蚕的表皮蛋白(cuticular protein)是家蚕重要的结构蛋白,与几丁质一同作为家蚕表皮的重要组成部分。运用生物信息学的方法对家蚕表皮蛋白进行了广泛分析。通过保守的基序检索家蚕基因组,得到163条候选的表皮蛋白序列,包括RR、Tweedle... 家蚕的表皮蛋白(cuticular protein)是家蚕重要的结构蛋白,与几丁质一同作为家蚕表皮的重要组成部分。运用生物信息学的方法对家蚕表皮蛋白进行了广泛分析。通过保守的基序检索家蚕基因组,得到163条候选的表皮蛋白序列,包括RR、Tweedle、CPF&CPFL等家族,并且发现具有确定的保守基序的表皮蛋白基因在染色体上都是以串联集群形式分布。氨基酸组成分析表明,这些表皮蛋白富含甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、组氨酸等。运用Sig-nalP server预测这部分蛋白质有85%都具有信号肽。进化分析显示,负选择是家蚕表皮蛋白基因进化的主要驱动力。采用TFSEARCH等在线服务软件分析发现,在70%含有RR基序的家蚕表皮蛋白基因的核心启动子区具有通用的TATAAA序列。 展开更多
关键词 家蚕 表皮蛋白 基序 基因簇 生物信息学分析
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Cuticular protein LmTwdll is involved in molt development of the migratory locust 被引量:10
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作者 Tian-Qi Song Mei-Ling Yang +4 位作者 Yan-Li Wang Qing Liu Hui-Min Wang Jie Zhang Tao Li 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2016年第4期520-530,共11页
The cuticle, an essential structure for insects, is produced from cuticular proteins and chitin via a series of biochemical reactions. Tweedle genes are important members of the cuticular protein family and have four ... The cuticle, an essential structure for insects, is produced from cuticular proteins and chitin via a series of biochemical reactions. Tweedle genes are important members of the cuticular protein family and have four conserved motifs binding to chitin. Tweedle family genes have been found to play a profound effect on cuticle development. Here, we report that the cuticular protein gene LmTwdll ofLocusta migratoria belongs to the Tweedle family. In situ hybridization showed that LmTwdll is localized to epidermal cells of the cuticle. The expression patterns of LmTwdll showed low expression in the cuticle during the early and middle stages of the fifth-instar nymphs; in contrast, its expression rapidly increased in the late stages of fifth-instar nymphs. We performed RNA interference to examine the function of LmTwdll in locusts. Silencing of LmTwdll resulted in high mortality during the molting process before the next stage. Also, the epicuticle of nymphs failed to molt, tended to be thinner and the arrangement of chitin in the procuticle appeared to be disordered compare to the control group. These results demonstrate that LmTwdl! plays a critical role in molting, which contributes to a better understanding of the distinct functions of the Tweedle family in locusts. 展开更多
关键词 cuticular protein Lm Twdll Loeusta migratoria MOLTING RNA interference
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松墨天牛表皮蛋白基因的克隆及表达分析 被引量:9
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作者 许雯 罗淋淋 +2 位作者 吴华俊 韦春梅 林同 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期515-521,共7页
【目的】本研究旨在探索松墨天牛Monochamus ahernatus Hope中昆虫表皮蛋白(ICP)基因在幼虫各组织中和不同发育阶段的时空表达模式。【方法】用cDNA末端快速扩增方法(rapid amplification of cDNAends,RACE)克隆了松墨天牛表皮蛋... 【目的】本研究旨在探索松墨天牛Monochamus ahernatus Hope中昆虫表皮蛋白(ICP)基因在幼虫各组织中和不同发育阶段的时空表达模式。【方法】用cDNA末端快速扩增方法(rapid amplification of cDNAends,RACE)克隆了松墨天牛表皮蛋白基因,用实时荧光定量PCR分析了该基因在幼虫体内和不同虫态中的表达。【结果】克隆获得的松墨天牛幼虫表皮蛋白基命名为MoallCP(GenBank登录号:AGX00998.1),开放阅读框长408bp,编码135个氨基酸,推测得到的蛋白的分子量为14.51kDa。由MoallCP推导的蛋白与桑天牛Apriona germariICP(AAM66718.1)氨基酸序列一致性为79%;与丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennisICP(NP-001161297.1)、果蝇Drosophila mojavensisICP(XP_002005461.1)、玉带凤蝶Papilio polytesICP(BAMl8876.1)等19种昆虫表皮蛋白的氨基酸序列一致性在35%~45%之间;在第10—26位氨基酸位处含有一个跨膜片段。MoallCP在幼虫头、体壁、脂肪体、血细胞、中肠和马氏管均有表达;在蛹和成虫中的表达量分别是在幼虫中的44%和161%。【结论】MoallCP与其他昆虫有较高的氨基酸序列一致性。MoallCP在松墨天牛幼虫内广泛表达;在各个发育阶段中,以成虫中的表达量最高。本文为进一步研究松墨天牛表皮蛋白基因的生理功能和松墨天牛的表皮化学奠定基础。 展开更多
关键词 松墨天牛 表皮蛋白 基因克隆 荧光定量PCR RACE
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褐飞虱表皮蛋白基因NlICP的克隆及功能研究 被引量:9
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作者 马艳 郝培应 +1 位作者 陆潮峰 俞晓平 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1244-1251,共8页
表皮蛋白与几丁质结合构成抵御外界不良环境的昆虫角质层,在昆虫的生长发育及蜕皮硬化中具有重要的作用。为了探讨表皮蛋白基因在褐飞虱Nilaparvata lugens生长发育中的功能,本研究根据褐飞虱转录组测序信息,对其中1个预测为编码表皮蛋... 表皮蛋白与几丁质结合构成抵御外界不良环境的昆虫角质层,在昆虫的生长发育及蜕皮硬化中具有重要的作用。为了探讨表皮蛋白基因在褐飞虱Nilaparvata lugens生长发育中的功能,本研究根据褐飞虱转录组测序信息,对其中1个预测为编码表皮蛋白的Unigene36450序列进行了克隆,并应用荧光定量PCR和RNA干扰(RNAi)技术分别对该基因的表达规律和功能进行了研究。结果表明:克隆的Unigene36450全长cDNA开放阅读框长585bp,编码的蛋白含194个氨基酸,具有典型的表皮蛋白R&R保守结构域,命名为NlICP。转录水平的时序表达分析发现,NlICP仅在褐飞虱若虫期表达,且在3龄若虫体内表达量最高,提示该基因编码的蛋白属于幼虫表皮蛋白。RNA干扰结果显示,取食dsNlICP的1龄末2龄初(孵化后第3天)若虫在干扰6 d和8 d时,NlICP基因的表达量分别较取食dsGFP的对照组下降58.8%和45.6%,差异极显著(P<0.01);干扰后部分褐飞虱若虫因蜕皮不完全死亡,干扰5 d的存活率较对照下降26.7%。本研究结果提示,NlICP与褐飞虱若虫的生长发育及蜕皮相关,可以作为褐飞虱防治的潜在靶标基因。 展开更多
关键词 褐飞虱 表皮蛋白 基因克隆 表达谱 RNA干扰 荧光定量PCR
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柞蚕RR-1亚族表皮蛋白基因ApCP12与ApCP23的表达特征与功能分析 被引量:6
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作者 马月月 刘微 +6 位作者 王勇 王德意 雷飘 汝玉涛 姜义仁 杨瑞生 秦利 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期188-199,共12页
【目的】表皮蛋白(cuticular proteins,CPs)种类丰富,在昆虫生长发育中起着重要作用。本研究旨在丰富柞蚕Antheraea pernyi体内所含表皮蛋白的类型,探讨不同发育阶段表皮蛋白基因的表达规律。【方法】利用PCR及3'RACE技术从柞蚕幼... 【目的】表皮蛋白(cuticular proteins,CPs)种类丰富,在昆虫生长发育中起着重要作用。本研究旨在丰富柞蚕Antheraea pernyi体内所含表皮蛋白的类型,探讨不同发育阶段表皮蛋白基因的表达规律。【方法】利用PCR及3'RACE技术从柞蚕幼虫表皮组织中克隆得到两个表皮蛋白基因,并进行生物信息学分析及系统进化分析;半定量RT-PCR检测该基因在柞蚕胚胎发育期的表达规律及在幼虫各组织中的表达分布;实时荧光定量PCR(qPCR)分析该基因在柞蚕不同发育时期及3龄幼虫RNAi后的表达量变化。【结果】克隆获得两个柞蚕表皮蛋白基因并分别命名为ApCP12和ApCP23,GenBank登录号分别为MF318874和MF318875。生物信息学分析表明,ApCP12基因长度为690 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)长336 bp,编码111个氨基酸,推测得到的蛋白质分子量为12 kD;ApCP23长度为1 243 bp,ORF长度为594 bp,编码197个氨基酸,相对分子质量为23 kD。两种蛋白都具有RR-1亚族的保守基序,与RR-2亚族表皮蛋白聚类分析位于不同分支。组织特异性表明,ApCP12基因在柞蚕幼虫各组织中的分布比ApCP23更为广泛。柞蚕不同发育时期中,ApCP12在胚胎发育期表达量逐渐升高;幼虫眠起3 d内相对于眠期,ApCP12的表达量最高增加了约3倍,而ApCP23的表达量增加了13倍;蛹黑化时期,ApCP12的表达量高于ApCP23;羽化前期,基因的表达量无明显变化,直至羽化前1 d,ApCP12和ApCP23的表达量相对于注射蜕皮激素第1天分别增加了3.5和3倍。RNAi处理后,3龄幼虫体内ApCP12的表达量下降了5倍,ApCP23的表达量降低了3倍。【结论】结果提示,RR-1亚族的这两种柞蚕表皮蛋白参与了柞蚕不同发育阶段幼虫表皮、蛹皮、成虫表皮的构建,与柞蚕生长发育的整个生命周期关系密切。 展开更多
关键词 柞蚕 表皮蛋白 发育阶段 基因表达 RNA干扰
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绿盲蝽表皮蛋白基因AlCP17的克隆、多克隆抗体制备及表达谱分析 被引量:1
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作者 谭永安 张杰钰 +3 位作者 姜义平 赵静 肖留斌 戈林泉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期37-44,共8页
【目的】本研究旨在通过克隆绿盲蝽Apolygus lucorum表皮蛋白(cuticular protein,CP)基因AlCP17、制备其多克隆抗体和分析其时空表达特性,为AlCP17蛋白功能的研究奠定基础,也为进一步解析绿盲蝽表皮发育过程中的信号通路图谱提供依据。... 【目的】本研究旨在通过克隆绿盲蝽Apolygus lucorum表皮蛋白(cuticular protein,CP)基因AlCP17、制备其多克隆抗体和分析其时空表达特性,为AlCP17蛋白功能的研究奠定基础,也为进一步解析绿盲蝽表皮发育过程中的信号通路图谱提供依据。【方法】基于前期转录组数据克隆绿盲蝽AlCP17的cDNA全长序列并进行生物信息学分析;构建AlCP17原核表达载体pCZN1-AlCP17并转化大肠杆菌Escherichia coli进行体外表达,利用纯化后的重组蛋白制备AlCP17蛋白多克隆抗体;qRT-PCR检测AlCP17在绿盲蝽不同发育阶段(1-5龄若虫和成虫)和3龄初期若虫不同组织(头、胸、足、中肠、脂肪体和表皮)中的表达谱。【结果】克隆获得绿盲蝽AlCP17全长cDNA序列(GenBank登录号:OM302231),其开放阅读框长594 bp,编码197个氨基酸,预测蛋白分子量为21.69 kD,理论等电点为6.11。编码的蛋白质具有典型的表皮蛋白结构特征,含有节肢动物表皮蛋白几丁质保守结合域(non-cysCBD),即Chitin_bind_4结构域;氨基酸序列比结果对显示,AlCP17与半翅目(Hemiptera)臭虫科(Cimicidae)温带臭虫Cimex lectularius的CPA2B-like的氨基酸序列一致性最高(76.29%);系统发育进化树显示,CP是一种高度保守的蛋白,与温带臭虫的CPA2B-like和茶翅蝽Halyomorpha halys的CP7-like相似性高。IPTG诱导获得原核表达重组蛋白AlCP17,经纯化后制备的AlCP17多克隆抗体纯化效果较好,可以用于后续实验。AlCP17在绿盲蝽不同发育阶段和3龄初期若虫不同组织中均有表达,在初孵1龄若虫中表达量达到峰值,且在若虫各龄期的末期表达量显著上升;在3龄初期若虫中肠中表达量最高。【结论】克隆了绿盲蝽AlCP17基因cDNA全长序列,AlCP17具有昆虫表皮蛋白的典型特征,AlCP17在绿盲蝽体内的表达具有发育阶段特异性和组织特异性。这些结果为今后研究这一蛋白在绿盲蝽表皮发育过程中的生理功能奠定了基础。 展开更多
关键词 绿盲蝽 表皮蛋白 RACE 原核表达 多克隆抗体
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沙葱萤叶甲表皮蛋白基因GdAbd的克隆及对温度胁迫的响应 被引量:5
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作者 单艳敏 张卓然 +2 位作者 周晓榕 乌英嘎 庞保平 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期514-521,共8页
为揭示沙葱萤叶甲Galeruca daurica表皮蛋白基因GdAbd在其应对温度胁迫中的作用,采用RACE技术克隆表皮蛋白基因GdAbd的cDNA全长序列,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量(qPCR)技术比较GdAbd经不同温度处理1 h及25℃恢复30 min后在... 为揭示沙葱萤叶甲Galeruca daurica表皮蛋白基因GdAbd在其应对温度胁迫中的作用,采用RACE技术克隆表皮蛋白基因GdAbd的cDNA全长序列,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量(qPCR)技术比较GdAbd经不同温度处理1 h及25℃恢复30 min后在沙葱萤叶甲2龄幼虫体内的表达水平。结果表明,GdAbd基因全长708 bp(GenBank登录号:MG874710),开放阅读框为477 bp,编码158个氨基酸;蛋白预测分子量为16.98 kD,等电点为4.26;编码蛋白具有典型的表皮蛋白R&R保守结构域,属于RR-2亚族;具有1个跨膜结构和1个信号肽。同源序列比对和系统发育分析表明,GdAbd与马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata SgAbd-4的同源性最高,氨基酸序列一致性达50.63%。qPCR检测结果表明,与25℃对照相比,GdAbd基因表达水平在-10~5℃低温胁迫时未发生显著变化,而在35℃高温胁迫时发生显著上调;-10、-5和0℃低温胁迫后25℃恢复30 min可诱导GdAbd显著上调表达,但5℃低温和35℃高温胁迫处理与对照差异不显著。说明短时低温胁迫不能显著影响GdAbd表达,但胁迫后回温可诱导其上调表达。 展开更多
关键词 沙葱萤叶甲 表皮蛋白 基因克隆 基因表达 温度胁迫
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蜜蜂表皮蛋白apidermin(apd)基因家族3个新成员的特性鉴定及昆虫APD家族序列特征的分析 被引量:5
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作者 孙亮先 黄周英 +3 位作者 郑华军 葛清秀 龚丽萍 陈怀宇 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期12-23,共12页
Apidermin(APD)蛋白家族是一个新的昆虫结构性表皮蛋白家族。本研究结合生物信息学和RT-PCR扩增,对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称"意蜂")的apd-1-like,apd-3-like和中华蜜蜂Apis cerena cerena(简称"中蜂&quo... Apidermin(APD)蛋白家族是一个新的昆虫结构性表皮蛋白家族。本研究结合生物信息学和RT-PCR扩增,对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称"意蜂")的apd-1-like,apd-3-like和中华蜜蜂Apis cerena cerena(简称"中蜂")的apd-2等3个新的apd基因的结构特征和表达进行了分析,并分析了昆虫APD蛋白家族的序列特征。结果显示,在西方蜜蜂Apis mellifera(简称"西蜂")中,apd基因家族的6个成员串联排列在基因组序列第4号连锁群上,它们在A.m.ligustica雄蜂头部中的转录水平差异明显,且其启动子序列所含顺式元件也不同。中蜂apd-2和意蜂apd-1-like都含有3个外显子和2个内含子,而意蜂apd-3-like则由4个外显子和3个内含子组成。蛋白序列分析结果显示,目前已知的10条APD蛋白序列N末端均具有相似的信号肽序列,其成熟蛋白分子量为6.0~37.0kD,pI为6.2~10.8。其中西蜂的APD1-3、APD-like和东方蜜蜂Apiscerena的APD-2等5条较短的多肽中疏水氨基酸残基达52%~67%,且Ala含量最为丰富(占25%~34%);而丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis的APD1-3和西蜂APD-1-like,APD-3-like等另外5条APD多肽富含Gly(21%~30%),其序列中疏水氨基酸残基含量为35%~41%。多肽序列多重比对和系统进化分析结果显示,APD家族可划分为2个亚家族。亚家族Ⅰ含有西蜂APD1-3和东方蜜蜂APD-2等4条较短的多肽序列,其N末端为一个长33aa的保守基序;亚家族Ⅱ由另外6条相对较长的多肽序列组成,其N末端保守基序长50aa,C末端保守基序长16aa。本文所描述的APD蛋白家族序列特征有助于以后从其他昆虫中鉴定新的apd基因。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 东方蜜蜂 表皮蛋白 apidermin基因 APD家族 序列分析 生物信息学分析
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西方蜜蜂表皮蛋白基因apd-like转录起始位点的定位及cDNA序列的分析 被引量:5
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作者 孙亮先 黄周英 +1 位作者 郑华军 游燕琳 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期224-231,共8页
Apidermin蛋白家族是根据蜜蜂表皮蛋白apidermin1-3(APD1-3)而命名的一个新型的昆虫结构性表皮蛋白家族。为了鉴定西方蜜蜂Apis mellifera基因组序列上毗邻基因簇apd1-3的一个预测基因座LOC727145是否为一个新的apd基因,本研究在用5′Lo... Apidermin蛋白家族是根据蜜蜂表皮蛋白apidermin1-3(APD1-3)而命名的一个新型的昆虫结构性表皮蛋白家族。为了鉴定西方蜜蜂Apis mellifera基因组序列上毗邻基因簇apd1-3的一个预测基因座LOC727145是否为一个新的apd基因,本研究在用5′LongSAGE标签定位该基因的转录起始位点(TSS)的基础上,利用其中的3条5′LongSAGE标签序列作为上游引物,通过RT-PCR方法克隆了该基因的cDNA序列(GenBank登录号:GU358197,GU358199,GU358198)。生物信息学分析发现,基因座LOC727145含有2个外显子和1个"GT-AG"型内含子,其cDNA序列富含GC(70%),可编码一条长152aa残基的高度疏水性多肽。此多肽序列的氨基酸组成与蜜蜂APD1-3表皮蛋白类似,富含Ala,Gly,Pro,Leu和Val5种氨基酸(占77%),其中Ala残基含量最高(29%)。该多肽序列与蜜蜂APD-1表皮蛋白序列的相似性为50%,且其N末端的预测信号肽序列与APD蛋白的信号肽序列类似。5′LongSAGE标签的基因组定位结果显示,基因座LOC727145在雄蜂头部中表达丰度很高,RNA PolⅡ可从6个不同的TSS上以不同效率起始转录,其中由一个优势TSS上起始了90%的转录。本研究为apidermin表皮蛋白家族增添了一个新成员,命名为apidermin-like(apd-like)。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 5′LongSAGE 表皮蛋白 apd-like基因 转录起始位点(TSS)
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Proteomic composition of the acrostyle" Novel approaches to identify cuticular proteins involved in virus-insect interactions 被引量:3
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作者 Craig Graham Webster Maelle Thillier +3 位作者 Elodie Pirolles Bastien Cayrol Stephane Blanc Marilyne Uzest 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2017年第6期990-1002,共13页
The acrostyle is a distinct anatomical region present on the cuticle at the inner face of the common food/salivary canal at the tip of aphid maxillary stylets. This conserved structure is of particular interest as it ... The acrostyle is a distinct anatomical region present on the cuticle at the inner face of the common food/salivary canal at the tip of aphid maxillary stylets. This conserved structure is of particular interest as it harbors the protein receptors of at least l plant virus, Cauliflower mosaic virus', and presumably has other roles in plant-insect interactions. Previously we reported immunolabeling of a highly conserved motif of cuticular proteins from the CPR family (named for the presence of a Rebers and Riddiford consensus) within the acrostyle. Here we report the development of novel tools to further study the proteomic composition of this region and to identify proteins involved in insect- virus interactions. Using a series of antibodies against cuticular proteins from the RR-2 subfamily, we identified additional peptides present within the acrostyle. Our results demonstrated that the acrostyle is a complex structure containing multiple domains of cuticular proteins accessible for interaction. In addition, an array of overlapping peptides,which covers the diversity of the majority of the RR-2 subfamily, was ~tevelopect as a generic tool to characterize cuticular protein/pathogen interactions. Upon probing this array with Cucumber mosaic virus particles, consensus peptide sequences from hybridizing peptides were identified. Use of these novel tools has extended our knowledge of the proteomic composition of insect maxillary stylets and identified sequences that could be involved in virus binding, thus contributing to further elucidation of the various properties and functions of the acrostyle. 展开更多
关键词 acrostyle APHID cuticular protein IMMUNOLABELING peptide array stylet
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亚洲玉米螟CPT1蛋白的表达、纯化和与几丁质的结合能力
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作者 蒋望 包涵 +2 位作者 陈金利 刘田 杨青 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期462-470,共9页
亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis是为害我国主要农作物玉米的一种重要害虫。昆虫表皮在运动、抵御机械损伤及对抗外界环境压力等方面发挥关键性作用。Tweedle(CPT)家族表皮蛋白在形成昆虫表皮中发挥重要作用,研究CPT有助于开发新一代害... 亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis是为害我国主要农作物玉米的一种重要害虫。昆虫表皮在运动、抵御机械损伤及对抗外界环境压力等方面发挥关键性作用。Tweedle(CPT)家族表皮蛋白在形成昆虫表皮中发挥重要作用,研究CPT有助于开发新一代害虫防治方法。本研究在大肠杆菌系统中以包涵体的形式重组表达了Of CPT1蛋白,使用金属螯合层析进行纯化,复性得到了Of CPT1蛋白,收率为50 mg/L。几丁质结合试验发现,Of CPT1对α-几丁质、β-几丁质、壳聚糖、胶体几丁质和几丁质纳米微晶均有一定的结合能力,其中与几丁质纳米微丝结合能力最强。圆二色光谱结果表明,Of CPT1蛋白与壳聚糖结合后二级结构从以α-螺旋占主导变为以β-折叠占主导。本研究利用原核表达系统获得了亚洲玉米螟重组CPT蛋白并表征了它的部分生物化学性质。 展开更多
关键词 表皮蛋白 Tweedle 几丁质结合 杀虫剂靶标
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甘蓝型油菜长链烷烃合成相关基因的克隆及其与BnCER1-2的互作
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作者 柏成成 姚小尧 +10 位作者 王雨璐 王赛玉 李金莹 蒋有为 靳舒荣 陈春杰 刘渔 魏星玥 徐新福 李加纳 倪郁 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1016-1027,共12页
长链烷烃是甘蓝型油菜角质层蜡质的优势组分,在阻止植株的非气孔性水分散失中起主要作用。BnCER1-2催化甘蓝型油菜长链烷烃的生物合成,但BnCER1-2是否通过与其他蛋白互作调控长链烷烃合成还不清楚。前期通过甘蓝型油菜蜡质差异材料转录... 长链烷烃是甘蓝型油菜角质层蜡质的优势组分,在阻止植株的非气孔性水分散失中起主要作用。BnCER1-2催化甘蓝型油菜长链烷烃的生物合成,但BnCER1-2是否通过与其他蛋白互作调控长链烷烃合成还不清楚。前期通过甘蓝型油菜蜡质差异材料转录组筛选获得4个长链烷烃合成相关基因BnCER3.a10、BnCER3.c02、BnCYTB5B.c09、BnCER1-L2.a05。本研究克隆了这4个基因的编码序列,序列分析表明BnCER3.a10/c02和BnCER1-L2.a05前体蛋白具有典型的脂肪酸羟化酶与WAX2C末端结构域,而BnCYTB5B.c09具有Cyt_B5蛋白家族保守结构域。亚细胞定位结果表明,BnCER3.a10/c02、BnCYTB5B.c09和BnCER1-L2.a05均定位于细胞内质网,与BnCER1-2共定位。双分子荧光互补(bimolecular fluorescent complementation,BiFC)与萤火素酶互补试验(luciferase complementation assay,LCA)检测结果表明,BnCER3.a10、BnCYTB5B.c09、BnCER1-L2.a05与BnCER1-2蛋白存在相互作用,而BnCER3.c02与BnCER1-2蛋白不互作。实时荧光定量PCR结果显示,与BnCER1-2的表达模式一致,BnCER3.a10和BnCYTB5B.c09主要在甘蓝型油菜茎/叶中表达,并受干旱胁迫诱导显著上调。BnCER3.a10在NaCl与低温胁迫下表达量显著减少,其中BnCER3.a10受MeJA、ACC诱导显著下调,BnCYTB5B.c09表达受ABA诱导上调。BnCER1-L2.a05在花中的表达量最高,在茎和叶片中的表达量最低,在干旱、低温及NaCl胁迫下转录水平均显著下降,其中SA诱导BnCER1-L2.a05表达上调,而MeJA诱导其表达下调。蜡质差异材料荧光定量PCR结果证实,BnCER3.a10与BnCYTB5B.c09在高蜡(烷)油菜中的表达量显著高于低蜡(烷)油菜,而BnCER1-L2.a05则呈相反变化。综合分析认为,BnCER3.a10和BnCYTB5B.c09可能通过与BnCER1-2互作而促进甘蓝型油菜长链烷烃的生物合成,BnCER1-L2.a05可能通过与BnCER1-2互作负调控长链烷烃的合成。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 角质层蜡质 蛋白互作 长链烷烃
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Identification and temporal expression profiles of cuticular proteins in the endoparasitoid wasp,Microplitis mediator 被引量:4
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作者 Olga Volovych Zhe Lin +2 位作者 Jie Du Hong Jiang Zhen Zou 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2020年第5期998-1018,共21页
Recently,parasitoid wasp species Microplitis mediator has evoked increasing research attention due to its possible use in the control of Lepidoptera insects.Because insect development involves changes in cuticle compo... Recently,parasitoid wasp species Microplitis mediator has evoked increasing research attention due to its possible use in the control of Lepidoptera insects.Because insect development involves changes in cuticle composition,identification and expression analysis of M.mediator cuticular proteins may clarify the mechanisms involved in parasite development processes.We found 70 cuticular proteins from the M.mediator transcrip-tome and divided them into seven distinct families.Expression profiling indicated that most of these cuticular protein genes have expression peaks specific for one particular developmental stage of M.mediator.Eggs and pupae have the highest number of tran-scriptionally active cuticular protein genes(47 and 52 respectively).Only 12 of these genes maintained high expression activity during late larval development.Functional analysis of two larval proteins,MmCPR3 and MmCPR 14,suggested their important role in the proper organization of the cuticle layers of larvac.During M.mediator larval development,normal cuticle formation can be supported by a limited number of cuticular proteins. 展开更多
关键词 cuticular protein expression pattern Microplis mediator TRANSCRIPTOME
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棉铃虫表皮蛋白基因CP22和CP14的表达特征及其对甲氧虫酰肼的响应 被引量:4
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作者 张万娜 刘香亚 +1 位作者 赖乾 肖海军 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1043-1053,共11页
为揭示棉铃虫Helicoverpa armigera表皮蛋白(cuticular protein,CP)基因在其生长发育及应对药剂胁迫中的作用,克隆棉铃虫2个CP基因CP22和CP14,利用实时荧光定量PCR技术分析其在不同发育阶段和不同组织中的相对表达量,并于显微镜下观察... 为揭示棉铃虫Helicoverpa armigera表皮蛋白(cuticular protein,CP)基因在其生长发育及应对药剂胁迫中的作用,克隆棉铃虫2个CP基因CP22和CP14,利用实时荧光定量PCR技术分析其在不同发育阶段和不同组织中的相对表达量,并于显微镜下观察甲氧虫酰肼亚致死剂量处理后棉铃虫3龄幼虫的表皮形态,并用实时荧光定量PCR技术测定药后CP22和CP14基因的相对表达量。结果显示,CP22和CP14的开放阅读框全长分别为570 bp和393 bp,分别编码189个和130个氨基酸;CP22和CP14都具有1个几丁质结合域,属于CPR家族RR-1亚类;CP22和CP14基因均在棉铃虫5龄幼虫表皮中表达水平高;这2个基因在棉铃虫幼虫期的表达水平高于在卵期、蛹期和成虫期的表达水平,且在4龄幼虫体内表达量最高,在蜕皮后随着日龄的增加表达量逐渐降低;甲氧虫酰肼处理后棉铃虫3龄幼虫表皮黑化、皱缩,发生蜕皮异常,显微观察显示其内外表皮分离,真皮细胞解体;甲氧虫酰肼处理后24 h和48 h,棉铃虫CP22和CP14基因的相对表达量显著上调。表明棉铃虫CP22和CP14基因参与棉铃虫幼虫蜕皮,并且响应甲氧虫酰肼胁迫,可作为防治棉铃虫的潜在靶标基因。 展开更多
关键词 棉铃虫 表皮蛋白 基因表达 甲氧虫酰肼 响应 显微观察
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双叉犀金龟表皮蛋白TdCPR12611与TdCPR7854的表达纯化及特性分析 被引量:3
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作者 叶长青 包涵 +1 位作者 刘田 杨青 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期19-29,共11页
【目的】探析双叉犀金龟Trypoxylus dichotomus表皮蛋白的序列特征及生化性质。【方法】利用RT-PCR克隆双叉犀金龟表皮蛋白基因,利用生物信息学方法分析表皮蛋白的结构特征及系统发育;采用大肠杆菌Escherichia coli表达系统对双叉犀金... 【目的】探析双叉犀金龟Trypoxylus dichotomus表皮蛋白的序列特征及生化性质。【方法】利用RT-PCR克隆双叉犀金龟表皮蛋白基因,利用生物信息学方法分析表皮蛋白的结构特征及系统发育;采用大肠杆菌Escherichia coli表达系统对双叉犀金龟表皮蛋白进行重组表达,并通过金属离子鳌合层析的方法对重组蛋白进行纯化;采用体外结合实验检测双叉犀金龟表皮蛋白与α-几丁质(α-chitin)、β-几丁质(β-chitin)、壳聚糖(chitosan)和胶体几丁质(colloidal chitin)的结合能力;观察确定蛋白液液相分离(liquid-liquid phase separation,LLPS)性质。【结果】克隆获得双叉犀金龟表皮蛋白基因TdCPR 12611(GenBank登录号:MT813021)和TdCPR 7854(GenBank登录号:MT813022)。系统进化分析结果表明,TdCPR12611与食粪金龟Onthophagus taurus OtCP-1的亲缘关系最近;TdCPR7854与食粪金龟的OtCP-acp20-1,OtCP-acp20-2和OtCP-acp20-3的亲缘关系最为接近,它们均属于CPR_RR-2家族。原核表达和纯化获得重组表皮蛋白TdCPR12611和TdCPR7854。两重组表皮蛋白与4种类型的几丁质具有不同结合能力,其中有41.4%的TdCPR12611与壳聚糖结合,而有62.3%的TdCPR7854与β-几丁质结合。TdCPR12611具有内部较为无序的结构,并能够在室温条件下自发团聚形成液液相分离现象,而TdCPR7854不能。【结论】本研究测定分析了双叉犀金龟CPR_RR-2家族表皮蛋白TdCPR12611与TdCPR7854的序列特征和与几丁质的结合特性。研究结果有利于加深人们对于昆虫表皮装配机制的了解,为蛋白仿生材料开发提供思路。 展开更多
关键词 双叉犀金龟 表皮蛋白 CPR蛋白 RR-2家族 几丁质结合 液液相分离 仿生材料
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飞蝗表皮蛋白Lm Knk3-5′的抗体制备及组织定位 被引量:2
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作者 张睿 张学尧 +2 位作者 赵小明 马恩波 张建珍 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期329-338,共10页
【目的】LmKnickkopf3-5′(LmKnk3-5′)是飞蝗(Locusta migratoria)蜕皮发育中重要的表皮蛋白。本文旨在制备LmKnk3-5′特异抗体并对其进行组织定位,为LmKnk3-5′生物学功能研究提供蛋白水平的证据,同时为进一步深入探究LmKnk3-5′与其... 【目的】LmKnickkopf3-5′(LmKnk3-5′)是飞蝗(Locusta migratoria)蜕皮发育中重要的表皮蛋白。本文旨在制备LmKnk3-5′特异抗体并对其进行组织定位,为LmKnk3-5′生物学功能研究提供蛋白水平的证据,同时为进一步深入探究LmKnk3-5′与其他表皮蛋白在飞蝗表皮形成过程中的协同作用打下基础。【方法】首先比对飞蝗Knickkopf(Knk)家族4个基因LmKnk、LmKnk2、LmKnk3-FL和LmKnk3-5′的氨基酸序列,选取LmKnk3-5′的3段特异抗原序列R1、R2和R3,设计包含Bam H I、Hind III酶切位点的引物,以LmKnk3-5′全长cDNA为模板,PCR获得LmKnk3-5′的特异抗原片段;然后将特异抗原片段与pET-32a经双酶切、T4连接酶连接、测序验证、成功构建重组质粒后,转入BL21(DE3)表达菌株中,加入IPTG(终浓度0.5 mmol·L-1)低温(16℃)诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE检测重组蛋白表达情况;接着扩大培养可在菌体裂解液的上清中表达重组融合蛋白的大肠杆菌,提取蛋白并用Ni-NTA对其进行纯化,之后再用纯化后的重组特异抗原免疫小鼠4次,获得anti-LmKnk3-5′多克隆抗体,ELISA法对其进行效价检测,并用Western blot法检测其特异性。取飞蝗5龄若虫第8天表皮,制备石蜡切片,通过免疫组化法对LmKnk3-5′蛋白进行组织定位。【结果】通过氨基酸序列比对,选取LmKnk3-5′的特异抗原区域R1、R2和R3,分别包含208、147和131个氨基酸残基,蛋白理论分子量分别为24.0、17.0和14.8 kD。酶切连接后,成功获得pET-32a-R1、pET-32a-R2和pET-32a-R3重组质粒。诱导表达检测,发现只有含pET-32a-R2的表达菌在菌体裂解液的上清液中大量表达重组蛋白。将其扩大培养纯化后获得R2重组融合蛋白,免疫小鼠取抗血清进行效价检测,抗体效价高达1﹕512 000,可满足抗体使用需求。Western blot结果表明,注射ds LmKnk3-5′后飞蝗体壁LmKnk3-5′的蛋白表达显著减少,表明anti-LmKnk3-5′抗体特异性良好。免疫组化试� 展开更多
关键词 飞蝗 表皮蛋白 LmKnk3-5′ 抗体制备 组织定位
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日本沼虾表皮蛋白-5基因全长cDNA克隆及表达分析 被引量:3
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作者 郑征帆 吕艳杰 +1 位作者 王佩 宁黔冀 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期747-752,共6页
为探究甲壳动物表皮蛋白多样性及其功能,根据表皮转录组资料,利用RACE技术扩增得到日本沼虾表皮蛋白-5基因的cDNA全长序列,分析其生物信息学、不同蜕皮时期的表达特征以及KK-42对其表达特征的影响。日本沼虾表皮蛋白-5基因的cDNA全长796... 为探究甲壳动物表皮蛋白多样性及其功能,根据表皮转录组资料,利用RACE技术扩增得到日本沼虾表皮蛋白-5基因的cDNA全长序列,分析其生物信息学、不同蜕皮时期的表达特征以及KK-42对其表达特征的影响。日本沼虾表皮蛋白-5基因的cDNA全长796bp,开放阅读框477bp,编码158个氨基酸,含RR基序,预测蛋白等电点为4.22,分子量为16.46ku;氨基酸序列比对发现日本沼虾表皮蛋白-5与克氏原螯虾Casp-2相似性最高,为76%,与其他甲壳动物表皮蛋白相似性为41%~53%。实时荧光定量PCR结果显示,日本沼虾表皮蛋白-5基因在3个时期——蜕皮间期、蜕皮前早期和蜕皮前晚期均有表达,其中在脱皮前晚期的相对表达量最高,为蜕皮间期的1400倍,与之有极显著差异(P<0.01)。KK-42处理显著上调日本沼虾表皮蛋白-5基因在蜕皮前早期的表达,在处理后3、6h和48h表达量分别是对照组的6.3、4.8和11.4倍。KK-42诱导日本沼虾表皮蛋白-5基因的表达,使峰值前移,这可能是KK-42缩短日本沼虾幼虾蜕皮周期的机制之一。 展开更多
关键词 日本沼虾 表皮蛋白 基因克隆 表达 KK-42
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双叉犀金龟表皮蛋白Td14144表达纯化及性质研究 被引量:1
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作者 刘晶 包涵 +3 位作者 陈磊 刘源涛 刘田 杨青 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2022年第2期513-520,共8页
表皮蛋白是昆虫表皮的重要组成成份,在昆虫的生长发育过程中起着重要作用,有可能成为农业害虫的防治靶标。双叉犀金龟Trypoxylus dichotomus是铁皮石斛的一种重要害虫,且对其表皮蛋白的研究较少。本文通过研究双叉犀金龟表皮蛋白Td1414... 表皮蛋白是昆虫表皮的重要组成成份,在昆虫的生长发育过程中起着重要作用,有可能成为农业害虫的防治靶标。双叉犀金龟Trypoxylus dichotomus是铁皮石斛的一种重要害虫,且对其表皮蛋白的研究较少。本文通过研究双叉犀金龟表皮蛋白Td14144的表达纯化及与几丁质结合的相关性质明确Td14144功能的重要性。根据双叉犀金龟转录组测序数据,利用RT-PCR获得表皮蛋白Td14144基因(GenBank登录号:MZ463195),并对其进行生物信息学分析。序列分析表明表皮蛋白Td14144属于CPR家族中RR-2亚族,含有R&R保守结构域;系统进化分析结果表明,Td14144与光肩星天牛Anoplophora glabripennis的AgCP的亲缘关系最近。随后将基因片段与pET-28a载体同源重组构建表达载体pET28a-14144,在大肠杆菌Escherichia coli BL21中原核表达,并使用金属螯合层析进行分离纯化,SDS-PAGE及Western blot验证重组蛋白的表达纯化,成功获得95%以上纯度的Td14144蛋白。利用几丁质结合试验评估Td14144与不同类型几丁质结合的能力,发现Td14144可以与壳聚糖、α-几丁质、β-几丁质和胶体几丁质结合,其中对壳聚糖和α-几丁质的结合能力最强。 展开更多
关键词 双叉犀金龟 表皮蛋白 几丁质结合蛋白
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中华按蚊CPF家族表皮蛋白基因的全基因组鉴定及其特征分析 被引量:2
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作者 刘柏琦 乔梁 +2 位作者 许柏英 郑学令 陈斌 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期622-631,共10页
【目的】鉴定中华按蚊Anopheles sinensis基因组上的CPF家族表皮蛋白基因,分析其基因结构和特征,推测其可能的生物学功能;同时比较研究代表性蚊种的CPF家族基因,提供CPF家族基因的信息框架。【方法】基于中华按蚊An.sinensis、冈比亚按... 【目的】鉴定中华按蚊Anopheles sinensis基因组上的CPF家族表皮蛋白基因,分析其基因结构和特征,推测其可能的生物学功能;同时比较研究代表性蚊种的CPF家族基因,提供CPF家族基因的信息框架。【方法】基于中华按蚊An.sinensis、冈比亚按蚊An.gambiae、微小按蚊An.minimus、埃及伊蚊Aedes aegypti、致倦库蚊Culex quinquefasciatus和黑腹果蝇Drosophila melanogaster全基因组序列,以冈比亚按蚊CPF家族基因序列为询问序列,采用BLASTP,TBLASTN和HMM方法鉴定这些物种的CPF家族基因;利用生物信息学方法预测中华按蚊CPF家族基因的结构、剪切模式、信号肽、跨膜区、结构域和3D结构等;采用最大似然法(maximum likelihood,ML)构建这些物种的系统发生关系,推断CPF家族基因的起源和进化。【结果】中华按蚊、冈比亚按蚊、微小按蚊、埃及伊蚊、致倦库蚊和黑腹果蝇全基因组共有4,4,4,3,3和3个CPF家族基因。中华按蚊的CPF基因被分别命名为As CPF1,As CPF2,As CPF3和As CPF4,这些As CPF基因的全长c DNA序列分别为736,2 021,531和1 001 bp,分别编码219,345,148和185个氨基酸。As CPF1,As CPF2和As CPF3仅含有一个内含子,但As CPF4含有3个内含子,所有内含子均为0位内含子。As CPF1,As CPF2,As CPF3和As CPF4分别有3,2,1和2个不同的选择性剪切子。As CPF3的表达量最高,其次是As CPF4,As CPF2和As CPF1。推测的As CPF1,As CPF2,As CPF3和As CPF4的理论分子量分别为22.86,36.47,15.08和18.66 k D,等电点分别为9.08,8.97,9.44和9.16。As CPF家族蛋白含有保守的44个氨基酸基序和C-末端基序;As CPF1,As CPF3和As CPF4具有信号肽,为分泌型蛋白,而As CPF2缺乏信号肽,为非分泌蛋白。二级结构分析显示,4个As CPF均具有α-螺旋,无规卷曲和延伸链,只有As CPF4有一段跨膜片段,位于第5-27位氨基酸。系统发育分析显示,CPF3基因可能是最早分化出来的CPF家族基因,CPF1和CPF2基因可能是同一祖先基因经� 展开更多
关键词 中华按蚊 表皮蛋白 CPF家族 保守基序 进化
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