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草鱼细胞系CIK酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用
1
作者
闫秀英
谢吉国
+4 位作者
李杰
丁燏
吴灶和
鲁义善
简纪常
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第6期128-133,共6页
旨在探索草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞蛋白质间的相互作用,运用SMART技术构建了草鱼肾组织细胞系CIK(Ctenopharyngodon idellus kidney)的酵母双杂交cDNA文库。提取CIK细胞总RNA后,分离纯化mRNA,然后以mRNA为模板,反转录合成cDNA第一链,再...
旨在探索草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞蛋白质间的相互作用,运用SMART技术构建了草鱼肾组织细胞系CIK(Ctenopharyngodon idellus kidney)的酵母双杂交cDNA文库。提取CIK细胞总RNA后,分离纯化mRNA,然后以mRNA为模板,反转录合成cDNA第一链,再在DNA聚合酶作用下,通过长距离PCR,扩增双链cDNA。利用SMART技术,通过同源重组的方法,在酵母株Y187中构建了草鱼CIK细胞全长cDNA文库。经检测,未扩增文库的转化率为1.6×105,文库容量为2.4×106,插入的双链cDNA片段的长度为250-2 000 bp,文库滴度为7×107 CFU/mL,重组率为98%,此文库具有良好的cDNA片段多态性和完整性。利用构建的CIK酵母双杂交文库,以草鱼呼肠孤病毒的VP7和VP5蛋白作为诱饵进行筛选试验,得到VP7相互作用蛋白的阳性菌落,未得到VP5相互作用蛋白的阳性菌落。草鱼CIK细胞酵母双杂交cDNA文库的构建为研究草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞间的互作机制提供了重要研究工具。
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关键词
草鱼肾组织细胞系
酵母双杂交
CDNA文库
蛋白质互作
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职称材料
草鱼肾细胞电转条件的优化及草鱼呼肠孤病毒NS26蛋白的瞬时表达
被引量：
2
2
作者
李炎
张娅楠
吕利群
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期278-284,共7页
本研究先以pEGFP-N1载体质粒中的绿色荧光蛋白基因为报道基因进行电转实验,优化电压、脉冲时间、质粒添加量和电击次数等电转条件,确立最佳条件。实验表明,细胞密度为1.5×107/mL时,取200μl在0.2cm电击杯中进行电击转染,电压为200V...
本研究先以pEGFP-N1载体质粒中的绿色荧光蛋白基因为报道基因进行电转实验,优化电压、脉冲时间、质粒添加量和电击次数等电转条件,确立最佳条件。实验表明,细胞密度为1.5×107/mL时,取200μl在0.2cm电击杯中进行电击转染,电压为200V,脉冲时间为45ms,添加质粒30μg,电击1次时,转染效果最佳。提取草鱼呼肠孤病毒基因组总RNA,以其逆转录的cDNA作为扩增模板,设计特异引物扩增出GCRV非结构蛋白NS26的基因片段,重组到pEGFP-N1载体上得到重组质粒pEGFP-NS26,将其导入CIK细胞中用电转法高效表达了EGFPNS26融合蛋白。本研究为进一步研究NS26的功能奠定了基础。
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关键词
电转染
草鱼呼肠孤病毒
草鱼肾细胞
重组质粒
原文传递
绿色荧光蛋白在草鱼肾细胞中的表达
3
作者
郝贵杰
潘晓艺
+5 位作者
袁雪梅
姚嘉赟
徐洋
蔺凌云
尹文林
沈锦玉
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2013年第5期23-26,共4页
应用阳离子脂质体介导法,将含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-N1转染到培养成单层的草鱼肾细胞(CIK)中,通过荧光倒置显微镜和特异性RT-PCR方法检测GFP的表达。在荧光倒置显微镜下可见CIK细胞的胞质和胞核均呈现绿色荧光,且细胞核的...
应用阳离子脂质体介导法,将含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-N1转染到培养成单层的草鱼肾细胞(CIK)中,通过荧光倒置显微镜和特异性RT-PCR方法检测GFP的表达。在荧光倒置显微镜下可见CIK细胞的胞质和胞核均呈现绿色荧光,且细胞核的绿色荧光强度强于细胞质。转染细胞中的转录产物经RT-PCR扩增后,凝胶电泳鉴定出与GFP基因片段分子量大小一致的条带,经测序证明其为GFP基因序列。结果表明,GFP基因可以在草鱼CIK细胞内高效率成功表达,为构建以GFP为报告基因的真核重组质粒及研究草鱼出血病DNA疫苗奠定了重要的基础。
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关键词
绿色荧光蛋白
草鱼肾细胞
转染
草鱼出血病
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职称材料
草鱼呼肠孤病毒在CIK细胞中复制及形态发生的研究
被引量：
19
4
作者
邹桂平
方勤
《中国病毒学》
CSCD
2000年第2期188-192,共5页
以草鱼呼肠孤病毒 (GCRV)感染的草鱼肾细胞系 (CIK)为模型 ,进行了草鱼呼肠孤病毒在细胞内的形态发生的研究。当病毒以感染复数为 5～ 10PFU/CELL感染CIK细胞时 ,在病毒感染细胞 4h以内的切片中 ,可观察到脱去部分外层衣壳的不完整病毒...
以草鱼呼肠孤病毒 (GCRV)感染的草鱼肾细胞系 (CIK)为模型 ,进行了草鱼呼肠孤病毒在细胞内的形态发生的研究。当病毒以感染复数为 5～ 10PFU/CELL感染CIK细胞时 ,在病毒感染细胞 4h以内的切片中 ,可观察到脱去部分外层衣壳的不完整病毒颗粒。感染细胞 8h ,可观察到浆胞内病毒发生基质 ,其内含有大量的直径约 5 0nm的亚病毒颗粒 ,无外层蛋白结构。感染 12～ 16h后 ,这些亚病毒颗粒装配上外层蛋白结构 ,形成直径为 72nm左右的成熟的病毒粒子。病毒感染细胞 8h后 ,开始出现典型的病毒包含体 ,16～ 2 0h小时病毒包含体裂解 ,继而释放出有感染性的子代病毒颗粒。
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关键词
GCRV
cik
致病机理
鱼类病毒
形态发生
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职称材料
题名
草鱼细胞系CIK酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用
1
作者
闫秀英
谢吉国
李杰
丁燏
吴灶和
鲁义善
简纪常
机构
广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室
仲恺农业工程学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第6期128-133,共6页
基金
国家“973”计划项目(2009CB118704)
文摘
旨在探索草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞蛋白质间的相互作用,运用SMART技术构建了草鱼肾组织细胞系CIK(Ctenopharyngodon idellus kidney)的酵母双杂交cDNA文库。提取CIK细胞总RNA后,分离纯化mRNA,然后以mRNA为模板,反转录合成cDNA第一链,再在DNA聚合酶作用下,通过长距离PCR,扩增双链cDNA。利用SMART技术,通过同源重组的方法,在酵母株Y187中构建了草鱼CIK细胞全长cDNA文库。经检测,未扩增文库的转化率为1.6×105,文库容量为2.4×106,插入的双链cDNA片段的长度为250-2 000 bp,文库滴度为7×107 CFU/mL,重组率为98%,此文库具有良好的cDNA片段多态性和完整性。利用构建的CIK酵母双杂交文库,以草鱼呼肠孤病毒的VP7和VP5蛋白作为诱饵进行筛选试验,得到VP7相互作用蛋白的阳性菌落,未得到VP5相互作用蛋白的阳性菌落。草鱼CIK细胞酵母双杂交cDNA文库的构建为研究草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞间的互作机制提供了重要研究工具。
关键词
草鱼肾组织细胞系
酵母双杂交
CDNA文库
蛋白质互作
Keywords
ctenopharyngodon
idellus
kidney
（
cik
）
Yeast
two-hybrid
cDNA
library
Protein
interaction
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
草鱼肾细胞电转条件的优化及草鱼呼肠孤病毒NS26蛋白的瞬时表达
被引量：
2
2
作者
李炎
张娅楠
吕利群
机构
上海海洋大学农业部淡水种质资源重点实验室
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期278-284,共7页
基金
国家自然科学基金(No.31372561)
现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-46-12)
上海海洋大学水产学一流学科
文摘
本研究先以pEGFP-N1载体质粒中的绿色荧光蛋白基因为报道基因进行电转实验,优化电压、脉冲时间、质粒添加量和电击次数等电转条件,确立最佳条件。实验表明,细胞密度为1.5×107/mL时,取200μl在0.2cm电击杯中进行电击转染,电压为200V,脉冲时间为45ms,添加质粒30μg,电击1次时,转染效果最佳。提取草鱼呼肠孤病毒基因组总RNA,以其逆转录的cDNA作为扩增模板,设计特异引物扩增出GCRV非结构蛋白NS26的基因片段,重组到pEGFP-N1载体上得到重组质粒pEGFP-NS26,将其导入CIK细胞中用电转法高效表达了EGFPNS26融合蛋白。本研究为进一步研究NS26的功能奠定了基础。
关键词
电转染
草鱼呼肠孤病毒
草鱼肾细胞
重组质粒
Keywords
Electroporation
Grass
carp
reovirus
（GCRV）
ctenopharyngodon
idellus
kidney
（
cik
）
cell
Recombinant
plasmid
分类号
S943 [农业科学—水产养殖]
原文传递
题名
绿色荧光蛋白在草鱼肾细胞中的表达
3
作者
郝贵杰
潘晓艺
袁雪梅
姚嘉赟
徐洋
蔺凌云
尹文林
沈锦玉
机构
浙江省淡水水产研究所
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2013年第5期23-26,共4页
基金
浙江省科技厅重大科技专项重点农业项目(2012C12009-4)
浙江省公益技术研究农业项目(2012C22046)
+2 种基金
湖州市科技攻关计划项目(2011GG11)
宁波大学中央财政支持地方高校发展专项学科项目(xkc11010)
湖州市自然科学基金项目(2012YZ03)
文摘
应用阳离子脂质体介导法,将含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-N1转染到培养成单层的草鱼肾细胞(CIK)中,通过荧光倒置显微镜和特异性RT-PCR方法检测GFP的表达。在荧光倒置显微镜下可见CIK细胞的胞质和胞核均呈现绿色荧光,且细胞核的绿色荧光强度强于细胞质。转染细胞中的转录产物经RT-PCR扩增后,凝胶电泳鉴定出与GFP基因片段分子量大小一致的条带,经测序证明其为GFP基因序列。结果表明,GFP基因可以在草鱼CIK细胞内高效率成功表达,为构建以GFP为报告基因的真核重组质粒及研究草鱼出血病DNA疫苗奠定了重要的基础。
关键词
绿色荧光蛋白
草鱼肾细胞
转染
草鱼出血病
Keywords
green
fluorescent
protein
ctenopharyngodon
idellus
kidney
cell（
cik
）
transfection
hemorrhage
disease
of
grass
carp
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
下载PDF
职称材料
题名
草鱼呼肠孤病毒在CIK细胞中复制及形态发生的研究
被引量：
19
4
作者
邹桂平
方勤
机构
中国科学院武汉病毒研究所
出处
《中国病毒学》
CSCD
2000年第2期188-192,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目! (39570 0 35)
文摘
以草鱼呼肠孤病毒 (GCRV)感染的草鱼肾细胞系 (CIK)为模型 ,进行了草鱼呼肠孤病毒在细胞内的形态发生的研究。当病毒以感染复数为 5～ 10PFU/CELL感染CIK细胞时 ,在病毒感染细胞 4h以内的切片中 ,可观察到脱去部分外层衣壳的不完整病毒颗粒。感染细胞 8h ,可观察到浆胞内病毒发生基质 ,其内含有大量的直径约 5 0nm的亚病毒颗粒 ,无外层蛋白结构。感染 12～ 16h后 ,这些亚病毒颗粒装配上外层蛋白结构 ,形成直径为 72nm左右的成熟的病毒粒子。病毒感染细胞 8h后 ,开始出现典型的病毒包含体 ,16～ 2 0h小时病毒包含体裂解 ,继而释放出有感染性的子代病毒颗粒。
关键词
GCRV
cik
致病机理
鱼类病毒
形态发生
Keywords
Grass
carp
reovirus
(GCRV)
ctenopharyngodon
idellus
kidney
cell
(
cik
cell)
Morphogenesis
分类号
Q943.112 [生物学—植物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
草鱼细胞系CIK酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用
闫秀英
谢吉国
李杰
丁燏
吴灶和
鲁义善
简纪常
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
下载PDF
职称材料
2
草鱼肾细胞电转条件的优化及草鱼呼肠孤病毒NS26蛋白的瞬时表达
李炎
张娅楠
吕利群
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
原文传递
3
绿色荧光蛋白在草鱼肾细胞中的表达
郝贵杰
潘晓艺
袁雪梅
姚嘉赟
徐洋
蔺凌云
尹文林
沈锦玉
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2013
0
下载PDF
职称材料
4
草鱼呼肠孤病毒在CIK细胞中复制及形态发生的研究
邹桂平
方勤
《中国病毒学》
CSCD
2000
19
下载PDF
职称材料
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