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复合探针荧光定量PCR方法的建立 被引量:11
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作者 陈苏红 王小红 +1 位作者 张敏丽 王升启 《生物技术通讯》 CAS 2003年第2期127-130,共4页
为了对特定基因进行实时检测,根据荧光能量转移(FRET)原理,设计及合成了一种新的FRET复合探针,该探针由一条长的荧光杂交探针和短的淬灭探针构成,其中荧光探针5'端接一荧光素分子,3'端接一延伸阻断分子磷酸,淬灭探针3'端连... 为了对特定基因进行实时检测,根据荧光能量转移(FRET)原理,设计及合成了一种新的FRET复合探针,该探针由一条长的荧光杂交探针和短的淬灭探针构成,其中荧光探针5'端接一荧光素分子,3'端接一延伸阻断分子磷酸,淬灭探针3'端连接一个淬灭分子对甲基红,淬灭探针与荧光探针5'端互补,无模板时,该探针杂交形成复合探针,无荧光产生,当有模板时,荧光探针与模板杂交,荧光不能被淬灭,产生的荧光与模板量成正比。根据复合探针的反应原理,研究了该探针的FRET性质及影响因素包括淬灭探针及扩增片段长度、荧光探针与淬灭探针的合适比例及镁离子浓度。实验结果显示淬灭探针及扩增片段长度对复合探针的作用有明显的影响,本实验采用淬灭探针长21个核苷酸,扩增片段长127bp,荧光探针与淬灭探针的合适比例为1∶1,镁离子浓度为3mmol/L,可获得最佳的反应体系;该复合探针合成简单,淬灭彻底,具有良好的准确性与特异性,敏感性达102拷贝,并具有较宽的动力学定量范围,可对102~109拷贝范围内的待检样品进行准确的定量。复合探针技术可应用于病毒感染水平、转基因拷贝数及单核苷酸多态性等检测。 展开更多
关键词 复合探针 荧光定量PCR 荧光能量转移 FRET 特定基因 实时检测
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复合探针实时荧光PCR检测大肠杆菌O157:H7 被引量:16
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作者 陈苏红 张敏丽 +4 位作者 张政 朱水荣 杨宁敏 姚军 王升启 《解放军预防医学杂志》 CAS 北大核心 2005年第6期403-405,共3页
目的建立一种快速、准确、特异的肠出血性大肠杆菌O157:H7的定量检测方法。方法以rfbE基因作为待检靶基因,根据复合探针荧光定量分析原理设计检测引物和探针,建立检测大肠杆菌O157:H7的实时荧光定量PCR方法。并对本方法检测的特异性、... 目的建立一种快速、准确、特异的肠出血性大肠杆菌O157:H7的定量检测方法。方法以rfbE基因作为待检靶基因,根据复合探针荧光定量分析原理设计检测引物和探针,建立检测大肠杆菌O157:H7的实时荧光定量PCR方法。并对本方法检测的特异性、灵敏度、重复性等进行评价。结果所有O157:H7的检测结果均为阳性,而所有其它菌株检测结果均为阴性;该方法检测的灵敏度可达10 cfu.mL-1,定量检测的批间和批内差异均小于5%。在模拟污染牛奶中,可检出1×101cfu.μL-1的细菌。结论本文建立的复合探针实时荧光定量PCR技术能快速准确、特异、敏感地对大肠杆菌O157:H7进行定量分析,为大肠杆菌O157:H7的检测提供了新的方法。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 实时荧光PCR 复合探针法
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荧光法研究牛血清白蛋白与三羟基苯基荧光酮-钼(Ⅵ)配合物探针的作用机理 被引量:8
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作者 黄建华 马洪敏 +3 位作者 孙舒婷 陈欣 董海霞 魏琴 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1899-1902,共4页
用荧光光谱法研究了三羟基苯基荧光酮(TH-PF)-钼(Ⅵ)配合物与牛血清白蛋白的结合反应。探讨了TH-PF-Mo(Ⅵ)配合物对蛋白质内源荧光的猝灭机理,并测定了不同温度下的结合常数,温度为25℃时,荧光猝灭法测得该反应的结合常数为K=4.78×... 用荧光光谱法研究了三羟基苯基荧光酮(TH-PF)-钼(Ⅵ)配合物与牛血清白蛋白的结合反应。探讨了TH-PF-Mo(Ⅵ)配合物对蛋白质内源荧光的猝灭机理,并测定了不同温度下的结合常数,温度为25℃时,荧光猝灭法测得该反应的结合常数为K=4.78×104L.mol-1,温度为40℃时,荧光猝灭法测得该反应的结合常数为K=3.72×104L.mol-1。根据F rster非辐射能量转移理论,确定了给体-受体之间的作用距离和能量转移效率(E=0.314),并根据热力学参数确定了TH-PF-Mo(Ⅵ)配合物与牛血清白蛋白之间的作用力类型,以静电引力为主。 展开更多
关键词 荧光猝灭 蛋白质 三羟基苯基荧光酮 配合物探针 作用机理
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复合探针实时荧光PCR技术快速检测海产品中副溶血性弧菌方法的建立 被引量:5
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作者 闻洁 陆利霞 熊晓辉 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期866-870,共5页
副溶血性弧菌是一种食源性致病菌,海产品和其制品海鲜酱油等最容易被副溶血性弧菌污染,而副溶血性弧菌寄生于鲜虾、海鲜酱油等复杂的食品基质中有时却很难被检测出。以快速检测食品中的副溶血性弧菌为目的,针对副溶血性弧菌的tlh基因,... 副溶血性弧菌是一种食源性致病菌,海产品和其制品海鲜酱油等最容易被副溶血性弧菌污染,而副溶血性弧菌寄生于鲜虾、海鲜酱油等复杂的食品基质中有时却很难被检测出。以快速检测食品中的副溶血性弧菌为目的,针对副溶血性弧菌的tlh基因,设计引物和复合探针,采用实时荧光PCR方法检测鲜虾和海鲜酱油中的副溶血性弧菌,得出以下结论,该方法检测副溶血性弧菌具有较强的特异性和灵敏度,当鲜虾(固体)中的样品菌含量为10~3cfu·g^(-1)或海鲜酱油中的样品菌含量为10~3cfu·m L^(-1)时,无需增菌培养,即可快速检出。增菌6~8 h即可检出鲜虾(固体)或海鲜酱油(液体)的1cfu的副溶血性弧菌。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 聚合酶链式反应 复合探针 荧光
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复合探针实时荧光PCR检测细菌耐药基因bla_(NDM-1)方法的建立 被引量:2
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作者 吕虹 刘志红 +3 位作者 刘琪琦 孙晓彦 陈苏红 王升启 《生物技术通讯》 CAS 2012年第3期411-414,共4页
目的:建立一种检测编码新德里金属β内酰胺酶1(NDM-1)的细菌耐药基因blaNDM-1的复合探针实时荧光PCR方法。方法:基于复合探针技术原理,以blaNDM-1基因作为待检靶基因建立检测方法,对PCR扩增体系中镁离子浓度、PCR退火温度等进行优化,并... 目的:建立一种检测编码新德里金属β内酰胺酶1(NDM-1)的细菌耐药基因blaNDM-1的复合探针实时荧光PCR方法。方法:基于复合探针技术原理,以blaNDM-1基因作为待检靶基因建立检测方法,对PCR扩增体系中镁离子浓度、PCR退火温度等进行优化,并对检测的灵敏性、特异性、重复性等进行评价。结果:优化了最佳反应体系和扩增条件;以灵敏度质控品进行灵敏度实验,最低检测限可达2拷贝/体系;非耐药性菌株的检测结果均为阴性;批间批内变异系数均小于5%;只有产NDM-1的鲍曼不动杆菌检测为阳性,其他377株临床分离菌和阴性对照均无响应。结论:建立了检测含blaNDM-1基因的菌株的方法,具有很好的灵敏性、特异性和重复性。 展开更多
关键词 新德里金属β内酰胺酶1 blaNDM-1基因 实时荧光PCR 复合探针 分子诊断技术
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霍乱弧菌O139实时荧光PCR检测方法的建立及应用 被引量:2
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作者 陈苏红 张政 +6 位作者 张敏丽 杨宁敏 姚军 朱水荣 程苏云 丁雨 王升启 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2005年第6期509-511,共3页
目的:建立检测霍乱弧菌O139的实时荧光PCR检测方法,为霍乱弧菌O139的检测提供快速、敏感、特异的检测手段。方法:用复合探针法荧光PCR检测技术,检测O139特异基因———编码糖基转移酶的基因。结果:本方法特异性好,检测非O139肠道菌均无... 目的:建立检测霍乱弧菌O139的实时荧光PCR检测方法,为霍乱弧菌O139的检测提供快速、敏感、特异的检测手段。方法:用复合探针法荧光PCR检测技术,检测O139特异基因———编码糖基转移酶的基因。结果:本方法特异性好,检测非O139肠道菌均无响应;灵敏度高,可检测低至10 CFU的细菌;重复性较好,批间批内变异系数均小于3%。对采自浙江省O139霍乱弧菌感染患者的335份标本进行检测,共有133份为阳性,而采用常规细菌培养法,仅检测出90份阳性。结论:本方法的建立为霍乱的诊断提供了又一有效手段。 展开更多
关键词 实时荧光PCR 复合探针法 霍乱弧菌O139
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基于银纳米粒子-CdTe量子点复合物荧光探针检测水样和血清中L-半胱氨酸 被引量:1
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作者 占鑫 王秋月 吴一微 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期103-107,共5页
利用无荧光的碳量子点-银纳米颗粒(CQDs-AgNPs)中Ag+与CdTe QDs表面S 2-的强亲和作用,通过S-Ag键形成弱荧光的CQDs-AgNPs/CdTe QDs纳米复合物探针。L-半胱氨酸(L-Cys)中-S-与复合物探针中Ag+竞争络合,可使CdTe QDs的荧光恢复,基于L-Cys... 利用无荧光的碳量子点-银纳米颗粒(CQDs-AgNPs)中Ag+与CdTe QDs表面S 2-的强亲和作用,通过S-Ag键形成弱荧光的CQDs-AgNPs/CdTe QDs纳米复合物探针。L-半胱氨酸(L-Cys)中-S-与复合物探针中Ag+竞争络合,可使CdTe QDs的荧光恢复,基于L-Cys对复合物探针的荧光恢复作用,建立了水样和血清中L-Cys的荧光检测新方法。最佳条件下,该方法的检出限和相对标准偏差分别为32 nmol/L和2.6%。方法具有灵敏度高、操作简单的优点,已成功应用于水样和人血清中L-Cys的测定。 展开更多
关键词 复合物探针 CDTE量子点 银纳米颗粒 L-半胱氨酸 荧光恢复
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∧-[Co(edta)]-~氧化[Co(en)_2OX]外界电子转移反应的立体
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作者 章慧 徐志固 俞鼎琼 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1994年第S1期275-279,共5页
研究了水溶液中∧-[Co(edta)] ̄-氧化[Co(en)_2ox]的外界电子转移反应的立体选择性。由氧化剂的∧-学异构体得到Δ-[(Co(en)_2Ox] ̄(4+)的63.4%对映体过量表明在过渡态中形成了∧Δ的... 研究了水溶液中∧-[Co(edta)] ̄-氧化[Co(en)_2ox]的外界电子转移反应的立体选择性。由氧化剂的∧-学异构体得到Δ-[(Co(en)_2Ox] ̄(4+)的63.4%对映体过量表明在过渡态中形成了∧Δ的优先选择。已注意到∧-[Co(edta)]- ̄与[Co(en)_2ox] ̄(4+)的有利缔合离子对具有ΔΔ立体选择性。以上可解释为在电子转移过程的活性前驱络合物中,氧化剂上未受阻的淡基构成的准C_3轴特征的存在增强了∧-[Co(edta)- ̄与[Co(en)_2ox]的氢键相互作用;并且认为在这种情况下优选的离子对取向并不一定有利于电子转移发生。 展开更多
关键词 外界电子转移.立体选择性 络合物探钉 光学活性 过渡态
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Syntheses, Crystal Structures and Luminescent Properties of Two Schiff Base Complexes 被引量:3
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作者 袁帅 张悦佳 +3 位作者 候金颜 刘磬琳 李东平 李永绣 《Chinese Journal of Structural Chemistry》 SCIE CAS CSCD 2016年第6期965-972,共8页
Two new transition metal complexes based on chiral Schiff base ligand, namely Zn(L_1)_2(1) and Cd(L_2)2(2)(L 1=(R,E)-3-(2-hydroxy-3-methoxybenzylideneamino)propane-1,2-diol, L2=(R,E)-2-((2-hydroxy-1-p... Two new transition metal complexes based on chiral Schiff base ligand, namely Zn(L_1)_2(1) and Cd(L_2)2(2)(L 1=(R,E)-3-(2-hydroxy-3-methoxybenzylideneamino)propane-1,2-diol, L2=(R,E)-2-((2-hydroxy-1-phenylethylimino)methyl)-6-methoxyphenol), have been synthesized and characterized. Single-crystal X-ray diffractions reveal that both 1 and 2 crystallize in the same monoclinic space group C_2. 1 is four-coordinated, while 2 is six-coordinated. Complexes 1 and 2 show fluorescent emission at 479 and 580 nm, respectively. Moreover, 1 and 2 exhibit selective and sensitive recognition toward Zn^(2+)/Cd^(2+) ions in the methanol solution. 展开更多
关键词 fluorescence Schiff base complex probe
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蛋白质含量镧(Ⅲ)-铬天青S配合物探针法测定
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作者 陈韵 石展望 黄晓敏 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期307-308,共2页
目的用镧(Ⅲ)-铬天青S配合物光谱探针测定生物样品中蛋白质含量。方法在pH4~6的clrak-lubs(KH2PO4-NaOH)缓冲介质中,蛋白质与镧(Ⅲ)-铬天青S配合物发生结合反应,引起配合物溶液褪色及吸光度降低,在一定范围内其吸光度降低与蛋白... 目的用镧(Ⅲ)-铬天青S配合物光谱探针测定生物样品中蛋白质含量。方法在pH4~6的clrak-lubs(KH2PO4-NaOH)缓冲介质中,蛋白质与镧(Ⅲ)-铬天青S配合物发生结合反应,引起配合物溶液褪色及吸光度降低,在一定范围内其吸光度降低与蛋白质浓度成正比。结果牛血清蛋白(BSA)含量在0~50 mg/L范围内遵循比耳定律,配合物表观摩尔吸光系数ε478=3.3×10^5L/(mol.cm),4 h内稳定。各种蛋白质检出限为0.23~1.12 mg/L,蛋白尿和唾液2种样品回收率分别为92%和105%,相对标准偏差为1.8%,生物体内常见物质基本上不干扰测定。结论该法灵敏度高,稳定性好,抗干扰强,可直接应用于人血清样品及其他生物样品中蛋白质总量的测定。 展开更多
关键词 蛋白质 镧(Ⅲ)-铬天青S配合物探针 分光光度法
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