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无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒纯化工艺的初步建立 被引量：6
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作者 刘丽 郭骐源 +3 位作者 郝建丽 郭丹丹 张雪梅 吴业红 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1100-1104,1110,共6页
目的建立无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒的下游纯化工艺。方法采用40 L反应器,收获无血清悬浮MDCK细胞培养的流感病毒,经澄清浓缩后,添加不同终浓度(1、10、30、50 U/mL)的Benzonase■核酸酶,置37℃酶解不同时间(2、4、6、8 h),优化核... 目的建立无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒的下游纯化工艺。方法采用40 L反应器,收获无血清悬浮MDCK细胞培养的流感病毒,经澄清浓缩后,添加不同终浓度(1、10、30、50 U/mL)的Benzonase■核酸酶,置37℃酶解不同时间(2、4、6、8 h),优化核酸酶去除细胞残留DNA的条件。采用两步层析法,探讨不同线性流速(60、150、300 cm/h)和上样缓冲液盐离子浓度(150、500、1 000 mmol/L)对复合介质纯化效果的影响;探讨不同线性流速(60、150、300 cm/h)对离子层析介质纯化效果的影响。根据确定的参数进行3批次纯化工艺样品的检测。结果病毒浓缩液经10 U/mL Benzonase?核酸酶37℃酶解6 h后,DNA去除率即可达99%以上。确定复合介质的流速为60 cm/h,上样缓冲液组成为150 mmol/L NaCl+50 mmol/L Tris,pH 7.4,确定离子交换介质流速为150 cm/h。3批纯化工艺样品去除了99.94%的宿主细胞残留蛋白和99.99%的残留DNA,残留DNA达欧盟标准,不高于10 ng/剂。结论初步建立了无血清悬浮MDCK细胞流感疫苗的下游纯化工艺。 展开更多
关键词 核酸酶 悬浮MDCK细胞 无血清培养 流感病毒 残留DNA 残留蛋白 柱层析
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