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聚合酶链反应检测粪便中微小隐孢子虫 被引量：35
1
作者 马良 陈雅棠 刘约翰 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期111-114,共4页
目的：利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）原理建立一种敏感且特异的方法检测人和动物粪便标本中的微小隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ，Ｃ．ｐ．）。方法：从含有Ｃ．ｐ．卵囊的人和豚鼠粪便标本中直接提取ＤＮＡ用作... 目的：利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）原理建立一种敏感且特异的方法检测人和动物粪便标本中的微小隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ，Ｃ．ｐ．）。方法：从含有Ｃ．ｐ．卵囊的人和豚鼠粪便标本中直接提取ＤＮＡ用作ＰＣＲ的模板。用一对人工合成的寡核苷酸序列作为ＰＣＲ引物，扩增长为４５２ｂｐ的Ｃ．ｐ．目的ＤＮＡ片段。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色检测。结果：从感染Ｃ．ｐ．的人和豚鼠粪便标本ＤＮＡ抽提物中均扩增出目的片段，而从其他几种寄生虫、肠道微生物或宿主ＤＮＡ中均不能扩增出目的片段。本方法的敏感性比目前常用的检测方法高约１００倍。结论：ＰＣＲ技术检测人和动物粪便中的Ｃ．ｐ．，具有敏感性高且特异性强的特点，有希望成为隐孢子虫病诊断和流行病学调查的有力手段。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 聚合酶链反应 粪便 检测
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人、畜隐孢子虫病在云南的发现及其实验感染研究 被引量：24
2
作者 左仰贤 陈福强 方立 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1990年第3期34-36,共3页
1988年3～8月检查昆明市医院门诊腹泻病人73人、腹泻犊牛22头和幼猫4只,在9人(12.3％)、6头犊牛(27.3％)和1只幼猫(25.0％)的粪中查到隐孢子虫卵囊。以犊牛粪中的隐孢子虫卵囊实验感染1只猕猴和2只雏鸡,7日后猴粪中首次排出该虫卵囊,剖... 1988年3～8月检查昆明市医院门诊腹泻病人73人、腹泻犊牛22头和幼猫4只,在9人(12.3％)、6头犊牛(27.3％)和1只幼猫(25.0％)的粪中查到隐孢子虫卵囊。以犊牛粪中的隐孢子虫卵囊实验感染1只猕猴和2只雏鸡,7日后猴粪中首次排出该虫卵囊,剖检查到其内生期虫体。雏鸡不被感染。鉴定出2个虫种,上述人、犊牛、猫和实验猴粪中的卵囊为小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum),另在1头犊牛粪中检到较大型的卵囊,鉴定为鼠隐孢子虫(C·muris)。本文还对隐孢子虫的分类、宿主特异性及卵囊形态等问题进行了讨论。 展开更多
关键词 隐孢子虫病 感染 人体 犊牛
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隐孢子虫感染小鼠动物模型的建立 被引量：21
3
作者 朱民 张述义 +2 位作者 何艳燕 潘彩娥 魏梅雄 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2003年第1期13-15,共3页
目的　建立免疫抑制小鼠的隐孢子虫感染模型。　方法　饮水中加地塞米松 ( DEX)抑制 4周龄小鼠免疫功能 ,人工灌喂隐孢子虫卵囊 ( CSO)感染小鼠。通过观察小鼠粪便中 CSO排出情况和小鼠生存情况 ,比较 5个品系小鼠( BAL B/c、C5 7、ICR... 目的　建立免疫抑制小鼠的隐孢子虫感染模型。　方法　饮水中加地塞米松 ( DEX)抑制 4周龄小鼠免疫功能 ,人工灌喂隐孢子虫卵囊 ( CSO)感染小鼠。通过观察小鼠粪便中 CSO排出情况和小鼠生存情况 ,比较 5个品系小鼠( BAL B/c、C5 7、ICR、NIH、KM)的易感性 ,比较不同 DEX剂量 ( 1mg/L、2 .5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L)对小鼠免疫功能的影响 ,比较不同 CSO接种剂量 ( 10 5、10 6 )对小鼠感染的影响 ,从而确定适宜的模型小鼠、DEX剂量和 CSO接种剂量 ,建立小鼠感染模型。　结果　 ( 1) 5个品系小鼠中 KM鼠的 CSO排出量最多 ,而且持续整个实验期 ,小鼠死亡数较少 ( NIH鼠全部死亡 ) ;( 2 ) 10 mg/L、5 mg/L DEX组小鼠 CSO排出量较多 ,2 .5 mg/L、1mg/L 组小鼠死亡数少 ,但卵囊排出量明显低于前两组 ,且不能持续整个实验期 ;( 3) 10 5与 10 6个 CSO接种量的小鼠 CSO排出量没有明显差别 ,但前者的小鼠死亡数较少。　结论　 KM鼠饮水中加 DEX5 mg/L,每只小鼠接种 10 5个 CSO,可以建立稳定的感染模型。 展开更多
关键词 隐孢子虫 小鼠 动物模型
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聚合酶链反应技术在隐孢子虫检测中的应用研究 被引量：15
4
作者 郭步平 连德润 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第2期33-35,共3页
根据Laxer等克隆的微小隐孢子虫（C．parvum）核酸序列片断（pHCl）设计并合成一对长度为20hp的寡核苷酸引物。应用聚合酶链反应，对隐孢子虫核酸进行扩增，结果扩增出452hP的特异性条带，阴性对照无扩增。结果表明所合成引物有高度特... 根据Laxer等克隆的微小隐孢子虫（C．parvum）核酸序列片断（pHCl）设计并合成一对长度为20hp的寡核苷酸引物。应用聚合酶链反应，对隐孢子虫核酸进行扩增，结果扩增出452hP的特异性条带，阴性对照无扩增。结果表明所合成引物有高度特异性。用PCR检测隐抱子虫感染动物模型，36份镜检卵囊阳性小鼠粪便均为阳性，18份镜检阴性小鼠粪便17份阴性，一份阳性。 展开更多
关键词 隐孢子虫 聚合酶链反应 检测
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安徽省猪隐孢子虫病流行病学调查 被引量：13
5
作者 赵长城 李培英 +2 位作者 武林 陈灵芝 余为一 《畜牧与兽医》 北大核心 2005年第10期18-20,共3页
为了查明安徽省猪隐孢子虫感染与地理分布情况,选取该省10个县、市进行了猪隐孢子虫感染情况的调研。结果在58头猪的粪样中查到了隐孢子虫卵囊,其感染率为10.05%(58/577)。经鉴定,所获虫体为小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)。该省... 为了查明安徽省猪隐孢子虫感染与地理分布情况,选取该省10个县、市进行了猪隐孢子虫感染情况的调研。结果在58头猪的粪样中查到了隐孢子虫卵囊,其感染率为10.05%(58/577)。经鉴定,所获虫体为小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)。该省猪的隐孢子虫感染存在年龄和地区性差异,但与性别无关。 展开更多
关键词 小隐孢子虫 隐孢子虫病 流行病学 猪 安徽
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微小隐孢子虫卵囊DNA提取及用于PCR检测 被引量：12
6
作者 沈玉娟 曹建平 +6 位作者 卢潍媛 李小红 刘海鹏 徐馀信 周晓农 汤林华 刘述先 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期228-230,共3页
目的采用3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并用于PCR检测以进行比较。方法微小隐孢子虫卵囊经多次冻融加热破壁后,采用螯合树脂(Chelex-100)、酚/氯仿和基因组DNA纯化系统试剂盒3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并根据微小隐孢子虫基因... 目的采用3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并用于PCR检测以进行比较。方法微小隐孢子虫卵囊经多次冻融加热破壁后,采用螯合树脂(Chelex-100)、酚/氯仿和基因组DNA纯化系统试剂盒3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并根据微小隐孢子虫基因序列(L16996)设计一对寡核苷酸引物,分别对3种方法制备模板进行PCR扩增分析。Chelex-100提取的DNA也用于观察PCR检测的敏感性。结果3种方法制备的微小隐孢子虫卵囊模板用于PCR检测均获得1条446 bp条带,Chelex-100提取的DNA用于PCR检测的敏感性至少达0.5个卵囊。结论3种方法提取的微小隐孢子虫卵囊DNA均可用于PCR检测,Chelex-100法是一种高效而快速的微量提取DNA方法,适用于对隐孢子虫DNA的检测。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 卵囊 脱氧核精核酸 分离和提纯 螯合树脂法 聚合酶链反应
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应用间接ELISA检测微小隐孢子虫抗体的研究 被引量：11
7
作者 何宏轩 张西臣 +3 位作者 尹继刚 李建华 杨举 段明星 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第6期23-26,共4页
以在大肠埃希氏菌中表达的微小隐孢子虫 (Cryptosporidum parvum )子孢子表面抗原CP15为抗原 ,以辣根过氧化物酶 (HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗 ,建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA。试验筛选出的最佳反应条件为 :大肠埃希氏菌CP1... 以在大肠埃希氏菌中表达的微小隐孢子虫 (Cryptosporidum parvum )子孢子表面抗原CP15为抗原 ,以辣根过氧化物酶 (HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗 ,建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA。试验筛选出的最佳反应条件为 :大肠埃希氏菌CP15抗原包被量为 1μg/孔 ,用10 0mL/L的兔血清进行封闭 ,以正常大肠埃希氏菌裂解上清液稀释待检血清。试验结果表明 ,应用CP15重组蛋白作为诊断微小隐孢子虫抗体的抗原具有特异性高。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 抗体检测 间接ELISA 重组蛋白 隐孢子虫病 人畜共患病 CPl5蛋白
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奶牛源微小隐孢子虫的分子鉴定及动物感染试验 被引量：13
8
作者 齐萌 黄建营 +3 位作者 王臣荣 余复昌 李俊强 张龙现 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期85-89,共5页
采用饱和蔗糖溶液漂浮法检查商丘市某奶牛场牛新鲜粪便样本的隐孢子虫卵囊,用18SrRNA基因对隐孢子虫进行PCR扩增和限制性片段长度多态性分析;基于GP60基因位点对微小隐孢子虫进行基因亚型鉴定。结果显示:103份样本中有50份为隐孢子虫阳... 采用饱和蔗糖溶液漂浮法检查商丘市某奶牛场牛新鲜粪便样本的隐孢子虫卵囊,用18SrRNA基因对隐孢子虫进行PCR扩增和限制性片段长度多态性分析;基于GP60基因位点对微小隐孢子虫进行基因亚型鉴定。结果显示:103份样本中有50份为隐孢子虫阳性,42份经形态学鉴定为安氏隐孢子虫,8份形态学未能鉴定到种。经限制性片段长度多态性分析,7个分离株为微小隐孢子虫,1个分离株为牛隐孢子虫;序列比对分析,7个微小隐孢子虫均为人兽共患基因亚型IIdA19G1。接种1头3日龄犊牛1×106个卵囊,潜隐期为3d,显露期为14d,于感染后第7天和第10天出现2个排卵囊高峰期,收集到大量纯卵囊。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 鉴定 感染 奶牛
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5种分离纯化粪便中隐孢子虫卵囊方法的比较 被引量：9
9
作者 朱民 何艳燕 《上海预防医学》 CAS 2006年第4期166-168,共3页
[目的]比较5种分离纯化粪便中隐孢子虫卵囊的方法。[方法]分别用饱和氯化钠漂浮法、Sheather's蔗糖漂浮法、甲醛-乙醚沉淀法、不连续蔗糖密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法对感染小鼠粪样中的隐孢子虫卵囊进行分离纯化,浓集回... [目的]比较5种分离纯化粪便中隐孢子虫卵囊的方法。[方法]分别用饱和氯化钠漂浮法、Sheather's蔗糖漂浮法、甲醛-乙醚沉淀法、不连续蔗糖密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法对感染小鼠粪样中的隐孢子虫卵囊进行分离纯化,浓集回收的卵囊利用鼠抗隐孢子虫卵囊壁单克隆抗体间接免疫荧光法检测卵囊数,作定量比较,同时定性比较回收卵囊液的纯度。[结果]Percoll密度梯度回收的卵囊数量最多,而且杂质少;不连续蔗糖密度梯度离心法和Sheather's蔗糖漂浮法次之,但前者回收的卵囊液中杂质较少;饱和氯化钠漂浮法获得的卵囊液中杂质也较少,但卵囊数次之;甲醛-乙醚沉淀法获得的卵囊液中检出的数量最少,且杂质最多。[结论]不连续蔗糖密度梯度离心法是一种经济、有效的卵囊分离纯化方法。 展开更多
关键词 隐孢子虫 卵囊 分离
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聚合酶链反应结合非放射性标记探针检测粪便中微小隐孢子虫 被引量：11
10
作者 陈雅棠 马良 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期246-250,共5页
目的：利用非放射性标记探针技术检测经聚合酶链反应扩增后的人粪便中微小隐孢子虫ＤＮＡ，观察该方法的特异性和敏感性。方法：用裂解法从粪便标本直接制备微小隐孢子虫模板ＤＮＡ，用一对人工合成的寡核苷酸作ＰＣＲ引物，扩增长度为... 目的：利用非放射性标记探针技术检测经聚合酶链反应扩增后的人粪便中微小隐孢子虫ＤＮＡ，观察该方法的特异性和敏感性。方法：用裂解法从粪便标本直接制备微小隐孢子虫模板ＤＮＡ，用一对人工合成的寡核苷酸作ＰＣＲ引物，扩增长度为４５２ｂｐ的微小隐孢子虫目的ＤＮＡ片段。将扩增产物直接点在或经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法转移到硝酸纤维素膜上，再和生物素标记的寡核苷酸探针杂交，经底物（ＢＣＩＰ）呈色观察。结果：阳性杂交信号只见于微小隐孢子虫ＤＮＡ扩增产物，而约氏疟原虫、杜氏利什曼原虫、贾第虫、白色念珠菌、大肠杆菌和人白细胞ＤＮＡ均无杂交信号。ＰＣＲ结合斑点杂交或Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法检测隐孢子虫ＤＮＡ的敏感性均为０．１ｐｇ。结论：非放射性探针检测人粪便隐孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增产物，具有敏感性高、特异性强、操作较简便及无放射性污染等优点。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 聚合麦链反应 探针
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微小隐孢子虫CP15/60-DNA滴鼻免疫小鼠诱导的粘膜与系统免疫反应 被引量：6
11
作者 何宏轩 张西臣 +2 位作者 尹继刚 李建华 杨举 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期112-116,共5页
为了观察微小隐孢子虫表面蛋白基因的重组质粒 pc DNA3- 15 /6 0诱导机体产生的免疫应答情况 ,用重组质粒经鼻粘膜接种 BAL B/c小鼠 ,采用淋巴细胞转化实验、流式细胞仪、EL ISA和免疫组化染色法检测了其诱导的系统和粘膜免疫反应 ,并... 为了观察微小隐孢子虫表面蛋白基因的重组质粒 pc DNA3- 15 /6 0诱导机体产生的免疫应答情况 ,用重组质粒经鼻粘膜接种 BAL B/c小鼠 ,采用淋巴细胞转化实验、流式细胞仪、EL ISA和免疫组化染色法检测了其诱导的系统和粘膜免疫反应 ,并在免疫后经口接种微小隐孢子虫卵囊。结果为免疫小鼠淋巴细胞增殖反应二免后 SI均大于 2 (P<0 .0 1) ;免疫后 ,CD+ 4 T细胞增加了 (32 .4 2± 2 .19) % (P>0 .5 ) ,CD+ 8T细胞增加了(2 6 .73± 3.33) % (P<0 .5 ) ;小肠粘膜 Ig A分泌型浆细胞数增加了 94 .3± 6 .3;血清中 Ig G和小肠液中 Ig A滴度分别提高了 0 .6 8± 0 .0 6和 0 .77± 0 .0 5 (P<0 .0 1) ;实验组小鼠排出卵囊减少了 2 .2倍 ,排卵时间缩短了4 .5 d(P<0 .5 )。研究表明重组质粒诱导机体产生多种免疫反应 。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 CP15/60-DNA 滴鼻免疫 小鼠 诱导 系统免疫反应 粘膜免疫 核酸疫苗
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应用巢式PCR方法诊断微小隐孢子虫感染的实验研究 被引量：11
12
作者 杨光 周天鸿 +4 位作者 李月琴 余新炳 朱一 马慧璇 荆春霞 《热带医学杂志》 CAS 2008年第11期1109-1111,1118,共4页
目的应用巢式PCR扩增方法诊断微小隐孢子虫感染。方法用昆明种小鼠通过免疫抑制方法建立动物模型,通过不连续蔗糖密度梯度离心法分离、纯化隐孢子虫卵囊。抽提DNA后,用巢式PCR扩增隐孢子虫的18S核糖体DNA,电泳、割胶回收后测序。结果成... 目的应用巢式PCR扩增方法诊断微小隐孢子虫感染。方法用昆明种小鼠通过免疫抑制方法建立动物模型,通过不连续蔗糖密度梯度离心法分离、纯化隐孢子虫卵囊。抽提DNA后,用巢式PCR扩增隐孢子虫的18S核糖体DNA,电泳、割胶回收后测序。结果成功建立隐孢子虫的小鼠免疫抑制动物模型,纯化后的隐孢子虫卵囊形状均一,呈圆形或椭圆形,大小在3～6μm左右。经巢式PCR扩增,在840bp左右有一条特异性条带。通过测序和生物信息学分析,证实该基因序列与微小隐孢子虫18S具有高度同源性。结论巢式PCR方法扩增18S基因是诊断微小隐孢子虫感染的敏感方法。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 巢式PCR 诊断
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牛隐孢子虫多重PCR方法的建立及应用 被引量：8
13
作者 彭昊 李军 +4 位作者 陶立 陈泽祥 韦志锋 许力干 杨威 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期825-827,836,共4页
目的为寻求一种牛源隐孢子虫的快速检测手段。方法根据牛隐孢子虫COWP基因和ITS-1基因,设计合成两对特异性引物,用以特异性扩增牛微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫,扩增长度分别为1 033bp和263bp。通过反应条件的优化,特异性试验及扩增片段... 目的为寻求一种牛源隐孢子虫的快速检测手段。方法根据牛隐孢子虫COWP基因和ITS-1基因,设计合成两对特异性引物,用以特异性扩增牛微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫,扩增长度分别为1 033bp和263bp。通过反应条件的优化,特异性试验及扩增片段的序列测定的验证,建立多重PCR方法。结果应用该方法对采集自广西不同地区的1613份牛粪样进行牛隐孢子虫检测,安氏隐孢子虫阳性粪样为189份,微小隐孢子虫阳性粪样1份,与常规隐孢子虫分离鉴定结果一致。结论表明该方法可用于隐孢子虫的流行病学调查及临床诊断。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 安氏隐孢子虫 多重PCR
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天津地区奶牛感染隐孢子虫情况的调查 被引量：5
14
作者 孟然 王欣 +4 位作者 董明 张振庭 刘俊燕 纪伟华 杨秀珍 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第3期225-227,共3页
目的调查天津市周边区县奶牛隐孢子虫感染情况。方法对5处奶牛粪样进行检查,采用改良抗酸染色法初筛,对检出的可疑阳性样本采用金胺-酚染色、金胺酚-改良抗酸染色、蔗糖不连续梯度离心法及饱和硫酸锌漂浮等方法进一步观察确定。结果个... 目的调查天津市周边区县奶牛隐孢子虫感染情况。方法对5处奶牛粪样进行检查,采用改良抗酸染色法初筛,对检出的可疑阳性样本采用金胺-酚染色、金胺酚-改良抗酸染色、蔗糖不连续梯度离心法及饱和硫酸锌漂浮等方法进一步观察确定。结果个体养殖户奶牛粪检隐孢子虫阳性率西青区为8.33%(3/36),东丽区为70.00%(7/10),津南区为6.67%(1/15)。中型奶牛场奶牛粪样75份,其中武清县35份,蓟县40份,均为阴性。检出的隐孢子虫经初步鉴定分别为鼠隐孢子虫与微小隐孢子虫。结论天津地区奶牛有一定程度的隐孢子虫感染,需进一步加强小型养牛户的卫生防疫。 展开更多
关键词 隐孢子虫 奶牛 天津地区
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用微小隐孢子虫子孢子表面蛋白DNA疫苗免疫小鼠的实验研究 被引量：4
15
作者 何宏轩 张西臣 +4 位作者 尹继刚 李建华 杨举 刘明远 宣华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第2期3-5,共3页
为了探讨微小隐孢子虫子孢子表面蛋白 CP15 / 60重组质粒 pc DNA3 .1- 15 / 60 DNA疫苗诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果。用重组的 DNA疫苗于 BAL B/ c小鼠后腿胫骨前肌肉注射免疫 ,于 0、3、6周共免疫 3次 ,10 0 μg/次。免疫后... 为了探讨微小隐孢子虫子孢子表面蛋白 CP15 / 60重组质粒 pc DNA3 .1- 15 / 60 DNA疫苗诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果。用重组的 DNA疫苗于 BAL B/ c小鼠后腿胫骨前肌肉注射免疫 ,于 0、3、6周共免疫 3次 ,10 0 μg/次。免疫后不同时间检测体液和细胞免疫应答指标。并用 1× 10 6 卵囊进行攻虫试验。结果表明 pc DNA 3 .1- 15 / 60可诱导机体产生相应的特异性抗体 ,对 C.parvum卵囊攻击具有保护作用。微小隐孢子虫子孢子表面蛋白 CP15 / 60重组质粒 pc DNA3 .1- 15 / 60有可能作为侯选的隐孢子虫 DNA疫苗 。 展开更多
关键词 子孢子表面蛋白 微小隐孢子虫 DNA疫苗 免疫应答 体液免疫 细胞免疫 隐孢子虫病
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合肥地区犬隐孢子虫病流行病学调查 被引量：9
16
作者 于丽萍 李培英 +4 位作者 顾有方 徐文龙 王小龙 邱学斌 殷高岭 《安徽科技学院学报》 2009年第1期15-18,共4页
为了查明合肥地区犬隐孢子虫感染情况,对该地区232只犬进行了隐孢子虫感染情况的调查,结果在24只犬的粪样中查到了隐孢子虫卵囊,其感染率为10.34%(24/232)。对不同调查点、不同年龄段的犬隐孢子虫感染率与感染强度进行统计分析后发现,... 为了查明合肥地区犬隐孢子虫感染情况,对该地区232只犬进行了隐孢子虫感染情况的调查,结果在24只犬的粪样中查到了隐孢子虫卵囊,其感染率为10.34%(24/232)。对不同调查点、不同年龄段的犬隐孢子虫感染率与感染强度进行统计分析后发现,采样地点不同,犬隐孢子虫的感染率有所不同;犬隐孢子虫的感染率存在年龄差异,年龄越小,感染率越高;成年犬的感染强度则较强。经形态学鉴定,所获虫体为微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 流行病学 犬
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武汉市腹泻婴幼儿隐孢子虫感染的分子流行病学调查 被引量：9
17
作者 刘晓洁 毛铁波 +1 位作者 吴鹏 周蕊 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期188-191,205,共5页
目的了解武汉市2岁以下婴幼儿腹泻患者的隐孢子虫感染状况,为预防隐孢子虫感染提供分子流行病学依据。方法采集2014年8月—2015年7月在湖北省人民医院和武汉大学中南医院就诊的2岁以下婴幼儿腹泻患者粪便,过滤沉淀后于2.5%重铬酸钾溶液... 目的了解武汉市2岁以下婴幼儿腹泻患者的隐孢子虫感染状况,为预防隐孢子虫感染提供分子流行病学依据。方法采集2014年8月—2015年7月在湖北省人民医院和武汉大学中南医院就诊的2岁以下婴幼儿腹泻患者粪便,过滤沉淀后于2.5%重铬酸钾溶液中4℃保存;采用酚-氯仿法提取基因组DNA、18S rRNA巢式PCR(Nested-PCR)扩增技术检测隐孢子虫感染,并对阳性PCR产物测序;所获序列进行Blastn比对,应用MEGA软件采用邻接法构建系统进化树进行虫种鉴定。结果共收集到298份婴幼儿腹泻患者的粪便样本。经巢式PCR扩增技术检测,298份样品中有9份扩增出隐孢子虫阳性条带,阳性率为3.02%(9/298),其中1~2岁腹泻幼儿阳性率为5.93%(7/118),<1岁患儿的阳性率为1.11%(2/180),差异有统计学意义(χ~2=4.13,P<0.05)。9份阳性PCR产物经测序后与Gen Bank中的参照序列进行比对,结果显示7份样本为微小隐孢子虫感染,2份样本为微小隐孢子虫与人隐孢子虫混合感染。绘制种系发育进化树发现,9条SSU r RNA基因序列与已发表的微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)位于同一个进化支上。结论武汉地区婴幼儿腹泻患者中存在隐孢子虫感染,主要感染虫种为微小隐孢子虫。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 人隐孢子虫 婴幼儿 腹泻 巢式PCR 分子流行病学 武汉市
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抗隐孢子虫子孢子表膜单链抗体基因的克隆和核苷酸序列分析 被引量：5
18
作者 尹继刚 张西臣 +5 位作者 朱平 张国利 李建华 何宏轩 田宗成 杨举 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期166-169,共4页
应用 RT- PCR技术 ,从分泌具有抗隐孢子虫子孢子表膜单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 3D6中扩增出抗体VH 和 VL 基因 ,用 linker(Gly4 Ser) 3基因 ,将 VH 和 VL 基因连接成 Sc Fv基因 ,并将其克隆至 p MD- 18T载体中。经核苷酸序列分析... 应用 RT- PCR技术 ,从分泌具有抗隐孢子虫子孢子表膜单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 3D6中扩增出抗体VH 和 VL 基因 ,用 linker(Gly4 Ser) 3基因 ,将 VH 和 VL 基因连接成 Sc Fv基因 ,并将其克隆至 p MD- 18T载体中。经核苷酸序列分析证实 ,VH、VL 基因和 linker基因拼接正确 ,基因全长为 72 0 bp。经计算机分析 ,VH 和 VL 基因均为新发现的基因序列 ,符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征。VH和 VL 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链 (A)和轻链 κ 家族。 展开更多
关键词 序列分析 隐孢子虫 子孢子 单链抗体 基因克隆 核苷酸序列
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补骨脂及双氢青蒿素杀灭隐孢子虫的观察 被引量：9
19
作者 车頔 应超 +3 位作者 李秀英 金小翠 秦元华 崔昱 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期360-363,共4页
目的观察补骨脂、双氢青蒿素及二者配伍对隐孢子虫的杀灭效果。方法地塞米松磷酸钠注射液腹股沟皮下注射诱导建立隐孢子虫感染模型,随机分成正常组A、阳性对照组B、补骨脂治疗组C、双氢青蒿素治疗组D以及二者配伍治疗组E,并按治疗1～2w... 目的观察补骨脂、双氢青蒿素及二者配伍对隐孢子虫的杀灭效果。方法地塞米松磷酸钠注射液腹股沟皮下注射诱导建立隐孢子虫感染模型,随机分成正常组A、阳性对照组B、补骨脂治疗组C、双氢青蒿素治疗组D以及二者配伍治疗组E,并按治疗1～2w时间分成A1、A2;B1、B2;C1、C2;D1、D2;E1、E2共计10组。观察各组小鼠肠壁黏膜组织病理变化及超微结构改变。结果经过1、2w的治疗,所有药物治疗组小鼠的粪便卵囊量与阳性对照组相比,均明显减少(P<0.05),小肠黏膜组织病理及超微结构显示小肠上皮处于修复中,并且合剂治疗组疗效明显优于单剂治疗组(P<0.05)。结论中药补骨脂和双氢青蒿素对隐孢子虫均有抑杀作用,但以后者杀虫效果明显。二者协同作用,共同参与宿主的免疫调节和炎症修复过程。 展开更多
关键词 补骨脂 双氢青蒿素 隐孢子虫 超微结构
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微小隐孢子虫子孢子表面蛋白基因诱导小鼠产生免疫应答的研究 被引量：5
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作者 何宏轩 张西臣 +4 位作者 尹继刚 李建华 杨举 刘明远 宣华 《热带医学杂志》 CAS 2001年第2期117-119,共3页
目的　探讨微小隐孢子虫子孢子表面蛋白CP15重组质粒pCR3 1- 15DNA疫苗诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果。方法　用重组的DNA疫苗于BALB/c小鼠后腿胫骨前肌注射免疫 ,于 0、3、6w共免疫 3次 ,10 0 μg/次。免疫后不同时间检测体液... 目的　探讨微小隐孢子虫子孢子表面蛋白CP15重组质粒pCR3 1- 15DNA疫苗诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果。方法　用重组的DNA疫苗于BALB/c小鼠后腿胫骨前肌注射免疫 ,于 0、3、6w共免疫 3次 ,10 0 μg/次。免疫后不同时间检测体液和细胞免疫应答指标。并用 1× 10 6卵囊进行攻击感染试验。结果　pCR3.1- 15可诱导机体产生相应的特异性抗体 ,对C .parvum卵囊攻击具有保护作用。结论　微小隐孢子虫子孢子表面蛋白CP15重组质粒pCR3.1- 15有可能作为侯选的隐孢子虫DNA疫苗 ,值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 DNA疫苗 BALB/C小鼠 免疫应答
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