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连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及相互关系研究
1
作者
吕世军
李和
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期412-416,共5页
目的观察连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及探讨两者之间的相互关系。方法RT-PCR获得Cx36全长编码区基因片段,与PCR2.1TOPO克隆载体连接测序,亚克隆到pcDNA3真核表达载体,脂质体介导法转染HeLa细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Wes...
目的观察连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及探讨两者之间的相互关系。方法RT-PCR获得Cx36全长编码区基因片段,与PCR2.1TOPO克隆载体连接测序,亚克隆到pcDNA3真核表达载体,脂质体介导法转染HeLa细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Western blotting,双标记免疫荧光和免疫沉淀分析HeLa细胞Cx36和ZO-1表达及关系。结果构建了重组真核表达载体Cx36-pcDNA3,转染的HeLa细胞获得稳定表达Cx36的克隆,Western blotting显示转染的HeLa细胞表达Cx36蛋白。双标记免疫荧光染色显示,HeLa细胞膜之间Cx36呈点状或线状表达,在Cx36表达部位也同样表达ZO-1。免疫沉淀显示细胞裂解液分别与抗ZO-1或抗Cx36抗体共沉淀,抗Cx36或抗ZO-1抗体进行免疫检测,前者在36kD有特异性Cx36蛋白带,后者在220kD处有ZO-1蛋白带。结论转染Cx36的HeLa细胞表达Cx36和ZO-1,两者共表达并且相互结合。
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关键词
连接蛋白
36
(
cx
36
)
闭锁小带蛋白1(ZO-1)
HELA细胞
RT-PCR
WESTEM
BLOTTING
双标记免疫荧光
免疫沉淀
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职称材料
全长和截短型Cx36基因重组载体的构建及在Hela细胞的表达
2
作者
王晓琳
吕世军
+2 位作者
李文通
周风华
郑洁
《潍坊医学院学报》
2008年第6期-,共4页
目的V构建全长及截短型Cx36基因重组表达载体,观察其在Hela细胞的表达。方法RTPCR获得全长及截短型Cx36编码区基因片段,与pCR2.1TOPO克隆载体连接酶切纯化鉴定,亚克隆到pcDNA3构建真核表达载体,脂质体介导法转染Hela细胞,G418抗性筛选...
目的V构建全长及截短型Cx36基因重组表达载体,观察其在Hela细胞的表达。方法RTPCR获得全长及截短型Cx36编码区基因片段,与pCR2.1TOPO克隆载体连接酶切纯化鉴定,亚克隆到pcDNA3构建真核表达载体,脂质体介导法转染Hela细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Western印迹和免疫荧光方法分析Hela细胞Cx36的表达。结果构建了全长及截短型重组真核表达载体Cx36-pcDNA3,转染的Hela细胞获得稳定表达Cx36的基因,Western印迹和免疫荧光显示转染的HeLa细胞表达Cx36蛋白,但转染截短型Cx36的Hela细胞表达量明显少于转染全长Cx36的细胞。结论全长及截短型Cx36基因可在Hela细胞中稳定表达,截短型Cx36基因表达较少。
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关键词
连接蛋白
36
HELA细胞
载体构建
基因表达
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职称材料
题名
连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及相互关系研究
1
作者
吕世军
李和
机构
华中科技大学同济医学院组织学与胚胎学系
出处
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期412-416,共5页
基金
国家留学基金委资助项目(21837048)
文摘
目的观察连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及探讨两者之间的相互关系。方法RT-PCR获得Cx36全长编码区基因片段,与PCR2.1TOPO克隆载体连接测序,亚克隆到pcDNA3真核表达载体,脂质体介导法转染HeLa细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Western blotting,双标记免疫荧光和免疫沉淀分析HeLa细胞Cx36和ZO-1表达及关系。结果构建了重组真核表达载体Cx36-pcDNA3,转染的HeLa细胞获得稳定表达Cx36的克隆,Western blotting显示转染的HeLa细胞表达Cx36蛋白。双标记免疫荧光染色显示,HeLa细胞膜之间Cx36呈点状或线状表达,在Cx36表达部位也同样表达ZO-1。免疫沉淀显示细胞裂解液分别与抗ZO-1或抗Cx36抗体共沉淀,抗Cx36或抗ZO-1抗体进行免疫检测,前者在36kD有特异性Cx36蛋白带,后者在220kD处有ZO-1蛋白带。结论转染Cx36的HeLa细胞表达Cx36和ZO-1,两者共表达并且相互结合。
关键词
连接蛋白
36
(
cx
36
)
闭锁小带蛋白1(ZO-1)
HELA细胞
RT-PCR
WESTEM
BLOTTING
双标记免疫荧光
免疫沉淀
Keywords
connexin
36
(
cx
36
)
Zonula
occludens
protein
1
(ZO-1)
HeLa
cells
RT-PCR
Western
blotting
Double
immunofluorescence
Immunoprecipitation
分类号
R329.24 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
全长和截短型Cx36基因重组载体的构建及在Hela细胞的表达
2
作者
王晓琳
吕世军
李文通
周风华
郑洁
机构
潍坊医学院病理学教研室
出处
《潍坊医学院学报》
2008年第6期-,共4页
文摘
目的V构建全长及截短型Cx36基因重组表达载体,观察其在Hela细胞的表达。方法RTPCR获得全长及截短型Cx36编码区基因片段,与pCR2.1TOPO克隆载体连接酶切纯化鉴定,亚克隆到pcDNA3构建真核表达载体,脂质体介导法转染Hela细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Western印迹和免疫荧光方法分析Hela细胞Cx36的表达。结果构建了全长及截短型重组真核表达载体Cx36-pcDNA3,转染的Hela细胞获得稳定表达Cx36的基因,Western印迹和免疫荧光显示转染的HeLa细胞表达Cx36蛋白,但转染截短型Cx36的Hela细胞表达量明显少于转染全长Cx36的细胞。结论全长及截短型Cx36基因可在Hela细胞中稳定表达,截短型Cx36基因表达较少。
关键词
连接蛋白
36
HELA细胞
载体构建
基因表达
Keywords
connexin
36
(
cx
36
)
Hela
cells
Construction
vector
Gene
expression
分类号
R [医药卫生]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及相互关系研究
吕世军
李和
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
下载PDF
职称材料
2
全长和截短型Cx36基因重组载体的构建及在Hela细胞的表达
王晓琳
吕世军
李文通
周风华
郑洁
《潍坊医学院学报》
2008
0
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职称材料
已选择
0
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引证文献
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