期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到252篇文章
< 1 2 … 13 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
基于Cre-loxP系统条件性基因敲除小鼠的构建及其应用进展 被引量：13
1
作者 孔维健 常宇鑫 +2 位作者 昝春芳 郑爽 杨小玉 《中国实验诊断学》 2017年第12期2208-2211,共4页
随着科研技术水平的不断提高,转基因技术在基础实验研究中得到了广泛的应用,基因敲除技术是转基因技术中不可替代的组成部分,而条件性基因敲除技术作为新一代基因敲除技术,与第一代基因敲除技术相比显然有着明显的优势和更为广泛的应用... 随着科研技术水平的不断提高,转基因技术在基础实验研究中得到了广泛的应用,基因敲除技术是转基因技术中不可替代的组成部分,而条件性基因敲除技术作为新一代基因敲除技术,与第一代基因敲除技术相比显然有着明显的优势和更为广泛的应用前景。 展开更多
关键词 基因敲除小鼠 cre-loxp 基因敲除技术 条件性 转基因小鼠模型 重组酶 同源重组 突变基因 目的基因 疾病模型
下载PDF
Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能评价 被引量：10
2
作者 王志蕊 刘西梅 +4 位作者 周荆荣 郑新民 魏庆信 董发明 毕延震 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期194-201,共8页
选择标记的使用和残留可引起消费者对转基因生物环境安全和产品安全的担忧,建立消除选择标记的有效对策甚为必要.本研究的目标是评价Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能,为猪安全转基因研究提供实验依据和技术支撑.本文所用... 选择标记的使用和残留可引起消费者对转基因生物环境安全和产品安全的担忧,建立消除选择标记的有效对策甚为必要.本研究的目标是评价Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能,为猪安全转基因研究提供实验依据和技术支撑.本文所用的打靶载体ΔMSTN含有LoxP位点锚定的选择标记表达框(LoxP-CMV-NeoR-IRES-EGFP-LoxP).经电穿孔将该打靶载体导入猪肾PK15细胞,经G418筛选,获得稳定整合该载体、EGFP表达均一的单克隆细胞系.将Cre重组酶表达载体pTurbo-Cre导入该细胞系,借助流式分选(FACS)、终点PCR、荧光定量PCR、TA克隆与测序等手段,证明Cre-LoxP重组系统可在猪细胞内高效介导内源性选择标记基因的删除反应,EGFP水平的删除效率达到46.1%,DNA水平的删除效率则达到97%.本文的研究结果为消除选择标记的安全隐患提供了可靠的解决方案,为建立猪安全转基因技术提供了重要的科学依据. 展开更多
关键词 cre loxp 安全转基因 选择标记 绿色荧光蛋白 删除
下载PDF
利用Cre/LoxP系统删除转基因山羊体内的选择标记基因 被引量：8
3
作者 兰翀 任丽娜 +6 位作者 吴敏 刘思国 刘国辉 徐旭俊 陈建泉 马恒东 成国祥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1847-1854,共8页
在制备转基因家畜过程中的一个关键步骤是使用选择标记基因（Selectablemarkergenes，SMGs）将转基因整合细胞从大量的正常细胞中筛选出来，这导致了SMGs整合入家畜的基因组内持续传递给后代。SMGs已被证明能够显著影响基因组内整合位... 在制备转基因家畜过程中的一个关键步骤是使用选择标记基因（Selectablemarkergenes，SMGs）将转基因整合细胞从大量的正常细胞中筛选出来，这导致了SMGs整合入家畜的基因组内持续传递给后代。SMGs已被证明能够显著影响基因组内整合位点处的基因调控，也增加了对转基因动物安全评价的复杂性。为了确定转基因山羊制备过程中SMGs的删除时机和删除方法，在体细胞克隆前后两个时段内，利用Cre／LoxP系统删除SMGs的可行性，同时比较了蛋白转导和质粒共转染两种Cre导入方式的删除效率。结果表明：尽管在首次对山羊成纤维细胞进行遗传修饰后即可进行SMGs删除，但两次遗传修饰导致细胞严重老化，无法用于后续的体细胞克隆羊制备。在转基因山羊的成体细胞中删除SMGs不存在上述问题，成功率高，缺点是试验周期长、耗资增大。Cre表达质粒瞬时转染能够删除SMGs，但有超过30％的无SMGs细胞克隆中整合有质粒序列。TAT-CRE蛋白质转导方法可以避免引入的新外源基因，SMGs删除率达到43．9％～72．8％，是一种较佳的SMGs删除手段。 展开更多
关键词 转基因山羊 cre loxp 基因敲除 标记基因
原文传递
含LoxP位点和EGFP的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体的构建 被引量：4
4
作者 潘华奇 刘磊 +5 位作者 曹瑞兵 魏凡华 袁立科 李娟 孙海亮 潘光炎 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第2期8-12,共5页
提取鸭瘟病毒(DPV)疫苗株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的DPV UL区UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL24、部分T... 提取鸭瘟病毒(DPV)疫苗株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的DPV UL区UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失468个核苷酸.将L片段和R片段克隆于pBluescript M13-载体上,获得了pSKLR;再将含2个LoxP位点的表达绿色荧光蛋白的基因表达盒插入pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLR-EGEP-LoxP.大量提取pSKLR-EGEP-LoxP质粒,用脂质体转染鸭胚成纤维细胞,24 h后蛋白被正确表达,表明含LoxP位点的表达EGFP的鸭瘟病毒TK基因缺失的重组转移载体被成功构建. 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 EGFP cre/loxp TK基因 转移载体
下载PDF
肝细胞特异性Sirt3基因敲除小鼠模型的构建 被引量：1
5
作者 许雅萍 王语涵 +5 位作者 陈婷婷 李南 高萍萍 李玲 王华 孙妩弋 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期384-390,共7页
目的运用Cre-loxP技术构建肝细胞特异性沉默信息调节因子3(silence information regulator 3,Sirt3)基因敲除(Sirt3^(Δhep))小鼠,为研究肝细胞Sirt3基因在疾病中的生物学功能提供重要动物模型。方法将loxP标记的Sirt3 ^(flox/flox)小鼠... 目的运用Cre-loxP技术构建肝细胞特异性沉默信息调节因子3(silence information regulator 3,Sirt3)基因敲除(Sirt3^(Δhep))小鼠,为研究肝细胞Sirt3基因在疾病中的生物学功能提供重要动物模型。方法将loxP标记的Sirt3 ^(flox/flox)小鼠与Alb-Cre纯合子(Alb-Cre^(+/+))小鼠进行交配,F1代Sirt3^(flox/-)/Alb-Cre^(+/-)小鼠再与Sirt3^(flox/flox)小鼠进行交配并鉴定,F2代基因型为Sirt3 ^(flox/flox)/Alb-Cre^(+/-)的小鼠即为本实验所构建的Sirt3^(Δhep)小鼠,Sirt3 ^(flox/flox)/Alb-Cre^(-/-)小鼠即为对照小鼠Sirt3 ^(flox/flox)小鼠。提取鼠尾DNA,通过PCR鉴定子代小鼠的基因型;免疫荧光双染观察Sirt3在小鼠肝细胞中的表达;提取Sirt3^(Δhep)小鼠原代肝细胞及心脏、脾脏、肾脏、肺组织蛋白,Western blot法验证Sirt3在小鼠肝细胞及其他组织中的表达水平;HE染色观察小鼠肝脏及心脏、脾脏、肺等组织结构。结果成功鉴定出Sirt3^(Δhep)小鼠;免疫荧光及Western blot结果显示,小鼠肝细胞中Sirt3蛋白表达水平低于对照组小鼠(P<0.01),而Sirt3^(Δhep)小鼠的心脏、脾脏、肾脏和肺组织中Sirt3表达与对照组相比无明显变化(P>0.05);HE染色结果显示Sirt3^(Δhep)小鼠肝脏、心脏、脾脏、肺、肾脏的组织学特征与对照组小鼠相比无明显变化。结论成功构建肝细胞特异性Sirt3基因敲除小鼠,为进一步研究肝细胞Sirt3基因在相关疾病中的调控作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 肝细胞 Sirt3 基因敲除 Sirt3^(Δhep)小鼠 cre-loxp 基因型鉴定
下载PDF
Cre／loxp位点特异性重组系统在转基因植物中的应用 被引量：4
6
作者 邱淑萍 陈在杰 王锋 《福建农业学报》 2008年第2期211-217,共7页
位点特异性重组系统能够在植物遗传转化中更准确、可靠的操纵外源DNA的引入或删除,已成为植物遗传操作中的重要工具。本文简要介绍目前应用最为广泛的Cre/loxp位点特异性重组系统的重组机制,并着重阐述Cre/loxp系统在删除转基因植物中... 位点特异性重组系统能够在植物遗传转化中更准确、可靠的操纵外源DNA的引入或删除,已成为植物遗传操作中的重要工具。本文简要介绍目前应用最为广泛的Cre/loxp位点特异性重组系统的重组机制,并着重阐述Cre/loxp系统在删除转基因植物中标记基因及定点整合等方面的应用。 展开更多
关键词 位点特异性重组 cre/loxp 转基因植物 基因删除 定点整合
下载PDF
转基因植物高效删除标记基因的实用型双元转化载体 被引量：5
7
作者 李霞 翁海波 +2 位作者 韩绍印 席宇 雍克兰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期550-554,共5页
利用雌激素诱导的Cre/loxPDNA重组系统,构建用于转基因植物删除标记基因的实用新型载体,将所有非目的基因放于两同向loxP位点间,多克隆位点位于两loxP位点外,可插入目的基因,载体设计非常实用。在插入目的基因GUS后转化烟草,雌激素诱导... 利用雌激素诱导的Cre/loxPDNA重组系统,构建用于转基因植物删除标记基因的实用新型载体,将所有非目的基因放于两同向loxP位点间,多克隆位点位于两loxP位点外,可插入目的基因,载体设计非常实用。在插入目的基因GUS后转化烟草,雌激素诱导,分析诱导前后DNA的重组情况、不同时间基因转录水平,以及目的基因在诱导前后的表达。结果显示,诱导后染色体DNA实现了高效重组,非目的基因片段消失,目的基因GUS在诱导后表达正常。 展开更多
关键词 cre/loxp 雌激素诱导 XVE 无标记转基因植物
下载PDF
BAT2缺失酿酒酵母基因工程安全菌株的构建及其杂交育种 被引量：7
8
作者 张艳英 肖冬光 +3 位作者 张翠英 王文阳 汪东升 李月强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期36-40,共5页
为了获得低产高级醇基因工程安全菌株,首先将带有Cre重组酶编码基因的pGAPZA质粒转入BAT2缺失单倍体突变株A8-B和C22-B中,利用Cre/loxp系统去除G418抗性基因(KanMX),获得酿酒酵母单倍体突变株ΔBAT2a和ΔBAT2α。然后将这2株单倍体杂交... 为了获得低产高级醇基因工程安全菌株,首先将带有Cre重组酶编码基因的pGAPZA质粒转入BAT2缺失单倍体突变株A8-B和C22-B中,利用Cre/loxp系统去除G418抗性基因(KanMX),获得酿酒酵母单倍体突变株ΔBAT2a和ΔBAT2α。然后将这2株单倍体杂交成双倍体菌株ΔBAT2,该菌株具有良好的遗传稳定性。以野生菌株AY15和2株单倍体出发菌株为对照,对基因工程安全菌株进行白酒发酵试验,实验结果显示,基因工程安全菌株ΔBAT2与出发菌株相比,CO2失重高,残糖低,乙醇含量高;与野生菌株AY15相比,异丁醇、异戊醇、总高级醇生成量分别降低50.00%、33.40%和30.57%。 展开更多
关键词 酿酒酵母 高级醇 cre/loxp G418 白酒发酵
下载PDF
小鼠染色体工程的研究进展 被引量：4
9
作者 王友亮 杨晓 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期272-275,共4页
以染色体大片段的删除和重排为主要特征的小鼠染色体工程逐渐成为一种大规模研究小鼠基因功能的重要手段。
关键词 小鼠 染色体工程 研究进展 删除 重排 cre-loxp
下载PDF
巨噬细胞特异性TDO2基因敲除小鼠的构建
10
作者 董伟波 陈悦兰 +3 位作者 王燚 程梦 魏伟 常艳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第6期994-1000,共7页
目的构建巨噬细胞特异性色氨酸2,3-双加氧酶(TDO2)基因敲除小鼠,为研究TDO2调控巨噬细胞功能影响疾病发生发展提供动物模型。方法基于Cre-Loxp系统构建巨噬细胞特异性TDO2基因敲除(TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+))小鼠。采用PCR和琼脂... 目的构建巨噬细胞特异性色氨酸2,3-双加氧酶(TDO2)基因敲除小鼠,为研究TDO2调控巨噬细胞功能影响疾病发生发展提供动物模型。方法基于Cre-Loxp系统构建巨噬细胞特异性TDO2基因敲除(TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+))小鼠。采用PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型;采用Western blot和免疫荧光验证小鼠巨噬细胞中TDO2敲除效果;通过苏木精-伊红(HE)染色,观察主要组织器官是否存在自发病变。结果基因型鉴定结果表明,flox扩增产物长度在407 bp或408 bp处仅有一条条带且Cre扩增产物长度在543 bp处有一条条带的小鼠即为TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+)小鼠。Western blot结果显示,与TDO2^(flox/flox)小鼠相比,TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+)小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)中TDO2表达降低(P<0.01)。免疫荧光结果显示,与TDO2^(flox/flox)小鼠相比,TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+)小鼠腹腔巨噬细胞和BMDMs中TDO2表达降低。HE染色结果显示,与TDO2^(flox/flox)小鼠相比,TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+)小鼠肝脏、脑、肾脏和脾脏组织内细胞形态无明显差异。结论成功构建TDO2^(flox/flox)Lyz2-iCre^(+)小鼠,为后续深入研究TDO2调控巨噬细胞活化在疾病中的作用和机制提供更加精准的实验动物模型。 展开更多
关键词 TDO2 特异性基因敲除 巨噬细胞 基因型鉴定 cre-loxp
下载PDF
利用Cre-Loxp技术构建标记肝星状细胞的小鼠模型 被引量：1
11
作者 黄紫薇 赵殿元 +1 位作者 徐龙 唐丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第7期1065-1070,共6页
目的通过Cre-Loxp技术构建转基因小鼠,应用Lrat^(Cre)工具鼠示踪肝星状细胞分布。方法将Lrat^(Cre)小鼠与H11^(LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)报告基因小鼠交配,通过PCR鉴定得Lrat^(Cre)H11^(LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)报告... 目的通过Cre-Loxp技术构建转基因小鼠,应用Lrat^(Cre)工具鼠示踪肝星状细胞分布。方法将Lrat^(Cre)小鼠与H11^(LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)报告基因小鼠交配,通过PCR鉴定得Lrat^(Cre)H11^(LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)报告基因小鼠。固定小鼠肝脏切片,借助免疫荧光标记肝脏非实质细胞抗体,通过Imaris 3D还原分析肝星状细胞和其他肝脏非实质细胞间的表达与分布,以及进行肝星状细胞的自定位检验。结果Lrat^(Cre)介导的红色荧光蛋白tdTomato的表达可以特异性标记肝星状细胞,并通过肝星状细胞与肝脏巨噬细胞、肝窦内皮细胞的免疫荧光定位为细胞间相互作用分析提供了途径。结论Lrat^(Cre)可以介导tdTomato对肝星状细胞进行示踪,同时可用做肝星状细胞特异性的报告基因工具鼠。 展开更多
关键词 肝星状细胞 肝脏巨噬细胞 肝窦内皮细胞 报告基因小鼠 cre-loxp
下载PDF
利用Cre/lox P系统构建胰岛β细胞特异性敲除PDHA1基因的小鼠模型 被引量：5
12
作者 王肖 赖舒畅 +3 位作者 叶艳诗 许雪娟 白晓春 沈洁 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第31期5023-5029,共7页
背景:研究表明,2型糖尿病啮齿类动物模型及人体的丙酮酸脱氢酶复合体表达量降低,PDHA1基因缺陷也是导致丙酮酸脱氢酶复合体酶活性改变最常见的原因。目的:构建并鉴定胰岛β细胞特异性敲除PDHA1基因小鼠,为后续探究PDHA1基因在糖尿病发... 背景:研究表明,2型糖尿病啮齿类动物模型及人体的丙酮酸脱氢酶复合体表达量降低,PDHA1基因缺陷也是导致丙酮酸脱氢酶复合体酶活性改变最常见的原因。目的:构建并鉴定胰岛β细胞特异性敲除PDHA1基因小鼠,为后续探究PDHA1基因在糖尿病发病机制方面作用提供模型基础。方法:实验方案经南方医科大学伦理委员会批准。利用Cre/lox P系统理论,将PDHA1^loxp/loxp小鼠与胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的小鼠进行数代杂交,3-4周龄小鼠通过PCR法鉴定筛选基因型,子2代中基因型为PDHA1^loxp/loxpCre^+/-小鼠即为实验所需要构建的模型小鼠。取4周龄PDHA1^flox/floxCre^+/-小鼠(βKO小鼠组)与Cre^+/-小鼠(对照组)各5只,给予相同的水和饲料,待8周龄时连续7d注射腹腔注射他莫昔芬50mg/kg诱导PDHA1基因敲除,观察3周后腹腔注射麻醉,取胰腺组织、脂肪组织、肝脏组织。采用q PCR法、Western Blot法、免疫组织化学法鉴定PDHA1基因敲除效果,观察小鼠表型。结果与结论:(1)PCR基因扩增筛选出基因型为PDHA1^loxp/loxpCre^+/-小鼠;(2)q PCR法检验小鼠胰腺、脂肪、肝脏组织,证实敲除效果具有组织特异性,胰岛中βKO组小鼠PDHA1 mRNA的相对表达较对照组明显下降;(3)Western Blot检测及免疫组织化学法观察显示,βKO组小鼠PDHA1蛋白表达较对照组小鼠明显降低,证实敲除PDHA1基因效果明显;(4)结果说明,利用Cre/loxP系统成功构建胰岛β细胞特异性敲除PDHA1基因的小鼠模型,为动物水平上探究糖尿病发病机制提供新的靶点。 展开更多
关键词 糖尿病 PDHA1 cre/loxp Β细胞 基因
下载PDF
谷氨酸棒状杆菌CRISPR-Cpf1和Cre/loxP基因敲除技术的比较 被引量：5
13
作者 占米林 阚宝军 +4 位作者 张辉 董晋军 许国超 韩瑞枝 倪晔 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期278-291,共14页
【背景】谷氨酸棒状杆菌的基因敲除系统较为匮乏且效率不高,难以对其进行代谢工程改造,不利于高性能工业菌株的构建及规模生产。【目的】分别采用CRISPR-Cpf1和Cre/loxP基因敲除系统对谷氨酸棒状杆菌ATCC13032(Corynebacteriumglutamicu... 【背景】谷氨酸棒状杆菌的基因敲除系统较为匮乏且效率不高,难以对其进行代谢工程改造,不利于高性能工业菌株的构建及规模生产。【目的】分别采用CRISPR-Cpf1和Cre/loxP基因敲除系统对谷氨酸棒状杆菌ATCC13032(CorynebacteriumglutamicumATCC13032)基因组上的argR和argF基因进行敲除,比较两种敲除方法的优缺点,为合理选择敲除系统提供依据。【方法】特异性重组的Cre/loxP敲除系统是首先利用同源重组将基因组上的靶基因替换为两端带有重组位点loxP的kanR片段,然后由重组酶Cre识别loxP位点并发生重组反应,从而去除替换到基因组上的kanR片段,进一步利用质粒的温敏特性将其消除,从而实现靶基因的敲除。CRISPR-Cpf1敲除系统是利用Cpf1对pre-crRNA进行加工,形成的成熟crRNA引导Cpf1识别和结合到靶DNA的特定序列上并切割双链DNA分子,通过同源重组作用去除靶基因,基于质粒自身的温敏特性将其消除,从而完成基因敲除的整个过程。【结果】Cre/lox P系统可在8N+2 d内完成N轮迭代基因敲除,而CRISPR-Cpf1系统可在5N+2d内完成N轮迭代基因无痕敲除,理论上还可以一次对多个靶位点进行编辑,效率更高,但存在同源重组效率较低、假阳性率高等缺点。【结论】与Cre/loxP系统相比,CRISPR-Cpf1辅助的同源重组基因敲除方法可省时、省力地实现基因的无痕敲除,理论上还可实现多个基因的同时敲除、总体效率更高,然而编辑效率还有提高的空间。 展开更多
关键词 谷氨酸棒状杆菌 CRISPR-Cpf1 cre/loxp 同源重组 基因敲除
原文传递
髓系特异性Spi1基因敲除小鼠的构建和基因鉴定
14
作者 吴旭铭 王卉卉 +5 位作者 朱向玲 周园园 王安琪 张慧茹 刘崇 涂佳杰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期413-417,共5页
目的构建髓系特异性Spi1基因敲除小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点研究提供动物模型基础。方法根据CRISPR/Cas9技术原理和Cre/LoxP系统,设计并构建sgRNA和Donor载体,以第2号外显子(Exon 2)所在的转录本为敲除区域,在Exon 2... 目的构建髓系特异性Spi1基因敲除小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点研究提供动物模型基础。方法根据CRISPR/Cas9技术原理和Cre/LoxP系统,设计并构建sgRNA和Donor载体,以第2号外显子(Exon 2)所在的转录本为敲除区域,在Exon 2两侧各放置同向Loxp元件;将Cas9蛋白、sgRNA和Donor载体混合显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,移植受精卵到假孕的C57BL/6J母鼠的子宫中,19~20 d后获得F0代。将阳性F0代小鼠与C57BL/6J小鼠交配,得到稳定的F1代Spi1^(flox/+)小鼠。F1代Spi1^(flox/+)小鼠雌雄自交得到Spi1^(flox/flox)小鼠。Spi1^(flox/flox)与Lyz2-Cre^(+)小鼠交配得到Spi1^(flox/+)/Lyz2-Cre^(+)小鼠,再将其与Spi1^(flox/flox)交配,得到的Spi1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(+)小鼠为髓系特异性Spi1基因敲除(KO)小鼠;Spi1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(-)小鼠作为野生型(WT)小鼠。提取WT和KO小鼠DNA,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型;Western blot检测WT和KO小鼠免疫细胞中脾病灶形成病毒前病毒整合癌基因-1/富含嘌呤盒1(PU.1)表达。结果PCR鉴定结果显示,采用flox引物鉴定时仅扩增出220 bp条带的小鼠,即基因型为Spi1^(flox/flox)纯合子,采用Lyz2-Cre引物鉴定时扩增出700 bp的小鼠,基因型为Lyz2-Cre^(+);Western blot结果显示,与WT组比较,KO组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)和腹腔原位巨噬细胞(PM)中的PU.1不表达(P<0.01);T细胞中KO小鼠PU.1表达水平与WT小鼠差异无统计学意义;PCR和Western blot结果均表明髓系特异性Spi1 KO小鼠构建成功。结论成功构建和鉴定髓系特异性Spi1 KO小鼠,为进一步揭示PU.1在免疫调节中的潜在机制研究提供动物模型基础。 展开更多
关键词 髓系特异性 Spi1 基因敲除 CRISPR/Cas9 cre/loxp PCR Western blot
下载PDF
血管内皮细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠的建立(英文) 被引量：3
15
作者 李文龙 程萱 +4 位作者 谭晓红 张继帅 孙岩松 陈林 杨晓 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期909-915,共7页
血管内皮细胞参与血管形成、血管稳态维持、血栓形成、炎症和血管重建等生理和病理过程。为了便于通过Cre-LoxP系统研究相关基因在血管内皮细胞中的功能,创建了Tie2-Cre转基因小鼠,利用Tie2基因的启动子驱动Cre重组酶基因在血管内皮细... 血管内皮细胞参与血管形成、血管稳态维持、血栓形成、炎症和血管重建等生理和病理过程。为了便于通过Cre-LoxP系统研究相关基因在血管内皮细胞中的功能,创建了Tie2-Cre转基因小鼠,利用Tie2基因的启动子驱动Cre重组酶基因在血管内皮细胞中表达。经基因组PCR和SouthernBlot鉴定有6只小鼠在基因组上整合有Cre基因,整合率为11%。为了验证Cre重组酶的剪切活性和表达组织分布,我们将Tie2-Cre转基因小鼠分别与Smad4条件基因打靶小鼠和报告小鼠ROSA26交配。Tie2-Cre;Smad4Co/+小鼠的多个组织的基因组DNA的PCR结果显示,Cre重组酶在所有包含血管内皮细胞的组织中表达并能介导LoxP间的重组。Tie2-Cre;ROSA26双转基因胚胎LacZ染色结果显示,Cre重组酶在所有被检测组织的血管内皮细胞中特异性表达。因此,Tie2-Cre转基因小鼠可作血管内皮细胞谱系分析和在血管内皮细胞进行条件基因打靶的理想工具小鼠。 展开更多
关键词 TIE2 血管内皮细胞 cre-loxp 转基因小鼠 cre重组酶 特异表达 基因组DNA cre-loxp Southern 组织分布
下载PDF
条件基因打靶研究存在的主要问题及对策 被引量：4
16
作者 林福玉 杨晓 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期469-484,共16页
基于Cre-loxP等位点特异性重组系统的条件基因打靶技术在解析基因功能和制备疾病小鼠模型方面发挥着极其重要的作用。但包括Cre重组酶转基因的表达模式不理想、重组效率存在差异、Cre重组酶的毒性等在内的Cre-loxP重组系统相关的缺陷以... 基于Cre-loxP等位点特异性重组系统的条件基因打靶技术在解析基因功能和制备疾病小鼠模型方面发挥着极其重要的作用。但包括Cre重组酶转基因的表达模式不理想、重组效率存在差异、Cre重组酶的毒性等在内的Cre-loxP重组系统相关的缺陷以及条件基因打靶技术本身存在的问题,如遗传背景、育种策略、实验对照、基因代偿等方面的影响往往被忽略,严重影响基因功能和小鼠表型解析的准确性。针对这些问题,精细调控实现Cre重组酶的理想时空特异性表达、详尽地分析Cre重组酶的重组效率、降低Cre重组酶的毒性、遗传背景单一化、优化育种策略、设立严格实验对照、多基因联合条件基因打靶等诸多解决方案应予以采纳。 展开更多
关键词 条件基因打靶 cre-loxp 位点特异性重组 遗传背景
下载PDF
选择标记可去除的植物高效表达载体的构建 被引量：2
17
作者 高尚 苏鸓 +4 位作者 贾洪革 郭洪年 田颖川 方荣祥 陈晓英 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期157-160,共4页
在常用的植物组成型表达载体pBI121的选择标记基因NPTII两侧插入同向的lox位点并用多克隆位点(MCS)取代了GUS基因序列,构建了NPTII基因可被去除的和可插入目的基因的通用植物表达载体pBI121-lox-MCS。替换pBI121-lox-MCS中驱动目的基因... 在常用的植物组成型表达载体pBI121的选择标记基因NPTII两侧插入同向的lox位点并用多克隆位点(MCS)取代了GUS基因序列,构建了NPTII基因可被去除的和可插入目的基因的通用植物表达载体pBI121-lox-MCS。替换pBI121-lox-MCS中驱动目的基因表达的35S启动子,可构建成一系列具有其他表达特性的植物表达载体,如本文描述的韧皮部特异表达载体pBdENP-lox-MCS。为方便地筛选去除选择标记基因的转基因植物,还构建了绿色荧光蛋白(GFP)表达框与NPTII表达框连锁的pBI121-gfp-lox-MCS载体。上述植物表达载体可广泛应用于培育选择标记可去除的转基因植物。 展开更多
关键词 植物表达载体 去除选择标记 组织特异性表达启动子 cre/loxp DNA重组系统
下载PDF
巨噬细胞特异性敲除MST1小鼠模型的构建
18
作者 薛茜 李鉴洋 +1 位作者 高文茜 张玉侠 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第10期1672-1677,共6页
目的制备髓系(包括巨噬细胞和粒细胞)特异敲除哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)基因小鼠,为研究巨噬细胞MST1在临床相关疾病发生中的作用及机制提供动物模型。方法利用MST1基因携带loxP位点的小鼠(Mst1^(flox/flox))和髓系细胞特异表达Lys... 目的制备髓系(包括巨噬细胞和粒细胞)特异敲除哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)基因小鼠,为研究巨噬细胞MST1在临床相关疾病发生中的作用及机制提供动物模型。方法利用MST1基因携带loxP位点的小鼠(Mst1^(flox/flox))和髓系细胞特异表达LysM-Cre小鼠杂交构建巨噬细胞特异性敲除MST1小鼠(Mst1^(flox/flox)LysM-Cre^(+),即Mst1^(ΔM/ΔM));通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增loxP位点和Cre基因进行基因型鉴定;通过定量PCR以及免疫荧光验证MST1在巨噬细胞中的敲除效率;通过流式细胞术检测肝脏主要免疫细胞群。结果Mst1^(flox/flox)LysM-Cre^(+),即Mst1^(ΔM/ΔM)为巨噬细胞特异性敲除MST1小鼠基因型;qPCR和免疫荧光检测表明骨髓来源的巨噬细胞和腹腔巨噬细胞的MST1敲除效率达70%以上;流式检测表明敲除巨噬细胞MST1基因对小鼠肝脏的主要免疫细胞群无明显影响。结论成功构建巨噬细胞特异敲除MST1小鼠模型,为进一步研究巨噬细胞MST1在临床相关疾病中的作用及机制奠定了基础。 展开更多
关键词 哺乳动物不育系20样激酶1 cre-loxp 巨噬细胞 基因敲除小鼠 Hippo通路
下载PDF
Cre/loxP系统应用于毕赤酵母基因敲除的研究进展
19
作者 王未鲜 韩铭海 《安徽农业科学》 CAS 2023年第15期10-13,17,共5页
毕赤酵母是重组蛋白最常用的表达系统之一,蛋白高水平表达策略一直是领域内最重要的研究课题之一。在后基因组时代,高效而便捷的基因改造是一种有效提高毕赤酵母蛋白表达能力的手段,其中由Cre/loxP系统介导的基因改造技术受到了科研人... 毕赤酵母是重组蛋白最常用的表达系统之一,蛋白高水平表达策略一直是领域内最重要的研究课题之一。在后基因组时代,高效而便捷的基因改造是一种有效提高毕赤酵母蛋白表达能力的手段,其中由Cre/loxP系统介导的基因改造技术受到了科研人员的广泛关注。综述了Cre/loxP系统的基本原理、应用于毕赤酵母基因敲除的技术路线及其关键的技术问题。 展开更多
关键词 毕赤酵母 cre/loxp 基因敲除
下载PDF
双筛选标记打靶载体的构建及其功能鉴定 被引量：4
20
作者 李军华 韩翠芹 +1 位作者 邓捷 王华岩 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1696-1703,共8页
利用DNA同源重组方法(基因打靶)对动物基因组进行修饰是转基因研究的重要手段之一。为了构建一个高效的通用型基因打靶载体,本研究以pBS246质粒为骨架,在两个LoxP序列之间插入正筛选标记新霉素磷酸转移酶(neo)基因和绿色荧光蛋白(EGFP)... 利用DNA同源重组方法(基因打靶)对动物基因组进行修饰是转基因研究的重要手段之一。为了构建一个高效的通用型基因打靶载体,本研究以pBS246质粒为骨架,在两个LoxP序列之间插入正筛选标记新霉素磷酸转移酶(neo)基因和绿色荧光蛋白(EGFP)基因;在两个LoxP序列外侧分别插入两组携带"8碱基"酶切位点的多克隆位点序列(MCS-1和MCS-2)和负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因,构建成通用型基因打靶载体pGT-V1,并且在C2C12细胞中验证了载体中各个元件的功能。该载体具有如下特点:1)在载体中引入绿色荧光标记,可以实时监控载体的转染效率,而转染效率的提高为高效基因打靶提供了保证;2)在两个LoxP位点间插入绿色荧光标记,可以直观监测打靶后遗留的筛选标记的去除情况,并且可以通过流式细胞仪或免疫磁珠法,将最终去除了筛选标记的阳性细胞(即丢失绿色荧光的细胞)分选出来,降低筛选标记在中靶细胞中可能产生的负面影响;3)采用"8碱基"酶切位点的MCS序列,便于DNA大片段的连接和重组,极大提高了该载体的通用性。总之,该载体优化了基因打靶的技术手段,为有效开展基因打靶和转基因动物研究提供了新平台。 展开更多
关键词 同源重组 绿色荧光标记 打靶载体 cre-loxp
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 13 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部