目的:观察独活寄生汤血清对膝骨性关节炎退变软骨细胞Aggrecan和Collagen X mRNA表达的影响。方法:选择6例患者标本均来源于云南省中医医院骨科膝骨性关节炎住院患者,行手术截取的新鲜退变软骨组织,采用组织块法培养原代细胞;MTT法检测...目的:观察独活寄生汤血清对膝骨性关节炎退变软骨细胞Aggrecan和Collagen X mRNA表达的影响。方法:选择6例患者标本均来源于云南省中医医院骨科膝骨性关节炎住院患者,行手术截取的新鲜退变软骨组织,采用组织块法培养原代细胞;MTT法检测传代第一代细胞生长情况,并绘制生长曲线;制备独活寄生汤大鼠含药血清;均取传代第一代的退变软骨细胞,配制5%、10%、20%独活寄生汤含药血清及相应体积比浓度的生理盐水血清作为对照;MTT法检测不同浓度的独活寄生汤血清对退变软骨细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR检测不同给药时间点各组退变软骨细胞Aggrecan和Collagen Ⅹ mRNA的表达。结果:退变软骨细胞传代第一代生长曲线见传代第8天时细胞增殖达到顶峰,故选择细胞传代第8天为给药干预时间点;与含同体积比的生理盐水血清组比较,不同浓度的独活寄生汤血清可对退变软骨细胞增殖产生促进作用(P<0.01),尤以10%独活寄生汤血清更为明显(P<0.05);与含同体积比生理盐水血清组比较,不同时间点的5%、10%、20%独活寄生汤血清干预后的退变软骨细胞Aggrecan mRNA的表达均上调(P<0.01),Collagen Ⅹ mRNA的表达均下调(P<0.01),且以10%独活寄生汤血清组的作用最为明显(P<0.05)。结论:独活寄生汤可能通过调节退变软骨组织的胶原及其蛋白多糖的表达而产生延缓膝骨性关节炎退变软骨组织的部分作用。展开更多
目的观察人膝关节不同退变阶段骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞中微小RNA-140(micro RNA-140,miR-140)表达规律及转染双链miR-140模拟物/抑制物(double strands-miR-140 mimic/inhibitor,ds-miR-140mimic/inhibitor)对OA软骨细胞...目的观察人膝关节不同退变阶段骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞中微小RNA-140(micro RNA-140,miR-140)表达规律及转染双链miR-140模拟物/抑制物(double strands-miR-140 mimic/inhibitor,ds-miR-140mimic/inhibitor)对OA软骨细胞功能的影响。方法根据Kellgren and Lawrence X线分级,膝关节软骨分为正常组(O级)、中期OA组(Ⅲ级)和晚期OA组(Ⅳ级)。各组收集软骨标本6~8例,体外分离及培养软骨细胞,采用第2代软骨细胞进行检测。运用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测各组miR-140相对表达量及Ⅱ型胶原(collagentypeⅡa,COL2A1)及Ⅹ型胶原(Collagentype Xa,COL10A1)的表达情况。向中期OA组软骨细胞转染ds-miR-140mimic/inhibitor后,观察软骨形成因子SRY基因(SRY-related high mobility group box gene9,SOX9),COL2A1及COL10A1表达情况。结果 miR-140在OA软骨细胞中表达显著下降,中、晚期OA组miR-140和正常组相比分别减少78.9%和94.5%(P<0.05),晚期OA组miR-140较中期OA组减少73.9%(P<0.05)。中、晚期OA组SOX9的mRNA较正常组分别减少34.1%和49.3%(P<0.05),COL2A1的mRNA较正常组分别减少36.7%和78.7%(P<0.05),中、晚期OA组COL10A1的mRNA较正常组分别增加1.66倍和2.10倍(P<0.05)。向中期OA组转染ds-miR-140mimic/inhibitor后,SOX9的mRNA分别增加1.95倍和减少59.1%,COL2A1的mRNA分别增加1.87倍和减少68.8%(P<0.05),COL10A1的mRNA分别减少73.0%和增加1.96倍(P<0.05)。结论miR-140在OA软骨细胞中表达显著下降,且随病情加重而进一步减少;转染ds-miR-140 mimic可增加SOX9和COL2A1的表达,同时降低COL10A1的表达。展开更多
文摘目的观察人膝关节不同退变阶段骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞中微小RNA-140(micro RNA-140,miR-140)表达规律及转染双链miR-140模拟物/抑制物(double strands-miR-140 mimic/inhibitor,ds-miR-140mimic/inhibitor)对OA软骨细胞功能的影响。方法根据Kellgren and Lawrence X线分级,膝关节软骨分为正常组(O级)、中期OA组(Ⅲ级)和晚期OA组(Ⅳ级)。各组收集软骨标本6~8例,体外分离及培养软骨细胞,采用第2代软骨细胞进行检测。运用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测各组miR-140相对表达量及Ⅱ型胶原(collagentypeⅡa,COL2A1)及Ⅹ型胶原(Collagentype Xa,COL10A1)的表达情况。向中期OA组软骨细胞转染ds-miR-140mimic/inhibitor后,观察软骨形成因子SRY基因(SRY-related high mobility group box gene9,SOX9),COL2A1及COL10A1表达情况。结果 miR-140在OA软骨细胞中表达显著下降,中、晚期OA组miR-140和正常组相比分别减少78.9%和94.5%(P<0.05),晚期OA组miR-140较中期OA组减少73.9%(P<0.05)。中、晚期OA组SOX9的mRNA较正常组分别减少34.1%和49.3%(P<0.05),COL2A1的mRNA较正常组分别减少36.7%和78.7%(P<0.05),中、晚期OA组COL10A1的mRNA较正常组分别增加1.66倍和2.10倍(P<0.05)。向中期OA组转染ds-miR-140mimic/inhibitor后,SOX9的mRNA分别增加1.95倍和减少59.1%,COL2A1的mRNA分别增加1.87倍和减少68.8%(P<0.05),COL10A1的mRNA分别减少73.0%和增加1.96倍(P<0.05)。结论miR-140在OA软骨细胞中表达显著下降,且随病情加重而进一步减少;转染ds-miR-140 mimic可增加SOX9和COL2A1的表达,同时降低COL10A1的表达。
