DiI标记的大鼠骨髓间充质干细胞与乳鼠心肌细胞在聚己内酯薄膜上接触共培养制作心肌补片的实验研究

1

作者 张子畅 穆军升 +2 位作者 周帆 伯平 尤斌 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期525-531,共7页

目的探讨在聚己内酯薄膜上将DiI标记的骨髓间充质干细胞(BMSCs)与乳鼠心肌细胞接触共培养制作心肌补片的可能机制。方法选取5~6周龄SD大鼠2只,分离培养获得SD大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定表面抗原。选取乳鼠15只,分离培养获得乳鼠心肌细胞... 目的探讨在聚己内酯薄膜上将DiI标记的骨髓间充质干细胞(BMSCs)与乳鼠心肌细胞接触共培养制作心肌补片的可能机制。方法选取5~6周龄SD大鼠2只,分离培养获得SD大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定表面抗原。选取乳鼠15只,分离培养获得乳鼠心肌细胞。BMSCs培养至3代,使用DiI染料标记BMSCs。在聚己内酯薄膜上将DiI标记的BMSCs与心肌细胞接触共培养并设为实验组,对照组中将心肌细胞替换为等量未标记的BMSCs。共培养后24 h在荧光显微镜下观察细胞生长情况,并用扫描电镜观察共培养情况。共培养后7 d对细胞进行免疫荧光染色检测心肌标志物表达,在荧光显微镜下观察聚己内酯薄膜上BMSCs表达心肌标志物的情况。共培养的第1、7天使用流式细胞术分析BMSCs的干细胞分化率。使用钙黄绿素单独对心肌细胞染色,再在聚己内酯薄膜上将其与DiI标记的BMSCs接触共培养,观察细胞间染料转移,并对细胞进行免疫荧光染色,检测缝隙连接蛋白43的表达,观察缝隙连接与接触共培养之间的关系。结果流式细胞术鉴定示BMSCs表面CD90、CD44H强阳性,CD11b/c、CD45阴性。共培养后24 h,荧光显微镜下观察到细胞依附于聚己内酯薄膜上,DiI标记的BMSCs发红光,未标记的心肌细胞不发光;扫描电镜下观察到聚己内酯薄膜上细胞数量多,细胞状态正常。共培养第7天,部分DiI标记的BMSCs表达心肌肌钙蛋白T、α-心肌肌动蛋白。流式细胞术分析示第7天实验组的干细胞分化率高于对照组[(20.12±0.15)%比(3.49±0.20)%,P<0.05]。共培养后第2天,缝隙连接蛋白43免疫荧光染色结果示部分BMSCs可见明显绿色点状荧光;共培养后第3天,染料转移试验示部分BMSCs发出明显绿色荧光。结论DiI标记的BMSCs与心肌细胞在聚己内酯薄膜上接触共培养可以制作心肌补片,并且接触共培养促进分化形成心肌补片的机制可能与缝隙连接以及缝隙连接介导� 展开更多

关键词 干细胞 心肌补片 接触共培养 DiI标记 缝隙连接

原文传递

Dil体外标记的大鼠骨髓间充质干细胞与乳鼠心肌细胞接触共培养诱导分化为心肌样细胞的实验研究

2

作者 张子畅 周帆 +3 位作者 郑建伟 穆军升 伯平 尤斌 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2021年第6期4344-4350,共7页

目的对Dil标记的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)与乳鼠心肌细胞(CMs)进行接触共培养,观察接触共培养对Dil标记的干细胞向CMs分化的影响,对其内在机制进行初步探究。在细胞标记下,为干细胞治疗心肌梗死寻找一种合适的诱导分化方法.方法分... 目的对Dil标记的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)与乳鼠心肌细胞(CMs)进行接触共培养,观察接触共培养对Dil标记的干细胞向CMs分化的影响,对其内在机制进行初步探究。在细胞标记下,为干细胞治疗心肌梗死寻找一种合适的诱导分化方法.方法分离培养获得SD大鼠BMSCs,流式细胞鉴定表面标志物分离获得乳鼠CMs.BMSCs培养至3代后,使用Dil染料对BMSCs进行标记.将Dil标记的BMSCs与CMS接触共培养,并设仅有Dil标记的BMSCs为对照组,24 h后在显微镜下观察细胞生长情况.在共培养7日后,使用心肌标志物(cTnT、α-actin)对细胞进行免疫荧光染色,在荧光显微镜下观察干细胞的分化情况.在共培养的第1、7日使用流式分析BMSCs向CMs的定向分化效率。使用钙黄绿素对CMS染色,观察接触共培养细胞间染料转移;使用缝隙连接蛋白43(Cx43)对细胞进行免疫荧光染色,观察缝隙连接与接触共培养之间存在的关系.结果BMSCsM式细胞术鉴定:CD90、CD44H强阳性,CD11b/c、CD45阴性。共培养24h后显微镜下观察可见:细胞贴壁,荧光激发时Dil标记的BMSCs发红光,未标记的CMs不发光第7日,部分Dil标记的BMSCs表达cTnT、α-actin.流式分析显示:实验组第7日干细胞分化率高于对照组(20.06%:2.45%,P<0.05).另外,共培养第2日起,部分BMSCs免疫荧光Cx43染色阳性;并且共培养第1日钙黄绿素在CMs中显示绿色荧光,共培养第3日起部分BMSCs显示绿色荧光:结论Dil标记的BMSCs在与CMS接触共培养下可被诱导分化为心肌样细胞,并且接触共培养促进其分化为心肌样细胞,可能与通过缝隙连接传递相关信号通路有关. 展开更多

关键词 干细胞治疗 骨髓间充质干细胞 心肌细胞 接触共培养 Dil标记

原文传递

细胞共培养方法的研究进展 被引量：10

3

作者 秦燕勤 陈玉龙 李建生 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期765-768,共4页

细胞培养技术是目前体外实验中最常用的方法。单层细胞培养因不能完全模拟多细胞相互作用的体内环境、细胞趋向单一化，而无法探讨多细胞间的相互关系，已不能满足研究者的需求。因此，为了满足科研需要，细胞共培养技术应运而生，其方... 细胞培养技术是目前体外实验中最常用的方法。单层细胞培养因不能完全模拟多细胞相互作用的体内环境、细胞趋向单一化，而无法探讨多细胞间的相互关系，已不能满足研究者的需求。因此，为了满足科研需要，细胞共培养技术应运而生，其方法也在实践中不断改进：从直接接触到间接接触，从二维到三维，细胞共培养模型更接近人体内环境，更有利于研究细胞与细胞之间的相互作用。目前，共培养技术已经被很多学者用于体外生理及病理模型、组织工程、细胞分化研究，为药物研发（包括中药研发）、药物分析以及药物作用机制及部位等研究热点。对有关细胞共培养方法的研究进行综述，总结各种方法的优点和不足，以促进细胞培养方法的不断改进，从而建立更加接近人体的多种细胞共培养体系，甚至模拟人体内循环的体外模型。 展开更多

关键词 细胞共培养 直接接触共培养 间接接触共培养 三维共培养体系

原文传递

共培养体系间充质干细胞对同源内皮祖细胞增殖和血管形成的影响 被引量：10

4

作者 冯文磊 张猛 +3 位作者 徐芳洁 王艳杰 陈雪玲 吴向未 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第3期229-235,共7页

目的临床干细胞治疗心肌梗死可能归因于细胞旁分泌对细胞存活和血管形成的作用,文中探讨小鼠骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在非接触共培养体系中对同源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖和血... 目的临床干细胞治疗心肌梗死可能归因于细胞旁分泌对细胞存活和血管形成的作用,文中探讨小鼠骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在非接触共培养体系中对同源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖和血管形成的影响。方法小鼠骨髓细胞经差速贴壁法分离MSCs与EPCs,以流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测MSCs和EPCs表面标记物,以成骨成脂成软骨诱导分化对MSCs进行功能鉴定,以成血管对EPCs进行功能鉴定。取第3代MSCs和EPCs,按1∶1的细胞比例接种入Transwell共培养系统中,以下室接种EPCs上室接种MSCs为实验组,同时设置相同密度单纯EPCs接种于下室为对照组。采用MTT比色法和Ed U荧光标记法检测MSCs对EPCs增殖能力的影响,采用计数血管样结构数目和联结点数目检测MSCs对EPCs血管形成能力的影响。结果第3代MSCs经FCM检测高表达Sca-1,CD29低表达CD45,CD11b;经诱导可向成骨成软骨成脂方向分化。第3代EPCs经FCM检测高表达CD34、CD133和VEGFR2,在基质胶上可形成血管样结构。MTT比色法和Ed U荧光标记法结果显示与对照组相比,实验组细胞的增殖能力在72 h后显著增强(P<0.05);实验组DNA合成期的细胞比例较对照组显著增多[(89.00±5.30)vs(76.00±3.38),P<0.01)]。倒置显微镜观察结果显示实验组EPCs生成的血管样结构和联结点数目较对照组明显增加[(13.53±2.33)vs(10.80±1.82)、(16.60±2.23)vs(13.07±2.81),P<0.05]。结论利用差速贴壁法可同时分离纯化扩增MSCs和EPCs。EPCs在和MSCs非接触共培养时其增殖能力和血管形成能力都得到提高。 展开更多

关键词 内皮祖细胞 间充质干细胞 非接触共培养 增殖 血管形成

下载PDF 职称材料

骨髓间充质干细胞与胶质瘤细胞非接触共培养后相关生物学特性分析 被引量：8

5

作者 张亚兰 朱静 +3 位作者 田杰 刘官信 张晓萍 邓兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期630-633,共4页

目的在体外通过大鼠胶质瘤C6细胞与大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)非接触共培养,以探明BMSCs是否受到肿瘤微环境的作用获得肿瘤细胞的相关生物学特性。方法通过6孔板结合Transwell小室建立BMSCs和C6... 目的在体外通过大鼠胶质瘤C6细胞与大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)非接触共培养,以探明BMSCs是否受到肿瘤微环境的作用获得肿瘤细胞的相关生物学特性。方法通过6孔板结合Transwell小室建立BMSCs和C6胶质瘤细胞的共培养体系,以共培养组为实验组,设单独培养的BMSCs为对照组;相差显微镜下观察培养后2组细胞形态学的改变;核干细胞因子(nucleostemin,NS)检测细胞增殖力的变化;荧光定量PCR和Western blot检测细胞中mdm2、p53mRNA水平及其蛋白的变化;免疫荧光法检测神经胶质细胞特异的胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)在细胞中的定位及表达。结果共培养后实验组细胞呈现类似胶质瘤细胞样的形态,表达神经胶质细胞特异的GFAP蛋白;NS蛋白反映的细胞增殖能力未发生改变;共培养后实验组p53mRNA水平明显低于对照组(P<0.01),而p53蛋白的表达水平显著高于对照组[(1.63±0.31)vs(0.85±0.12),P<0.05];实验组mdm2mRNA及其蛋白的表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。结论肿瘤微环境可能会使大鼠骨髓间充质干细胞获得肿瘤细胞的相关生物学特性。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 胶质瘤细胞 非接触共培养 GFAP蛋白

下载PDF 职称材料

黄芪多糖体外对非接触共培养HUVECs细胞诱导SGC7901细胞转移的影响 被引量：6

6

作者 唐有为 李烨婷 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期887-892,共6页

目的探索黄芪多糖体外对人血管内皮细胞HUVECs诱导的胃癌细胞系SGC7901细胞EMT转化及其转移的影响。方法 MTT检测黄芪多糖对HUVECs、SGC7901细胞增殖抑制的影响。建立Transwell细胞共培养系统,并分为SGC7901组(单独培养SGC7901细胞)、HU... 目的探索黄芪多糖体外对人血管内皮细胞HUVECs诱导的胃癌细胞系SGC7901细胞EMT转化及其转移的影响。方法 MTT检测黄芪多糖对HUVECs、SGC7901细胞增殖抑制的影响。建立Transwell细胞共培养系统,并分为SGC7901组(单独培养SGC7901细胞)、HUVECs/SGC7901组(共培养HUVECs/SGC7901细胞)、黄芪多糖组(黄芪多糖干预共培养HUVECs/SGC7901细胞),Transwell实验检测各组SGC7901细胞侵袭能力,qRT-PCR检测各组细胞E-cadherin、Vimentin mRNA表达,免疫荧光检测各组细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达,Western blot检测各组细胞LOX、Snail1蛋白表达。结果与单独培养的SGC7901细胞相比,共培养的SGC7901细胞侵袭能力,MMP-2、MMP-9、LOX、Snail1蛋白及Vimentin mRNA表达均升高(P<0. 01),E-Cadherin mRNA表达下降(P<0. 05)。经黄芪多糖干预后,共培养的SGC7901细胞侵袭能力、MMP-2、MMP-9、LOX、Snail1蛋白及Vimentin mRNA表达下降(P<0. 01),ECadherin mRNA表达升高(P<0. 05)。结论与HUVECs细胞共培养可激活SGC7901细胞EMT转化,促进SGC7901细胞转移,但黄芪多糖可通过抑制EMT转化阻止非接触共培养人血管内皮细胞诱导的SGC7901转移。 展开更多

关键词 黄芪多糖 非接触共培养 胃癌 EMT转化

下载PDF 职称材料

非接触性共培养BMSCs和髓核细胞时间差异性的实验研究 被引量：5

7

作者 陈雷 胡秀年 +1 位作者 傅冷西 叶君健 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1369-1374,共6页

目的探讨在非接触性共培养环境下,BMSCs定向分化为类髓核细胞在共培养时间上的差异性,寻找适合体内移植的最佳时间。方法取6只8周龄健康新西兰大白兔(体重1.5～2.0 kg)骨髓及椎间盘髓核,分离、培养BMSCs和髓核细胞并进行免疫细胞化学鉴... 目的探讨在非接触性共培养环境下,BMSCs定向分化为类髓核细胞在共培养时间上的差异性,寻找适合体内移植的最佳时间。方法取6只8周龄健康新西兰大白兔(体重1.5～2.0 kg)骨髓及椎间盘髓核,分离、培养BMSCs和髓核细胞并进行免疫细胞化学鉴定。取原代髓核细胞和第2代生长良好的BMSCs体外建立非接触性共培养模型。观察共培养后第1、3、5代BMSCs的形态学变化并绘制生长曲线;RT-PCR检测共培养5、10、15 d BMSCsⅡ型胶原和蛋白聚糖mRNA表达;Western blot检测共培养5、10、15、20、25、30 d BMSCsⅡ型胶原和蛋白聚糖蛋白的表达。结果 BMSCs相对特异性标记物CD44、CD90表达阳性,造血细胞表面标记物CD34、CD45表达阴性。髓核细胞Ⅱ型胶原、蛋白聚糖表达阳性。共培养后2周BMSCs形态发生明显变化,呈多角形、不规则形;共培养后3代内,BMSCs生长速度无明显差异,随着传代次数增加,细胞增殖明显减慢。RT-PCR检测示共培养后10、15 d BMSCs蛋白聚糖和Ⅱ型胶原mRNA表达明显高于5 d时(P<0.05),而10 d与15 d时差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot检测示共培养后随时间延长细胞表达Ⅱ型胶原和蛋白聚糖蛋白逐渐增加,5、10、15 d间差异有统计学意义(P<0.05),15 d后各时间点间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在非接触性共培养环境下,BMSCs在髓核细胞诱导下可向类髓核细胞分化,表达Ⅱ型胶原和蛋白聚糖,在共培养15 d时达到相对稳定,此时较适合进行体内移植。 展开更多

关键词 BMSCS 髓核细胞 非接触性共培养 兔

原文传递

在不同培养条件下微血管内皮细胞对骨髓造血干细胞增殖影响的比较

8

作者 林凡莉 钱怡 +5 位作者 杨敏 汪姝玥 陈小青 程艳 熊皓 黄纯兰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期594-599,共6页

目的:探讨在体外不同培养条件下微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells,MEC)对骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)增殖的作用。方法:将来源于C57BL/6小鼠肺组织的MEC与来源于GFP小鼠骨髓的HSC用于非接触共培养、2 ... 目的:探讨在体外不同培养条件下微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells,MEC)对骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)增殖的作用。方法:将来源于C57BL/6小鼠肺组织的MEC与来源于GFP小鼠骨髓的HSC用于非接触共培养、2 D接触共培养,并设置对照组HSC单独培养及MEC单独培养。采用细胞计数和CCK-8实验比较各组悬浮细胞在1、3、5和7 d的增殖情况。结果:MEC呈贴壁生长。HSC共培养组及单独培养组细胞在体外培养过程中悬浮细胞计数均有所增加; 2 D接触培养组与非接触共培养组中悬浮细胞比对照组中悬浮细胞更早进入对数生长期; 2 D接触培养组悬浮细胞增殖多于非接触共培养组及HSC单独培养组(P <0. 05);非接触共培养组悬浮细胞增殖多于HSC单独培养组(P <0. 05)。结论:体外培养HSC能使HSC增殖;M EC能促进HSC增殖; M EC还可以通过与HSC非接触共培养促进HSC增殖,这一效应与M EC分泌的细胞因子促HSC增殖作用有关; MEC与HSC直接接触培养对HSC的增殖作用比非接触共培养更强,这一效应与细胞-细胞接触对HSC增殖的调控有关。 展开更多

关键词 微血管内皮细胞 造血干细胞 非接触共培养 接触共培养 细胞增殖

下载PDF 职称材料

非接触式共培养下两种同源间充质干细胞对退变髓核细胞生物学影响的比较研究 被引量：1

9

作者 姜刚强 阮狄克 +5 位作者 周明越 张燕 阳普山 刘子双一 王德利 张超 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期251-256,共6页

目的:比较非接触式共培养条件下两种同源间充质干细胞对退变髓核细胞生物学功能的影响。方法:取同一腰椎间盘突出症患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)、脂肪间充质干细胞(ADSCs)和退变髓核细胞(NPCs),两种间充质干细胞分别与髓核细胞在Tanswe... 目的:比较非接触式共培养条件下两种同源间充质干细胞对退变髓核细胞生物学功能的影响。方法:取同一腰椎间盘突出症患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)、脂肪间充质干细胞(ADSCs)和退变髓核细胞(NPCs),两种间充质干细胞分别与髓核细胞在Tanswell 6孔板中进行非接触式共培养,与ADSCs共培养的NPCs为A组,与BMSCs共培养的NPCs为B组,以单独培养的NPCs为对照组。共培养7d后,提取3组髓核细胞总RNA,进行反转录后,利用Real-Time PCR检测其Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX-9基因的相对表达量。结果:非接触式共培养7d后,Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX-9基因相对表达量对照组分别是1.03±0.28、1.21±0.40和0.94±0.34,A组分别是3.49±0.55、3.88±2.11和2.41±0.91,B组分别是7.60±1.89、6.26±2.96和4.55±1.88。与对照组相比,A、B组髓核细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX-9基因相对表达显著增加(P<0.05);A、B两组间相比也有显著性差异(P<0.05)。结论:非接触式共培养条件下骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞对退变髓核细胞均有一定的激活效应;骨髓间充质干细胞对退变髓核细胞的激活效应更强,可能更加适合于椎间盘退行性疾病的生物学治疗。 展开更多

关键词 非接触式共培养 同源间充质干细胞 退变髓核细胞 比较研究

下载PDF 职称材料

模拟体内肿瘤微环境的乳腺癌细胞与脐静脉内皮细胞的体外共培养 被引量：1

10

作者 杨艳芳 孟盈盈 +5 位作者 叶军 夏学军 李琳 董武军 王洪亮 刘玉玲 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期403-409,共7页

为了更好地模拟体内肿瘤组织复杂的微环境特点,本研究采用间接共培养的方法,构建了乳腺癌细胞(human breast adenocarcinoma cells,MCF-7)和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的体外共培养模型,以用于... 为了更好地模拟体内肿瘤组织复杂的微环境特点,本研究采用间接共培养的方法,构建了乳腺癌细胞(human breast adenocarcinoma cells,MCF-7)和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的体外共培养模型,以用于后续抗血管生成和诱导肿瘤凋亡的双重疗法的体外研究。分别以同期单独培养的MCF-7和HUVECs细胞为对照,对共培养的MCF-7和HUVECs细胞在培养过程中的细胞活性、形态、电阻、周期和血管内皮生长因子(VEGF)含量进行了考察。结果显示,与单独培养的MCF-7和HUVECs细胞相比,共培养的两种细胞活性更高,且发生了变形、结构变疏松的形貌改变,表现出更低的电阻值,细胞周期活跃、增殖明显(S和G_2/M期比例较大),以及有更高的VEGF表达(约1.4~2倍)。该模型很好地模拟了体内肿瘤细胞与肿瘤血管的相互作用关系,可作为设计肿瘤靶向释药系统的体外研究模型。 展开更多

关键词 肿瘤微环境 乳腺癌细胞 脐静脉内皮细胞 体外双层细胞模型 非接触共培养

原文传递

人胚胎干细胞对A549、HepG2细胞增殖与凋亡的影响 被引量：1

11

作者 霍本念 刘洁 +3 位作者 张婷 刘梦楠 王薛 冯涛 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期2236-2242,共7页

本研究以探讨人胚胎干细胞（human embryonic stem cells,h ESCs）对肿瘤细胞A549、Hep G2增殖与凋亡的影响为目的,以h ESCs、A549细胞、Hep G2细胞作为研究对象,采用transwell小室在体外分别建立h ESCs与A549、Hep G2细胞的非接触式共... 本研究以探讨人胚胎干细胞（human embryonic stem cells,h ESCs）对肿瘤细胞A549、Hep G2增殖与凋亡的影响为目的,以h ESCs、A549细胞、Hep G2细胞作为研究对象,采用transwell小室在体外分别建立h ESCs与A549、Hep G2细胞的非接触式共培养的方法,设置Co-A549、Co-Hep G2作为实验组,单独培养的A549、Hep G2细胞作为对照组,采用CCK-8法检测细胞增殖水平,Hochest33258染色和流式细胞术检测细胞的凋亡,q RT-p CR和Western blotting检测Bcl2、Bax及Caspase-3的m RNA转录水平和蛋白表达水平。CCK-8检测显示,实验组细胞的增殖受到显著抑制（p〈0.05）,Hochest33258染色观察到实验组细胞出现核固缩、变形,流式细胞术检测到实验组细胞的凋亡率显著高于对照组（p〈0.05）,q RT-p CR和Western blotting显示h ESCs可上调实验组细胞Bax、Caspase-3的表达,下调Bcl2的表达（p〈0.05）。由此我们得到人胚胎干细胞对肿瘤细胞A549、Hep G2有明显的增殖抑制作用并可诱导A549、Hep G2肿瘤细胞的凋亡的结论,为干细胞治疗肿瘤的研究奠定了实验基础。 展开更多

关键词 人胚胎干细胞 非接触式共培养 肿瘤 凋亡

原文传递

人原代肺动脉内皮-平滑肌接触式共培养方法的技术改进

12

作者 孙理想 武亦娴 +3 位作者 曾晓宁 孔辉 王虹 解卫平 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第6期674-680,共7页

目的:改进人肺动脉内皮细胞(human pulmonary artery endothelial cells,HPAECs)-人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs)接触式共培养方法 ,为更好模拟体内两种细胞间相互作用提供研究平台。方法:采... 目的:改进人肺动脉内皮细胞(human pulmonary artery endothelial cells,HPAECs)-人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs)接触式共培养方法 ,为更好模拟体内两种细胞间相互作用提供研究平台。方法:采用微孔聚碳酸酯膜为载体,将HPAECs和HPASMCs接种于微孔膜两侧,建立HPAECs-HPASMCs联合培养模型以模拟正常血管壁两种细胞的结构关系,通过调整细胞种植密度、培养时间、培养液体系、培养基种类、血清浓度等,倒置相差显微镜、Hoechst染色及流式细胞术比较不同条件下接触式共培养模型中细胞贴壁、生长和凋亡的差异,免疫荧光染色观察优化共培养条件后细胞标记物的表达变化。结果:(1)明胶预包被Transwell膜可促进内皮细胞的黏附和生长;(2)渗透压升高增加内皮细胞凋亡;(3)内皮细胞培养基较DMEM、RPMI1640更有利于接触式共培养模型的建立;(4)内皮细胞生长因子为1%、胎牛血清为2%时两种细胞生长稳定;(5)优化共培养条件对两种细胞的自身特性无显著影响。结论:当培养体系为内皮细胞培养基、维持1%内皮细胞生长因子及2%胎牛血清组分条件,可建立稳定的HPAECs-HPASMCs接触式共培养模型,为体外模拟人肺动脉血管壁结构功能和研究两种细胞间相互作用构建了良好平台。 展开更多

关键词 肺动脉内皮细胞 肺动脉平滑肌细胞 接触式共培养 Transwell小室

下载PDF 职称材料