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原位冷冻光电关联技术的研究进展
1
作者
卢婧
李尉兴
+1 位作者
徐晓君
纪伟
《中国光学（中英文）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期1275-1286,共12页
冷冻电子断层扫描成像(cryo-ET)是细胞原位解析生物大分子结构的核心技术,cryo-ET的样品厚度需要小于300 nm,冷冻样品聚焦离子束减薄(FIB)是样品制备流程中的必要环节。当前,FIB存在难以迅速精确定位目标区域的问题,原位冷冻光电关联技...
冷冻电子断层扫描成像(cryo-ET)是细胞原位解析生物大分子结构的核心技术,cryo-ET的样品厚度需要小于300 nm,冷冻样品聚焦离子束减薄(FIB)是样品制备流程中的必要环节。当前,FIB存在难以迅速精确定位目标区域的问题,原位冷冻光电关联技术(cryo-CLEM)是一项新兴的技术,对原位冷冻样品分别进行冷冻光镜成像和电镜成像,结合了荧光成像的定位优势和电镜成像的分辨率优势,通过将光镜和电镜图像进行配准,指导FIB对原位冷冻样品减薄,能够极大地提高cryo-ET的样品制备效率。本文介绍了cryo-CLEM中的原位冷冻技术和光电关联成像技术的最新进展和应用情况,重点讨论了超分辨cryo-CLEM成像技术以及嵌入式cryo-CLEM技术,分析了各种方法的优缺点和适用范围,并对cryo-CLEM技术当前面临的主要限制和未来的发展方向进行了展望。
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关键词
光电关联成像
荧光导航聚焦离子束减薄
光学超分辨
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职称材料
MiniSOG蛋白的单克隆抗体制备及初步研究
2
作者
高利萍
武月章
+4 位作者
杨雪花
陈冬冬
肖康
董小平
石琦
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期880-887,共8页
单线态氧产生者(mini singlet oxygen generator,miniSOG)是改造于拟南芥向光素2蛋白而获得的小分子荧光黄素蛋白,由106个氨基酸残基组成。miniSOG被广泛用于电镜及荧光显微镜,并被广泛用于发色团辅助的光灭活(Chromophore-assisted lig...
单线态氧产生者(mini singlet oxygen generator,miniSOG)是改造于拟南芥向光素2蛋白而获得的小分子荧光黄素蛋白,由106个氨基酸残基组成。miniSOG被广泛用于电镜及荧光显微镜,并被广泛用于发色团辅助的光灭活(Chromophore-assisted light inactivation,CALI)蛋白、DNA或RNA,并结合免疫光敏用于癌症的治疗,以及结合细胞消融用于神经科学、免疫生物学等。但是目前国内并无商品化的miniSOG抗体,为了辅助课题研究,制备抗miniSOG蛋白的单克隆抗体,本研究根据miniSOG基因的ORF区序列构建miniSOG-GST重组蛋白的原核表达载体PGEX-4T-1-miniSOG,然后将该重组质粒转化于BL21感受态大肠杆菌中,异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-DThiogalactoside,IPTG)诱导融合蛋白的表达,并经亲和层析方法进行纯化。将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。筛选获得稳定分泌抗miniSOG的单克隆抗体细胞株,最终选取性能最优的4F9细胞株进行小鼠腹水制备并纯化。单抗4F9亚型为IgG1/Kappa,腹水滴度达到1∶200 000,纯化抗体灵敏度达到5 ng/mL。并通过Western Blot、免疫荧光及免疫组化方法进行特异性鉴定,该单克隆抗体能特异性识别转染细胞和转基因小鼠脑组织中的miniSOG蛋白。本研究在国内首次制备了miniSOG单克隆抗体,将丰富其在其它方面的应用。
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关键词
单线态氧产生者(miniSOG)
光电镜关联(
clem
)
单克隆抗体
原文传递
冷冻聚焦离子束-扫描电镜成像技术研究进展
被引量：
2
3
作者
贾星
孙飞
季刚
《植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期24-29,共6页
冷冻聚焦离子束-扫描电镜成像(Cryo-FIB-SEM)是一种新兴的成像检测技术,在原位进行冷冻聚焦离子束切割和冷冻扫描电镜成像,为研究天然含水状态下生物样品内部未被破坏的原始结构打开了一扇窗口。近年来,该技术在生命科学领域的应用研究...
冷冻聚焦离子束-扫描电镜成像(Cryo-FIB-SEM)是一种新兴的成像检测技术,在原位进行冷冻聚焦离子束切割和冷冻扫描电镜成像,为研究天然含水状态下生物样品内部未被破坏的原始结构打开了一扇窗口。近年来,该技术在生命科学领域的应用研究取得了一系列重要进展。该文对其在冷冻体积连续成像、冷冻光电关联成像、冷冻透射扫描成像、冷冻含水切片制备监控及冷冻扫描图像处理等方面的研究进展进行综述,并展望了该技术在大体积生物样品三维原位成像研究领域的前沿性发展趋势,以期推动Cryo-FIB-SEM技术在生物样品三维结构研究中的应用。
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关键词
冷冻聚焦离子束-扫描电镜成像
冷冻光电关联
冷冻体积连续成像
冷冻透射扫描成像
原文传递
题名
原位冷冻光电关联技术的研究进展
1
作者
卢婧
李尉兴
徐晓君
纪伟
机构
中国科学院生物物理研究所
出处
《中国光学（中英文）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期1275-1286,共12页
基金
国家重点研发计划项目(No.2021YFA1301500)
国家自然科学基金资助项目(No.62105356)
+1 种基金
中国科学院战略性先导科技专项(No.XDB37000000)
中国科学院科研仪器设备研制项目(No.GJJSTD20210001)。
文摘
冷冻电子断层扫描成像(cryo-ET)是细胞原位解析生物大分子结构的核心技术,cryo-ET的样品厚度需要小于300 nm,冷冻样品聚焦离子束减薄(FIB)是样品制备流程中的必要环节。当前,FIB存在难以迅速精确定位目标区域的问题,原位冷冻光电关联技术(cryo-CLEM)是一项新兴的技术,对原位冷冻样品分别进行冷冻光镜成像和电镜成像,结合了荧光成像的定位优势和电镜成像的分辨率优势,通过将光镜和电镜图像进行配准,指导FIB对原位冷冻样品减薄,能够极大地提高cryo-ET的样品制备效率。本文介绍了cryo-CLEM中的原位冷冻技术和光电关联成像技术的最新进展和应用情况,重点讨论了超分辨cryo-CLEM成像技术以及嵌入式cryo-CLEM技术,分析了各种方法的优缺点和适用范围,并对cryo-CLEM技术当前面临的主要限制和未来的发展方向进行了展望。
关键词
光电关联成像
荧光导航聚焦离子束减薄
光学超分辨
Keywords
correlative
light
and
electron microscopy
(
clem
)
fluorescence
navigated
focus
ion
beam(FIB)milling
super
resolution
分类号
Q439 [生物学—生理学]
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职称材料
题名
MiniSOG蛋白的单克隆抗体制备及初步研究
2
作者
高利萍
武月章
杨雪花
陈冬冬
肖康
董小平
石琦
机构
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期880-887,共8页
基金
国家科技重大专项(项目号：2018ZX10711001),题目：病毒感染高通量快速检测与应急筛检技术研究
国家自然科学基金(项目号：81572048),题目：线粒体损伤致朊病毒病分子机制的研究
+2 种基金
国家自然科学基金(项目号：81630062),题目：朊病毒持续感染机制的研究
传染病预防控制国家重点实验室“创新青年基金”(项目号：2015SKLID503),题目：朊病毒病蛋白组学的研究
传染病预防控制国家重点实验室“杰青申报资助”课题(项目号：2019SKLID501)：遗传型朊病毒病发病机制的研究~~
文摘
单线态氧产生者(mini singlet oxygen generator,miniSOG)是改造于拟南芥向光素2蛋白而获得的小分子荧光黄素蛋白,由106个氨基酸残基组成。miniSOG被广泛用于电镜及荧光显微镜,并被广泛用于发色团辅助的光灭活(Chromophore-assisted light inactivation,CALI)蛋白、DNA或RNA,并结合免疫光敏用于癌症的治疗,以及结合细胞消融用于神经科学、免疫生物学等。但是目前国内并无商品化的miniSOG抗体,为了辅助课题研究,制备抗miniSOG蛋白的单克隆抗体,本研究根据miniSOG基因的ORF区序列构建miniSOG-GST重组蛋白的原核表达载体PGEX-4T-1-miniSOG,然后将该重组质粒转化于BL21感受态大肠杆菌中,异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-DThiogalactoside,IPTG)诱导融合蛋白的表达,并经亲和层析方法进行纯化。将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。筛选获得稳定分泌抗miniSOG的单克隆抗体细胞株,最终选取性能最优的4F9细胞株进行小鼠腹水制备并纯化。单抗4F9亚型为IgG1/Kappa,腹水滴度达到1∶200 000,纯化抗体灵敏度达到5 ng/mL。并通过Western Blot、免疫荧光及免疫组化方法进行特异性鉴定,该单克隆抗体能特异性识别转染细胞和转基因小鼠脑组织中的miniSOG蛋白。本研究在国内首次制备了miniSOG单克隆抗体,将丰富其在其它方面的应用。
关键词
单线态氧产生者(miniSOG)
光电镜关联(
clem
)
单克隆抗体
Keywords
mini
singlet
oxygen
generator(miniSOG)
correlative
light
and
electron microscopy
(
clem
)
Monoclonal
antibody(MAb)
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
冷冻聚焦离子束-扫描电镜成像技术研究进展
被引量：
2
3
作者
贾星
孙飞
季刚
机构
中国科学院生物物理研究所
出处
《植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期24-29,共6页
基金
国家自然科学基金(No.31801201)。
文摘
冷冻聚焦离子束-扫描电镜成像(Cryo-FIB-SEM)是一种新兴的成像检测技术,在原位进行冷冻聚焦离子束切割和冷冻扫描电镜成像,为研究天然含水状态下生物样品内部未被破坏的原始结构打开了一扇窗口。近年来,该技术在生命科学领域的应用研究取得了一系列重要进展。该文对其在冷冻体积连续成像、冷冻光电关联成像、冷冻透射扫描成像、冷冻含水切片制备监控及冷冻扫描图像处理等方面的研究进展进行综述,并展望了该技术在大体积生物样品三维原位成像研究领域的前沿性发展趋势,以期推动Cryo-FIB-SEM技术在生物样品三维结构研究中的应用。
关键词
冷冻聚焦离子束-扫描电镜成像
冷冻光电关联
冷冻体积连续成像
冷冻透射扫描成像
Keywords
cryo-focused
ion
beam-scanning
electron microscopy
(Cryo-FIB-SEM)
cryo-
correlative
light
and
electron microscopy
(Cryo-
clem
)
cryo-volume
serial
imaging
cryo-transmission
scanning
electron microscopy
imaging
分类号
Q-334 [生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
原位冷冻光电关联技术的研究进展
卢婧
李尉兴
徐晓君
纪伟
《中国光学（中英文）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
下载PDF
职称材料
2
MiniSOG蛋白的单克隆抗体制备及初步研究
高利萍
武月章
杨雪花
陈冬冬
肖康
董小平
石琦
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
原文传递
3
冷冻聚焦离子束-扫描电镜成像技术研究进展
贾星
孙飞
季刚
《植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
原文传递
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