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铜锌超氧化物歧化酶的模拟化学研究 被引量：25
1
作者 罗勤慧 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1997年第7期1012-1018,共7页
介绍了超氧化物歧化酶（SOD）的模拟化学的意义和研究现状及作者的研究成果．讨论了模型配合物对SOD活性中心的模拟、咪唑桥行为的模拟及铜（Ⅱ）中心结构和功能的关系．报道了SOD模拟物歧化超氧离子的动力学和生物学效能的研究现状．... 介绍了超氧化物歧化酶（SOD）的模拟化学的意义和研究现状及作者的研究成果．讨论了模型配合物对SOD活性中心的模拟、咪唑桥行为的模拟及铜（Ⅱ）中心结构和功能的关系．报道了SOD模拟物歧化超氧离子的动力学和生物学效能的研究现状．根据模拟物与SOD的结构和功能的比较，对优良的模拟物的结构特点进行了讨论． 展开更多
关键词 模拟 酶 铜 锌 超氧化物歧化酶 活性中心
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高压氧治疗重度闭合性颅脑创伤的疗效及依达拉奉的干预作用 被引量：17
2
作者 蔡宏斌 葛朝明 +2 位作者 赵翀翀 张兰芳 闫湘 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期834-836,共3页
目的探讨高压氧(HBO)治疗重度闭合性颅脑损伤(TBI)患者的临床疗效和依达拉奉的干预作用。方法42例TBI患者,随机分为两组,HBO治疗组21例,行HBO和其他常规治疗;依达拉奉干预组(EB干预组)21例,在HBO和其他常规治疗基础上加用依达拉奉;另选1... 目的探讨高压氧(HBO)治疗重度闭合性颅脑损伤(TBI)患者的临床疗效和依达拉奉的干预作用。方法42例TBI患者,随机分为两组,HBO治疗组21例,行HBO和其他常规治疗;依达拉奉干预组(EB干预组)21例,在HBO和其他常规治疗基础上加用依达拉奉;另选12例健康志愿者为正常对照组。于治疗前、治疗14d后行格拉斯哥昏迷评分(GCS)并检测血清丙二醛(MDA)、蛋白质氧化硝基化指标3-硝基酪氨酸(3-nitrotynosine,3-NT)水平及抗氧化酶铜、锌离子超氧化物歧化酶(CuZn-superoxide dismutase,CuZn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-px)的活力变化,病程3个月时行格拉斯哥预后评分(GOS)。结果治疗前HBO治疗组和EB干预组的GCS、血清MDA、3-NT水平及CuZn-SOD、GSH-px活力间差异无统计学意义(P>0.05),但与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);而治疗后HBO治疗组和EB干预组上述各指标间差异均有统计学意义(P<0.05),病程3个月时两组患者GOS间差别亦有统计学意义(P<0.05)。结论依达拉奉联合HBO治疗重度闭合性TBI的疗效优于单纯HBO治疗。 展开更多
关键词 高压氧 依达拉奉 颅脑损伤 丙二醛 cu-zn超氧化物歧化酶
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天然铜－锌超氧化物歧化酶的电化学行为的研究 被引量：13
3
作者 韩吉林 陈洪渊 +1 位作者 钱雯 金生浩 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1994年第12期1778-1780,共3页
天然铜－锌超氧化物歧化酶的电化学行为的研究韩吉林，陈洪渊，钱雯，金生浩（南京大学化学系，南京，２１００９３）（南京医科大学）关键词铜－锌超氧化物歧化酶，极谱法，伏安法超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）是一种广泛存在于生物体内的... 天然铜－锌超氧化物歧化酶的电化学行为的研究韩吉林，陈洪渊，钱雯，金生浩（南京大学化学系，南京，２１００９３）（南京医科大学）关键词铜－锌超氧化物歧化酶，极谱法，伏安法超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）是一种广泛存在于生物体内的金属酶，它能够催化超氧阴离子自由基... 展开更多
关键词 铜锌歧化酶 相谱法 伏安法
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基于差异蛋白质组学解析一贯煎对大鼠肝硬化形成的影响 被引量：13
4
作者 申定珠 陶庆 +4 位作者 都金星 丁赛丹 陈高峰 胡义扬 刘平 《中西医结合学报》 CAS 2010年第2期158-167,共10页
目的:基于差异蛋白质组学探讨一贯煎干预肝硬化的部分效应机制。方法:48只Wistar雄性大鼠随机分为正常组(n=12)及造模组(n=36),采用50%四氯化碳(carbonte tra-chloride,CCl4)-橄榄油溶液1mL/kg腹腔注射(2次/周,共9周)制备大鼠肝硬化模... 目的:基于差异蛋白质组学探讨一贯煎干预肝硬化的部分效应机制。方法:48只Wistar雄性大鼠随机分为正常组(n=12)及造模组(n=36),采用50%四氯化碳(carbonte tra-chloride,CCl4)-橄榄油溶液1mL/kg腹腔注射(2次/周,共9周)制备大鼠肝硬化模型。于开始造模后3周和6周分别随机处死6只大鼠,作药物干预前的动态观察,其余24只模型大鼠于开始造模后第7周首日随机分为模型组(n=12)及一贯煎干预组(n=12)。大鼠于第9周末全部处死取材。双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离肝组织总蛋白,基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱及数据库查询鉴定差异表达蛋白质;差异蛋白质铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,Cu/Zn SOD)和DJ-1表达采用蛋白印迹法及免疫组织化学方法进行验证。结果:获得分辨率高、重复性好的肝组织2-DE图谱,经质谱鉴定的50个差异蛋白质中,与氧化应激相关的5个蛋白质分别是Cu/ZnSOD、DJ-1、谷胱甘肽合成酶、谷胱甘肽S-转移酶Yb-1亚基、醛酮还原酶7,A2。与正常组大鼠比较,模型组肝组织Cu/ZnSOD、DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶及醛酮还原酶7,A2的表达均显著降低,其中Cu/ZnSOD、醛酮还原酶7,A2在造模3周、6周及9周后呈梯级下降,而DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶于造模3周、6周及9周后均呈低水平表达;谷胱甘肽合成酶表达显著升高。治疗结束后与模型组比较,一贯煎组Cu/ZnSOD、DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶及醛酮还原酶7,A2表达均明显增高,谷胱甘肽合成酶表达显著降低。蛋白印迹法及免疫组织化学验证了Cu/ZnSOD、DJ-1在蛋白表达水平的差异,与蛋白质组学结果基本一致。结论:抗氧化应激功能降低是CCl4致大鼠肝硬化的重要病理环节,提高抗氧化应激功能相关蛋白的表达可能是一贯煎治疗CCl4所致大鼠肝硬化的主要效应机制。 展开更多
关键词 肝硬化 四氯化碳 一贯煎 蛋白质组学 铜/锌超氧化物歧化酶 DJ-1 大鼠
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SOD及其电子迁移促进剂L-半胱氨酸的Raman光谱 被引量：5
5
作者 曹晓卫 孟晓云 +3 位作者 杨海峰 吴霞琴 王桂华 章宗穰 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2001年第4期485-488,共4页
在以电化学方法证实了L 半胱氨酸对铜锌 超氧化物歧化酶在金丝电极上的电子传递过程起有效促进作用的基础上 ,应用共焦显微激光拉曼光谱测试技术对固体的L 半胱氨酸和铜锌 超氧化物歧化酶进行了测定和光谱分析。并对以电化学和浸渍两... 在以电化学方法证实了L 半胱氨酸对铜锌 超氧化物歧化酶在金丝电极上的电子传递过程起有效促进作用的基础上 ,应用共焦显微激光拉曼光谱测试技术对固体的L 半胱氨酸和铜锌 超氧化物歧化酶进行了测定和光谱分析。并对以电化学和浸渍两种不同方法修饰在金电极上的L 半胱氨酸 ,也作了相应的拉曼光谱测试研究。 展开更多
关键词 拉曼光谱 L-半胱氨酸 铜锌-超氧化物歧化酶 修饰电极 光谱分析 电子迁移促进剂
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褶纹冠蚌铜锌超氧化物歧化酶的可溶性表达及其活性分析 被引量：6
6
作者 徐欢欢 范小勇 +2 位作者 马辉 胡宝庆 文春根 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期156-160,共5页
超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,EC1.15.1.1,简称SOD）是机体细胞抵御氧化损伤最重要的酶类之一,广泛存在于需氧生物、耐氧生物及某些厌氧微生物中。目前已知的SOD主要分为三类,即Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和Fe-SOD。其中,Cu/Zn-SOD主... 超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,EC1.15.1.1,简称SOD）是机体细胞抵御氧化损伤最重要的酶类之一,广泛存在于需氧生物、耐氧生物及某些厌氧微生物中。目前已知的SOD主要分为三类,即Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和Fe-SOD。其中,Cu/Zn-SOD主要存在于包括人类在内的所有真核生物的细胞浆内，是目前研究最多的一类；Mn—SOD主要存在于原核生物和真核生物的线粒体中： 展开更多
关键词 褶纹冠蚌 铜锌超氧化物歧化酶 可溶表达 活性测定 抗氧化作用
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盐胁迫下花花柴 miR398 对 Cu/Zn 超氧化物歧化酶基因的调控研究 被引量：5
7
作者 杜驰 廖茂森 +1 位作者 张霞 张富春 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期682-688,共7页
植物miRNA能够参与盐胁迫下基因表达的调控。在盐胁迫条件下盐生植物花花柴miR398（KcmiR398）呈现显著性差异表达，为了探讨rniR398的靶基因及其对靶基因的调控方式，通过生物信息学分析（http：／／plant—grn．noble．Org／psRNATar... 植物miRNA能够参与盐胁迫下基因表达的调控。在盐胁迫条件下盐生植物花花柴miR398（KcmiR398）呈现显著性差异表达，为了探讨rniR398的靶基因及其对靶基因的调控方式，通过生物信息学分析（http：／／plant—grn．noble．Org／psRNATarget／），预测KcmiR398的靶基因分别为Cu／Zn超氧化物歧化酶（SOD）基因CSDl和CSD2。利用RACE技术从花花柴中克隆到CSDl和CSD2基因全长序列，分别命名为KcCSDl和KcCSD2。qRTPCR结果表明：（1）KcmiR398在盐胁迫的花花柴茎中上调表达，在新叶中下调表达；KcCSDl在盐胁迫的老叶中上调表达，而在老茎和根中下调表达；KcCSD2在盐胁迫的老茎和根中上调表达。（2）300mmol／I，NaCl胁迫24~48h，KcmiR398与对照无显著差异；KcCSDl的表达为对照的3倍以上，而KcCSD2的表达没有显著差异。研究表明，花花柴的KcmiR398和KcCSDl、KcCSD2有组织差异性表达，盐胁迫可以影响KcmiR398和KcCSDl、KcCSD2基因的表达以适应盐胁迫产生的氧化危害。 展开更多
关键词 花花柴 盐胁迫 miR398 cu/zn超氧化物歧化酶 表达分析
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肌萎缩侧索硬化症家系铜锌超氧化物歧化酶基因突变位点的检测 被引量：2
8
作者 胡俊 史树贵 +2 位作者 李露斯 吴玉章 倪兵 《医学研究生学报》 CAS 2005年第11期963-965,i0008,共4页
目的:检测一个具有特殊临床表型的肌萎缩侧索硬化症(ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(SOD1)基因突变位点,同时比较单链构象多态性(SSCP)和变性高效液相色谱法(DHPLC)的实用价值。方法:采用SOD1基因的5对引物对部分家系成员基因组DNA进行... 目的:检测一个具有特殊临床表型的肌萎缩侧索硬化症(ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(SOD1)基因突变位点,同时比较单链构象多态性(SSCP)和变性高效液相色谱法(DHPLC)的实用价值。方法:采用SOD1基因的5对引物对部分家系成员基因组DNA进行PCR扩增,分别采用SSCP和DHPLC分析各外显子的多态性,异常样本进行DNA直接测序。结果:①两种方法均发现家系成员Ⅱ5、Ⅲ1、Ⅲ3、Ⅲ13、Ⅲ20、Ⅳ1、Ⅳ20的第2外显子和家系成员Ⅲ1、Ⅲ11、Ⅲ20第5外显子存在突变,直接测序证实第2外显子编码区和第5外显子非编码区均插入了一个碱基A。②DHPLC还发现家系成员Ⅲ1的第4外显子有杂合子色谱,直接测序证实其第4外显子存在杂合子,发生了GAA→GGA错义突变。结论:①该家系SOD1基因第2、4、5外显子均存在突变,第2外显子的突变可能是引起该家系发病的原因。②DHPLC技术与PCR-SSCP相比有更高的敏感性,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷、可靠的手段。 展开更多
关键词 肌萎缩侧索硬化症 铜锌超氧化物歧化酶 变性高效液相色谱法 单链构象多态性法
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海参铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及活性鉴定 被引量：3
9
作者 车明月 穆贤 +4 位作者 李学一 张齐 丛丽娜 牛庆昌 李成 《大连工业大学学报》 CAS 北大核心 2018年第1期5-9,共5页
采用原核宿主大肠杆菌BL21(DE3)成功表达了具有活性的仿刺参铜锌超氧化物歧化酶(Apostichopus japonicus Cu/Zn-superoxide dismutase,Aj-SOD1)蛋白。利用Trizol法从海参肠组织中提取总RNA,通过反转录PCR扩增获得Aj-SOD1基因的编码序列(... 采用原核宿主大肠杆菌BL21(DE3)成功表达了具有活性的仿刺参铜锌超氧化物歧化酶(Apostichopus japonicus Cu/Zn-superoxide dismutase,Aj-SOD1)蛋白。利用Trizol法从海参肠组织中提取总RNA,通过反转录PCR扩增获得Aj-SOD1基因的编码序列(GenBank:JX097096.1,459bp),构建克隆载体pMD18-Aj-SOD1;在目的基因两端引入(XhoⅠ/NdeⅠ)酶切位点,构建克隆载体pMD18-AjSOD1(XhoⅠ/NdeⅠ)。将此载体与表达质粒pET30a(+)分别双酶切后连接,构建重组表达载体pET30a-Aj-SOD1。转化至大肠杆菌BL21(DE3),Kan+抗性筛选阳性转化子,获得基因工程菌BL21(DE3)-pET30a-Aj-SOD1。SDS-PAGE和邻苯三酚自氧化法检测发现,经0.1 mmol/L IPTG诱导8h后,成功获得具有抗氧化活性的Aj-SOD1蛋白。 展开更多
关键词 仿刺参 铜锌超氧化物歧化酶 反转录PCR 抗氧化活性
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晶状体过敏性眼内炎的氧自由基机制 被引量：2
10
作者 皮裕琍 梁延杰 《眼科新进展》 CAS 2000年第1期15-16,共2页
目的　探讨晶状体过敏性眼内炎(PhE)的发病机制。方法　采用顺磁共振技术,检测实验性PhE大鼠眼局部组织氧自由基与超氧化物歧化酶(Cu.Zn-SOD)水平。结果　PhE发病时氧自由基显著升高,此后逐渐降低;而Cu.Zn-SOD的变化与之相反。这些变化... 目的　探讨晶状体过敏性眼内炎(PhE)的发病机制。方法　采用顺磁共振技术,检测实验性PhE大鼠眼局部组织氧自由基与超氧化物歧化酶(Cu.Zn-SOD)水平。结果　PhE发病时氧自由基显著升高,此后逐渐降低;而Cu.Zn-SOD的变化与之相反。这些变化与眼组织炎症反应及病理变化基本一致。结论　氧自由基可能是导致PhE早期炎症和病理损害的重要介质。 展开更多
关键词 晶状体过敏性 眼内炎 氧自由基 PHE
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荔枝铜锌超氧物歧化酶基因的克隆与序列分析 被引量：1
11
作者 邓九生 张大鹏 陈大明 《广西农业生物科学》 CSCD 2000年第2期73-76,共4页
以“三月红”荔枝基因组 DNA为模板 ,用 Cu· Zn SOD基因特异寡聚核苷酸为引物 ,进行 PCR扩增 ,得到特异基因片段 ,将其克隆到 p GEM T载体上 ,转化感受态大肠杆菌 TG1中 ,对转化子中重组p GEM T上的 Cu·Zn SOD基因片段的 PCR... 以“三月红”荔枝基因组 DNA为模板 ,用 Cu· Zn SOD基因特异寡聚核苷酸为引物 ,进行 PCR扩增 ,得到特异基因片段 ,将其克隆到 p GEM T载体上 ,转化感受态大肠杆菌 TG1中 ,对转化子中重组p GEM T上的 Cu·Zn SOD基因片段的 PCR扩增检测和序列分析 ,表明克隆成功 ;该基因片段有 4 78个核苷酸 ,由 4个外显子和 3个内含子组成 ;外显子由 2 3 4个核苷酸组成 ,编码 78个氨基酸 ;该基因片段编码的氨基酸序列与水稻、玉米、番茄、大白菜和松树的 Cu· Zn SOD基因编码的氨基酸序列的同源性分别为79.5%、 73 .1 %、 73 .1 %、 71 .8%和 75.7%。 展开更多
关键词 荔枝 基因克隆 序列分析 铜锌-SOD 抗逆性
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细粒棘球绦虫铜锌超氧化物歧化酶基因的表达与特征分析 被引量：3
12
作者 宋星桔 胡丹丹 +8 位作者 钟秀琴 阳爱国 郭莉 毛光琼 王凝 闫敏 汪涛 古小彬 杨光友 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期346-353,共8页
旨在探讨Eg-SOD基因的特征及其在细粒棘球绦虫上的抗氧化作用。通过原核表达得到重组Eg-SOD,对其进行酶活性测定、免疫印迹、ELISA以及免疫荧光定位分析。经原核表达出的重组Eg-SOD蛋白为可溶性蛋白,以羟胺法测定其酶学活性,可达(464.55... 旨在探讨Eg-SOD基因的特征及其在细粒棘球绦虫上的抗氧化作用。通过原核表达得到重组Eg-SOD,对其进行酶活性测定、免疫印迹、ELISA以及免疫荧光定位分析。经原核表达出的重组Eg-SOD蛋白为可溶性蛋白,以羟胺法测定其酶学活性,可达(464.55±19.99)U·mg-1。免疫印迹结果显示,该蛋白质能够被实验室人工感染细粒棘球蚴的小鼠阳性血清所识别,具有较强的反应原性;ELISA分析显示,重组Eg-SOD对人工感染细粒棘球蚴的小鼠血清和自然感染包虫病的绵羊血清检出率均为100%,而对细颈囊尾蚴的交叉反应为37.5%,提示该蛋白质可以作为潜在的诊断候选分子。免疫荧光定位显示该蛋白质广泛分布于成虫和原头蚴的组织间隙,以及少量分布于表皮。本研究对Eg-SOD的特点进行了初步的探讨,并揭示该蛋白质与虫体的抗氧化损伤有着密切的联系。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 铜锌超氧化物歧化酶 荧光定位
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斑茅铜锌超氧化物歧化酶基因(SaSOD-1)的克隆与序列分析 被引量：3
13
作者 姚艳丽 邢淑莲 +2 位作者 胡小文 徐磊 刘洋 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期2362-2368,共7页
斑茅是甘蔗近缘野生种之一,具有较强的抗逆性,研究并开发利用斑茅的强抗逆基因,对甘蔗育种具有重要意义。本研究以高粱Cu/Zn-SOD(登录号:XM 002445626.1)cDNA序列为探针,对甘蔗属EST数据库进行检索、比对、拼接,通过设计特异引物,PCR扩... 斑茅是甘蔗近缘野生种之一,具有较强的抗逆性,研究并开发利用斑茅的强抗逆基因,对甘蔗育种具有重要意义。本研究以高粱Cu/Zn-SOD(登录号:XM 002445626.1)cDNA序列为探针,对甘蔗属EST数据库进行检索、比对、拼接,通过设计特异引物,PCR扩增和序列分析验证,克隆得到2个Cu/Zn-SOD(SaSOD-1a和SaSOD-1b,登录号:KJ001795和KJ001796)基因全序列,其中SaSOD-1a基因组序列全长2 473 bp,SaSOD-1b基因组序列全长2 228 bp,均有8个外显子,7个内含子,其cDNA序列长度均为692 bp,编码206个氨基酸。序列比较分析表明,SaSOD-1a和SaSOD-1b序列相似性为98.6%,有8个单核苷酸多态性位点,蛋白质相似性为99.0%,2个氨基酸变异位点。用推导出的氨基酸序列与其它植物做同源进化分析,与高粱、玉米、谷子等比较均表现出较高的保守性。研究结果可为进一步了解超氧化物歧化酶与斑茅耐旱性的关系奠定基础。 展开更多
关键词 斑茅 铜锌超氧化物歧化酶 基因克隆 比较分析
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翘嘴鳜铜锌超氧化物歧化酶重组蛋白表达、纯化及特性分析 被引量：2
14
作者 肖俊 许亮清 +5 位作者 胡向萍 程周玉 胡宝庆 简少卿 阳钢 文春根 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2017年第2期11-17,共7页
超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶。根据翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)Cu/Zn-SOD基因序列(Gen Bank登录号:KJ558392.1)设计表达引物,扩增获得截去信号肽后的一段460 bp的序列,序列经过鉴定后,构建了... 超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶。根据翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)Cu/Zn-SOD基因序列(Gen Bank登录号:KJ558392.1)设计表达引物,扩增获得截去信号肽后的一段460 bp的序列,序列经过鉴定后,构建了重组表达质粒p ET-30a+Sc Cu/Zn-SOD,并将该质粒转入到BL21(DE3)中,用IPTG诱导进行表达。经过优化表达条件得到可溶的Sc Cu/Zn-SOD重组蛋白(rScCu/Zn-SOD),纯化重组蛋白后测定rScCu/Zn-SOD的浓度和酶活性。结果发现在20℃和37℃条件下均能够诱导Sc Cu/ZnSOD的表达。37℃时重组蛋白主要以包涵体形式存在。降低诱导温度和补充Cu^(2+)/Zn^(2+)可提高rScCu/Zn-SOD的表达量。在20℃、0.5 mmol/L IPTG条件下,添加0.5 mmol/L CuSO_4和0.1 mmol/L ZnCl_2于培养基中,重组蛋白的表达量明显升高。纯化后的重组蛋白浓度为0.14 mg/m L,酶活力为108.5 U/mg。rScCu/Zn-SOD最适温度为37℃,最适pH为7.0,可耐受5%浓度的SDS蛋白质变性剂。 展开更多
关键词 翘嘴鳜(Siniperca chuatsi) 铜锌超氧化物歧化酶 原核表达 蛋白特性
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人源SOD1及其突变体的表达纯化及酶学性质 被引量：1
15
作者 杨方瑶 简甜甜 +2 位作者 蒋立翔 张钰 黄新河 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期20-26,共7页
分析人源SOD1(hSOD1)、牦牛SOD1序列,定点突变得到hSOD1突变体Mt1SOD1(E25G、P29T、E101V、C112S)和Mt2SOD1(I18T、N20H、K31V、C112S),全合成经密码子优化的hSOD1、Mt1SOD1、Mt2SOD1、牦牛SOD1序列后,将其重组克隆到表达载体pET-28a(+)... 分析人源SOD1(hSOD1)、牦牛SOD1序列,定点突变得到hSOD1突变体Mt1SOD1(E25G、P29T、E101V、C112S)和Mt2SOD1(I18T、N20H、K31V、C112S),全合成经密码子优化的hSOD1、Mt1SOD1、Mt2SOD1、牦牛SOD1序列后,将其重组克隆到表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得重组菌。重组菌经1 mmol/L IPTG诱导,在含800μmol/L Cu^(2+)和20μmol/L Zn^(2+)的LB培养基中,25℃、180 r/min诱导培养16 h,4种SOD1均以可溶性形式高效表达,镍亲和层析可有效纯化重组SOD1。100 mL LB摇瓶培养获得的hSOD1活性为71094 U/mg,产率为4.57 mg。Mt1SOD1活性为128506 U/mg,产率为3.13 mg。Mt2SOD1活性为58700.1 U/mg,产率为5.47 mg。牦牛SOD1活性为42969.5 U/mg,产率为6.81 mg。对hSOD1、Mt1SOD1的酶学性质研究表明,在25℃~55℃,酶活力基本保持不变,75℃保温30 min,hSOD1相对酶活力保持在50%左右,Mt1SOD1保持30%酶活性。在pH 3.6~10.4条件下放置30 min,两种SOD1均能保持70%以上的酶活力。研究通过定点突变获得高活性高稳定性的hSOD1和Mt1SOD1,为SOD1在医疗、保健、化妆品等领域的应用奠定基础。 展开更多
关键词 铜锌超氧化物歧化酶 大肠杆菌 定点突变 重组表达与纯化 活性
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水生动物铜锌超氧化物歧化酶及其对致病微生物的响应 被引量：1
16
作者 乔丹 刘丹丹 +2 位作者 王美娟 张红绪 孔祥会 《水产科学》 CAS 北大核心 2014年第6期398-402,共5页
超氧化物歧化酶为天然金属酶，广泛存在于动植物及微生物中，是抵御机体氧化应激的第一道防线。超氧化物歧化酶与过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶类和小分子抗氧化物质，一起构成机体抗氧化系统，用于清除机体氧化还原反应产... 超氧化物歧化酶为天然金属酶，广泛存在于动植物及微生物中，是抵御机体氧化应激的第一道防线。超氧化物歧化酶与过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶类和小分子抗氧化物质，一起构成机体抗氧化系统，用于清除机体氧化还原反应产生的大量活性氧自由基，如超氧阴离子自由基、羟自由基、过氧化氢等，以维持细胞结构和遗传物质的完整性。根据金属辅助因子的不同，超氧化物歧化酶通常分为铜锌超氧化物歧化酶、锰超氧化物歧化酶、镍超氧化物歧化酶和铁超氧化物歧化酶四种类型。其中铜锌超氧化物歧化酶主要存在于真核生物的细胞质和细胞间质，能在机体中广泛消除细胞产生的活性氧自由基，维持内环境稳定，参与机体天然免疫，发挥重要生理功能和治疗作用。研究显示，铜锌超氧化物歧化酶与肿瘤发生及多种疾病密切相关，在陆生动物及植物中研究较为深入，在医学、食品等领域有了一定应用。水生生物铜锌超氧化物歧化酶研究尚浅，目前主要集中在铜锌超氧化物歧化酶基因的测序及对外界环境的响应，而在应用上鲜有报道。 展开更多
关键词 铜锌超氧化物歧化酶 天然免疫 致病微生物
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金属硫蛋白和超氧化物歧化酶在颊鳞状细胞癌组织中的表达 被引量：1
17
作者 陈仕生 姚小武 杨利和 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2006年第2期129-131,共3页
背景与目的探讨金属硫蛋白(Metallothionein,MT)及铜/锌超氧歧化酶(Cu/Zn Superoxide dismutase,Cu/Zn-SOD)在颊粘膜鳞状细胞癌的表达及其意义。材料与方法对8例颊癌MT和Cu/Zn-SOD采用免疫组化的方法,观察两者在颊癌中表达的定位,并对MT... 背景与目的探讨金属硫蛋白(Metallothionein,MT)及铜/锌超氧歧化酶(Cu/Zn Superoxide dismutase,Cu/Zn-SOD)在颊粘膜鳞状细胞癌的表达及其意义。材料与方法对8例颊癌MT和Cu/Zn-SOD采用免疫组化的方法,观察两者在颊癌中表达的定位,并对MT和CuZn-SOD表达进行定量分析。结果在高分化鳞癌,MT和CuZn-SOD主要表达在癌巢周边,癌巢中心及间质组织表达较少或不表达,在低分化鳞癌则散在分布。在8例颊癌标本中,MT和Cu/Zn-SOD表达差异无统计学意义(P=0.554)。结论MT和Cu/Zn-SOD主要表达在分化较差、生长活跃的癌细胞,两者相类似的表达对肿瘤的发生发展和预后关系值得进一步探讨。 展开更多
关键词 颊鳞状细胞癌 金属硫蛋白 铜/锌超氧歧化酶
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应用亲合层析结合液相色谱串联质谱法发现结核分枝杆菌H37Rv的新的糖蛋白 被引量：1
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作者 刘振桐 姜妙娜 贾玉杰 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2007年第4期326-329,共4页
目的:应用刀豆素A(ConA)亲合层析结合液相色谱串联质谱法(HPLC-MS)发现结核分枝杆菌H37Rv的新的糖蛋白。方法:收集生长2周的结核菌培养液,经过滤浓缩得到培养滤液蛋白(culture filtrate protein,CFP)。应用ConA亲合层析法纯化CFP中的糖... 目的:应用刀豆素A(ConA)亲合层析结合液相色谱串联质谱法(HPLC-MS)发现结核分枝杆菌H37Rv的新的糖蛋白。方法:收集生长2周的结核菌培养液,经过滤浓缩得到培养滤液蛋白(culture filtrate protein,CFP)。应用ConA亲合层析法纯化CFP中的糖蛋白,经SDS-PAGE电泳结合考马斯亮蓝染色后,对蛋白条带进行胰蛋白酶消化。应用HPLC-MS检测消化后的糖肽结构并与结核菌H37Rv蛋白质数据库进行比对,寻找新的糖蛋白。结果:CFP经ConA亲合层析纯化后的电泳结果显示有数条蛋白条带出现,经筛选相对分子质量26×103蛋白最可能为糖蛋白。酶切消化该蛋白得到的多肽在HPLC-MS上保留时间26.24min处显示有多肽色谱峰,其对应的一级MS图提示该多肽总质量为1467原子质量单位(AMU),二级MS图显示为多个质荷比(m/z)逐级减少为54(一个己糖的分子质量单位为162AMU)的多肽,提示有己糖丢失。同时,MS分析肽链氨基酸序列并证实蛋白的糖基化存在。与结核菌H37Rv蛋白质数据库比对结果提示,结核菌分泌的26×103蛋白为一新的糖蛋白,即铜-锌超氧化物歧化酶。结论:应用ConA亲合层析结合HPLC-MS发现了一个新的结核分枝杆菌糖蛋白。 展开更多
关键词 液相色谱串联质谱 结核分枝杆菌 刀豆素A亲和层析 铜-锌超氧化物歧化酶
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Cu/Zn SOD蛋白在布鲁菌S19疫苗株中的过表达及鉴定 被引量：1
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作者 邓雨明 段开放 +2 位作者 侯欢欢 张燕 彭其胜 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期711-715,共5页
以Cu/Zn SOD为目的基因,通过基因工程技术分别构建了组成型过表达系统pBBR-trc-sod和诱导型过表达系统pBBR-lacPtrc-sod,在布鲁菌S19疫苗株中进行了Cu/Zn SOD的过表达。同时,以大肠杆菌为宿主表达纯化的重组Cu/Zn SOD蛋白免疫家兔制备... 以Cu/Zn SOD为目的基因,通过基因工程技术分别构建了组成型过表达系统pBBR-trc-sod和诱导型过表达系统pBBR-lacPtrc-sod,在布鲁菌S19疫苗株中进行了Cu/Zn SOD的过表达。同时,以大肠杆菌为宿主表达纯化的重组Cu/Zn SOD蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,对2种过表达系统中Cu/Zn SOD蛋白的表达量进行分析。结果显示,诱导型Cu/Zn SOD过表达系统的表达量更高,且能与所制备的多抗发生特异性反应。结果表明,构建的过表达系统能够实现Cu/Zn SOD蛋白在布鲁菌S19疫苗株中过表达;同时,该试验也提示我们这种表达系统可应用于布鲁菌S19疫苗的抗原改造。 展开更多
关键词 布鲁菌 S19疫苗株 铜锌超氧化物歧化酶
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变性高效液相色谱法在FALS突变位点检测中的应用 被引量：1
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作者 胡俊 史树贵 +2 位作者 李露斯 吴玉章 倪兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第13期1374-1376,共3页
目的检测一个肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,SOD1)基因的突变位点,同时观察变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography,DHP... 目的检测一个肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,SOD1)基因的突变位点,同时观察变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)的实用价值。方法对PCR-SSCP检测阴性的外显子,应用DHPLC法及DNA直接测序技术,再次进行SOD1基因的突变位点检测。结果经DHPLC检测,家系成员Ⅲ1SOD1基因的第4外显子有突变峰,DNA直接测序证实存在杂合子,发生了GAA→GGA错义突变,使编码的氨基酸由谷氨酸变为甘氨酸。结论DHPLC技术与PCR-SSCP相比有更高的敏感性,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段。 展开更多
关键词 家族性肌萎缩侧索硬化症 铜、锌超氧化物歧化酶 变性高效液相色谱法 突变
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