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人隐孢子虫RT-PCR-ELISA检测方法的建立 被引量:6
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作者 徐前明 李国清 +5 位作者 叶亦见 梁详解 高振勇 岳彩玲 程家林 朱海波 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期150-153,共4页
目的建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法。方法根据人隐孢子虫与其他隐孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中p1引物带有生物素标记)用来扩增含高变区目的片段;采用RT-PCR方法扩增目的片段,扩增产... 目的建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法。方法根据人隐孢子虫与其他隐孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中p1引物带有生物素标记)用来扩增含高变区目的片段;采用RT-PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针引物进行液相杂交,将杂交产物与微孔板上包被的链霉亲和素结合,再与辣根过氧化酶标记的抗地高辛抗体反应。用所建立的方法对22份临床样本进行检测,并与常规检测方法进行比较。结果所建立的RT-PCR-ELISA检测方法具有高特异性和敏感性,比常规的PCR方法灵敏度提高了100(0.08:8ng)左右。临床检测结果显示,该方法的检出率高达86%(19/22),而RT-PCR、蔗糖漂浮法和抗酸染色法的检出率仅为27%(6/22)、27%(6/22)和50%(11/22)。结论本试验成功建立了人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法,检出率比常规检测方法高。 展开更多
关键词 人隐孢子虫 PCR—ELISA RT-PCR 检测
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Disseminated cryptosporidiosis:Case report and literature review 被引量:1
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作者 Shehla Khalil Bijay R Mirdha +2 位作者 Jaishree Paul Ashutosh Panda Yogita Singh 《World Journal of Clinical Infectious Diseases》 2017年第2期32-37,共6页
Cryptosporidiosis,better known as an intestinal disease may disseminate to infect other sites including the respiratory tract. Little information however is available on respiratory cryptosporidiosis that may largely ... Cryptosporidiosis,better known as an intestinal disease may disseminate to infect other sites including the respiratory tract. Little information however is available on respiratory cryptosporidiosis that may largely be due to lower frequency of respiratory cryptosporidiosis. Respiratory cryptosporidiosis has been majorly reported in immunocompromised individuals and children. Here we report a case of respiratory and intestinal cryptosporidiosis in a fifteen months old child with CD8+ deficiency. The patient in spite of treatment with Nitazoxanide and Azithromycin followed by Intravenous immunoglobulin and Bovine colostrum had a fatal outcome. The Cryptosporidium spp. isolate was subjected to molecular characterization. The Cryptosporidium spp. was identified both in stool specimen and Endotracheal aspirate(ETA). The blood sample was negative for Cryptosporidium spp. The Cryptosporidium spp. isolate from stool as well as ETA was identified as Cryptosporidium hominis(C. hominis) using Multiplex Allele Specific Polymerase Chain Reaction assay and was subtyped as Ia A23G1R1 subtype using gp60 gene polymerase chain reaction assay followed by sequencing. 展开更多
关键词 CRYPTOSPORIDIOSIS DISSEMINATED disease CD8+deficiency cryptosporidium hominis SUBTYPING
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HIV/AIDS患者合并感染机会性致病原虫与CD4^(+)T淋巴细胞数的相关性 被引量:3
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作者 褚文达 唐海丰 +5 位作者 张雨沁 杨兴堂 崔世勇 张月娟 张正琪 唐小德 《热带医学杂志》 CAS 2021年第3期352-355,共4页
目的调查HIV/AIDS患者合并感染机会性致病原虫的情况并分析其与CD4+T淋巴细胞数的相关性。方法对1033份完成CD4+T淋巴细胞计数的HIV/AIDS患者血清进行弓形虫、隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫IgG抗体检测,结合患者人口学特征和CD4+T淋巴细胞... 目的调查HIV/AIDS患者合并感染机会性致病原虫的情况并分析其与CD4+T淋巴细胞数的相关性。方法对1033份完成CD4+T淋巴细胞计数的HIV/AIDS患者血清进行弓形虫、隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫IgG抗体检测,结合患者人口学特征和CD4+T淋巴细胞计数结果进行统计分析。结果共有213人(20.5%)感染机会性致病原虫,其中感染弓形虫45人(4.4%),感染隐孢子虫101人(9.8%),感染蓝氏贾第鞭毛虫77人(7.5%),有10人同时感染两种原虫,未发现同时感染三种原虫的患者。男女患者感染三种原虫的比例差异无统计学意义(P>0.05)。不同年龄段患者的弓形虫感染率差异无统计学意义(P>0.05),但是感染隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫的差异有统计学意义(P<0.05)。维族患者感染弓形虫的比例明显高于汉族患者(P<0.05),达到了37.50%。因注射吸毒而感染HIV的患者感染弓形虫的比例明显高于同性传播和异性传播而感染HIV的患者。CD4+T淋巴细胞数<500个/μL的免疫缺陷组感染弓形虫的比例明显高于CD4+T淋巴细胞数≥500个/μL的无免疫缺陷组,差异有统计学意义(P<0.05),而感染隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫的差异无统计学意义(P>0.05)。结论CD4+T淋巴细胞数<500个/μL和注射吸毒会增加HIV/AIDS患者感染弓形虫的风险,但是对隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫的感染率无明显影响。 展开更多
关键词 艾滋病 弓形虫 隐孢子虫 蓝氏贾第鞭毛虫 CD4
原文传递
猴源人隐孢子虫的分离与鉴定 被引量:1
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作者 徐前明 程家林 +4 位作者 李国清 叶亦见 梁详解 岳彩玲 高振勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期186-189,共4页
为了解感染不同灵长类动物的隐孢子虫种类以及与感染人的人隐孢子虫(C.hominis)之间的遗传差异,本研究采用形态学和分子生物学方法对猴源隐孢子虫进行分离和鉴定。利用常规方法分离猴粪便中的隐孢子虫卵囊,通过改良抗酸染色和荧光显微... 为了解感染不同灵长类动物的隐孢子虫种类以及与感染人的人隐孢子虫(C.hominis)之间的遗传差异,本研究采用形态学和分子生物学方法对猴源隐孢子虫进行分离和鉴定。利用常规方法分离猴粪便中的隐孢子虫卵囊,通过改良抗酸染色和荧光显微镜观察对其进行形态学鉴定;并采用PCR方法扩增其卵囊壁蛋白(COWP)基因和18SrRNA基因,扩增产物克隆至pMD-18-T载体中,对阳性克隆进行测序并作进化树分析。结果表明:抗酸染色和荧光检查结果与所报道的人隐孢子虫的结果一致。PCR扩增产物经电泳检测,明显地出现554bp和370bp大小的片段,与预期结果一致;两种基因的序列分析结果显示该猴源隐孢子虫与C.hominis的相似性均为100%。由此可认为本次分离的隐孢子虫为C.hominis。 展开更多
关键词 人隐孢子虫 鉴定
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人隐孢子虫IbA19G2基因亚型蒙古沙鼠感染模型的建立
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作者 王强 杨楠 +3 位作者 菅复春 王荣军 宁长申 张龙现 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2011年第1期1-5,共5页
人隐孢子虫Cryptosporidium hominis是人类的主要感染虫株,目前已获取且传代保存的国内分离株较少,在生物学特性研究也未见报道.在本试验自感染前第10天起至排卵囊结束后14天,采用胃管灌服地塞米松(0.75 mg/(只·2天))抑制蒙古... 人隐孢子虫Cryptosporidium hominis是人类的主要感染虫株,目前已获取且传代保存的国内分离株较少,在生物学特性研究也未见报道.在本试验自感染前第10天起至排卵囊结束后14天,采用胃管灌服地塞米松(0.75 mg/(只·2天))抑制蒙古沙鼠免疫力,对国内C.hominis Ib亚型分离株生物学特性进行研究.结果显示,感染后第3天,感染组有卵囊排出,感染后第6天出现高峰期,此后逐渐下降直至感染后第10或11天排卵囊结束.感染前后基于18S rRNA和gp60基因分析,表明遗传学无差异.建立了持续稳定的C.hominis Ib亚型分离株啮齿动物模型,为C.hominis卵囊扩增和进一步研究其生物学特性等提供了重要的参考依据. 展开更多
关键词 人隐孢子虫 蒙古沙鼠 免疫抑制 感染模型
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猴源人隐孢子虫P23抗原基因克隆表达及其免疫活性的测定
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作者 徐前明 李国清 +3 位作者 罗锋 程家林 岳彩玲 高振永 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2011年第1期6-10,共5页
为探索隐孢子虫病免疫预防的新途径,本文对猴源人隐孢子虫Cryptosporidium hominis P23抗原基因进行了克隆、表达及其免疫活性的测定.采用RT-PCR方法对猴源C.hominis P23抗原基因进行克隆,构建重组质粒pGEX 4T 1 P23,并用IPTG诱导其在E.... 为探索隐孢子虫病免疫预防的新途径,本文对猴源人隐孢子虫Cryptosporidium hominis P23抗原基因进行了克隆、表达及其免疫活性的测定.采用RT-PCR方法对猴源C.hominis P23抗原基因进行克隆,构建重组质粒pGEX 4T 1 P23,并用IPTG诱导其在E.Coli Rossetta中表达;采用SDS PAGE检测其表达效果;采用Dot ELISA和淋巴细胞转化试验分别检测其与抗体反应特性和淋巴细胞增殖情况.结果表明:所克隆的P23抗原基因大小为342 bp;重组质粒表达蛋白的大小为40 kDa(含26 kDa的融合蛋白GST),以1、5、10 μg剂量的重组蛋白rP23均能刺激鼠脾脏淋巴细胞增殖,并能够与感染猴血清中的抗体明显地发生反应. 展开更多
关键词 人隐孢子虫 P23抗原基因 重组蛋白 免疫活性
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