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连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及相互关系研究
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作者 吕世军 李和 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期412-416,共5页
目的观察连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及探讨两者之间的相互关系。方法RT-PCR获得Cx36全长编码区基因片段,与PCR2.1TOPO克隆载体连接测序,亚克隆到pcDNA3真核表达载体,脂质体介导法转染HeLa细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Wes... 目的观察连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及探讨两者之间的相互关系。方法RT-PCR获得Cx36全长编码区基因片段,与PCR2.1TOPO克隆载体连接测序,亚克隆到pcDNA3真核表达载体,脂质体介导法转染HeLa细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Western blotting,双标记免疫荧光和免疫沉淀分析HeLa细胞Cx36和ZO-1表达及关系。结果构建了重组真核表达载体Cx36-pcDNA3,转染的HeLa细胞获得稳定表达Cx36的克隆,Western blotting显示转染的HeLa细胞表达Cx36蛋白。双标记免疫荧光染色显示,HeLa细胞膜之间Cx36呈点状或线状表达,在Cx36表达部位也同样表达ZO-1。免疫沉淀显示细胞裂解液分别与抗ZO-1或抗Cx36抗体共沉淀,抗Cx36或抗ZO-1抗体进行免疫检测,前者在36kD有特异性Cx36蛋白带,后者在220kD处有ZO-1蛋白带。结论转染Cx36的HeLa细胞表达Cx36和ZO-1,两者共表达并且相互结合。 展开更多
关键词 连接蛋白36(cx36) 闭锁小带蛋白1(ZO-1) HELA细胞 RT-PCR WESTEM BLOTTING 双标记免疫荧光 免疫沉淀
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全长和截短型Cx36基因重组载体的构建及在Hela细胞的表达
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作者 王晓琳 吕世军 +2 位作者 李文通 周风华 郑洁 《潍坊医学院学报》 2008年第6期-,共4页
目的V构建全长及截短型Cx36基因重组表达载体,观察其在Hela细胞的表达。方法RTPCR获得全长及截短型Cx36编码区基因片段,与pCR2.1TOPO克隆载体连接酶切纯化鉴定,亚克隆到pcDNA3构建真核表达载体,脂质体介导法转染Hela细胞,G418抗性筛选... 目的V构建全长及截短型Cx36基因重组表达载体,观察其在Hela细胞的表达。方法RTPCR获得全长及截短型Cx36编码区基因片段,与pCR2.1TOPO克隆载体连接酶切纯化鉴定,亚克隆到pcDNA3构建真核表达载体,脂质体介导法转染Hela细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Western印迹和免疫荧光方法分析Hela细胞Cx36的表达。结果构建了全长及截短型重组真核表达载体Cx36-pcDNA3,转染的Hela细胞获得稳定表达Cx36的基因,Western印迹和免疫荧光显示转染的HeLa细胞表达Cx36蛋白,但转染截短型Cx36的Hela细胞表达量明显少于转染全长Cx36的细胞。结论全长及截短型Cx36基因可在Hela细胞中稳定表达,截短型Cx36基因表达较少。 展开更多
关键词 连接蛋白36 HELA细胞 载体构建 基因表达
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